茶叶中多酚类物质的提取与快速含量测定

第２９卷第８期　湖南科技学院学报　、ｂ１．２９　Ｎｏ．８　２００８年８月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｕｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ａｕｇ．２００８　茶叶中多酚类物质的提取与快速含量测定　戴永强赵雨云曾何华　（湖南科技学院生命科学与化学工程系，湖南永州４２５１００）　摘要：建立了一种简便快速的以没食子酸为基准物质，酒石酸亚铁作为显色剂，测定茶多酚含量的分光光度法，测定　的结果令人满意。对茶多酚浸提进行了正交实验，结果表明浸提的最佳条件是７０％的乙醇按１：２０的物料比浸提３０ｍｉｎ，温　度为７０℃，提取次数为一次。最后对浸提液进行萃取提纯。　关键词：茶多酚；茶叶；含量测定　中图分类号：００６５７．３２　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—２２１９（２００８）０８－００５５－０２　茶多酚是茶叶的次生代谢产物，是包括儿茶素类、黄酮　１．３．２精密度实验取茶多酚样品重复测定６次，计算相　类、花色素类、酚酸、缩酚酸类及聚合酚类等多种多酚类化　对标准偏差。　合物的总称，含量约占茶叶干物质总量的１５～３０％，随着茶　１Ｉ３Ｉ３回收率实验进行２种不同浓度的加标回收实验，　叶的种类不同、茶叶季节的差别、茶叶的生长期的不同及提　计算回收率。　取工艺的差别而有所不同“Ｊ。　１．３．４样品测定取所得茶多酚适量定容于２５０ｍＬ容量　茶多酚因其良好的抗氧化性而在食品、药品和化妆品工　瓶中，取液体样品１　ｍＬ于１０ｍＬ具塞比色管中，按标准曲　业中具有良好的应用前景口，３］ｏ目前，食品中多酚类化合物的　线项下同样操作，根据标准曲线计算茶多酚含量。　测定方法主要有高锰酸钾滴定法、光谱分析测定法、色谱分　１　Ｉ３．５茶多酚的提取与精制对影响茶多酚得率的浸提　析测定法，酶法和生物传感器法等【４．　。本文在前人工作的基　时间、浸提温度、浸提次数、料液比和乙醇溶液浓度分别作　础上［６１建立了一种以没食子酸为基准物质快速测定茶叶中　单因素实验。根据单因素实验的结果，以温度、乙醇浓度、　多酚类物质的光谱方法，并对有机溶剂萃取多酚类物质进行　浸提时间、浸提次数做四因素三水平正交实验，进行极差分　了研究。　析。因素水平表见表３。　分别取氯仿、石油醚、乙醚、苯和乙酸乙酯作为萃取剂，　１材料与方法　对茶提取液的浓缩液进行萃取，测定萃取残液中咖啡碱　１．１仪器　和茶多酚的含量，进行比较。萃取液以水浴回收萃取剂后真　ＵＶ－２４０１ＰＣ紫外光光度计（ＳＨＩＡＭＡＤＵ），集热式磁力　空干燥称重。　搅拌加热器（郑州长城科工贸有限公司），循环水式真空泵（郑　州长城科工贸有限公司），电子天平（ＳＨＩＡＭＡＤＵ）。　２结果与分析　１．２试剂　２．１茶多酚的含量测定　信阳毛尖购自市场，没食子酸、无水乙醇、四水合酒石　按２．１．１项下制得标准曲线Ｙ＝１．３２９７ｘ＋０．０３３，回归系　酸钾钠、七水合硫酸亚铁、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾等试剂　数Ｒ＝０．９８７８。精密度及回收率实验结果见表１和表２。结　均为分析纯。　果表明，此方法的精密度良好，平均加样回收率为９８．２５％。　１．３实验方法　用分光光度法测得吸光度，茶多酚的含量按下式计算：　１．３．１标准曲线的绘制准确称取没食子酸０．０５　ｇ，定容于　茶多酚（％）－－ｃ×ｌＯ０／（ｍ×Ｖ／１００×１０００）　１００　ｍＬ容量瓶，配制成０．５　ａｒｇ／ｍＥ没食子酸标准溶液。取七　式中Ｃ为标准曲线含量（ｒｎｇ），ｍ为称取样品质量（　，Ｖ为　水合硫酸亚铁０．１０００　ｇ和四水合酒石酸钾钠０．５０００　ｇ，用蒸　吸取样取体积（ｍＬ）。称茶叶１．００００ｇ经过浸提后，测得吸光　馏水溶解定容于１００　ｍＬ的容量瓶中，制得酒石酸亚铁溶液。　度为０．８１２，根据标准曲线计算得Ｃ为０．５８６，代入上式得　吸取标准溶液０．１，０．２，０．４，０．６，０．８，１．０　ｍＬ于１０　ｍＬ　茶多酚的含量为１４．６７％。　具塞试管，加酒石酸亚铁溶液２　ｍＬ，加ｐＨ＿７．