荧光共振能量转移 (FRET)

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荧光共振能量转移(FRET)是两个发色团,供体分子与受体分子之间的一种能量转移现象。当这两者接近时,供体的电子激发态能量可通过分子内长程偶极-偶极耦合以非辐射方式转移到受体。这一过程导致供体荧光强度减弱,激发态寿命减少,而受体荧光强度增强。FRET的效率与分子间的距离呈反六次方关系,使得它在研究生物现象,如受体-配体相互作用、空间分布、蛋白质复合物组装以及膜电位传感等领域中成为一项有价值的技术。

AAT Bioquest提供多种荧光供体和受体对以及非荧光Tide Quencher™和BXQ染料,用于工程基于FRET的生物传感器。这些工具可用于研究冠状病毒蛋白酶活性,进行免洗、时间分辨FRET测定,并监测G蛋白偶联受体系统中腺苷酸环化酶的激活。

FRET的实现需满足三个关键条件。首先,供体和受体分子需非常接近,通常在10-100 Å(1-10 nm)范围内。FRET效率与分子间距离的关系通过Förster半径R0表示,R0值通常在10-100 Å之间。在此范围内,具有较高R0值的FRET对更有利于FRET发生。

其次,受体的吸收或激发光谱需与供体的荧光发射光谱重叠。重叠程度,即光谱重叠积分(Jλ),越高,FRET发生的可能性越大。光谱重叠有助于能量的有效转移。

第三,供体和受体的跃迁偶极子方向需大致平行,以确保能量有效转移。这些条件共同作用,使得FRET成为探索生物系统内分子间相互作用的有力工具。

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