５磷酸缓冲液　至５ｍＬ，加水至１０ｍＬ刻度，在５３５ｎｍ处测定吸光度，以　表１精密度实验结果　没食子酸浓度对吸光度绘制标准曲线。　Ｔａｂ　１　Ｒｅｓｕｋｓ　ｏｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｎ　Ａｃｃｕｒａｃｙ　项目　２　３　４　５　６　收稿日期：２００８－－０５—１２　作者简介：戴永强（１９８０－－），湖南湘潭人，硕士，研　吸光度（Ａ）０．２９２　０．２９０　０．２９２　０．２９２　０．２９０　０．２９０　０．２９１　０．８４　究方向为天然产物化学。　５５　维普资讯 http://www.cqvip.com 表２加样回收率实验结果　表４不同溶剂萃取后提取残液中咖啡碱和茶多酚的含量　Ｔａｂ　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｎ　Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ａＴｂ　４　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｃａｆｆｅｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　ｉｎ　Ｒｅｓｉｄｕａｌ　ａｆｔｅｒ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｂｙ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｓｏｌｖｅｎｔ　表５乙酸乙酯萃取次数对茶多酚提取率的影响　ａＴｂ　５　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｉｔｍｅｓ　ｏｎ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｒａｔｅ　ｏｆＴｅａ　２．２荼多酚的提取与精制　Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　单因素实验结果表明７０＊（２为最佳浸提温度，乙醇浓度　为７０％，浸提２次，浸提时间为３０分钟时提取率最高。在　此基础上进行正交实验，结果见表３。乙醇浓度对浸出率的　影响最大，其次是温度，影响最小的是浸提次数。茶多酚浸　提的最佳条件是温度为７０＂Ｃ，７０％的乙醇按１：２０的物料比　３讨论　浸提３０ｍｉｎ，提取次数为一次。　多酚类物质是茶叶中主要风味物质之一。本文采用没食　表３正交实验表　子酸作为基准物质测定茶叶中茶多酚含量，方法简单快速并　Ｔａｂ　３ＯｒｔｈｏｇｏｎａｌＴｅＳｔ　具有较好的精密度与准确度，具有基准物质没食子酸便宜易　得、对仪器条件要求不高的优点。因此作为一种快速测定方　法，本方法对于茶叶品质的初步鉴定有一定应用价值。但因　为没食子酸易氧化，本方法不适合作为茶多酚含量的精密测　量方法。　采用有机溶剂萃取茶多酚提取液分离纯化茶多酚，结果　乙酸乙酯萃取茶多酚具有不错的效果，且乙酸乙酯的拂点不　高，溶剂回收简单易行，我们认为乙酸乙酯萃取法适用于茶　多酚的纯化。　参考文献：　［１】阮栋梁，张英峰，王丰玲，等．茶多酚的提取和应用研究进　展［Ｊ】－渤海大学学报，２００７，２８（１）：６—１１．　［２】贡长生．茶多酚的提取和应用研究进展［Ｊ】．现代化工，　１９９９（６）：１４—１６．　２．３荼多酚的精制　［３】王栋，康健．茶多酚的功效、提取和应用前景［Ｊ】－新疆大　分别取氯仿、石油醚、乙醚、苯和乙酸乙酯作为萃取剂，　学学报，２００７，２４（２）：２１７—２２１．　对茶多酚提取液进行萃取，结果见表４。由表可看出，咖啡　［４徐文峰，廖晓玲．４］茶叶中茶多酚的分析测定方法研究进展　碱和茶多酚均不溶于石油醚和苯；咖啡碱在氯仿和乙醚中溶　［Ｊ］．重庆文理学院学报，２００８，２７（２）：５２—５６．　解度较大，茶多酚在乙酸乙酯中溶解度较大。因此采用乙酸　【５】曾盔，刘仲华．用茶叶多酚氧化酶生物传感器测定茶多　乙酯萃取茶多酚，这样可以减少咖啡碱对茶多酚精制的影　酚（英文）【Ｊ］．食品科学，２００６，（０７）：５１－５７．　响。用乙酸乙酯萃取，测定分离纯化前后茶多酚的吸光度的　【６】王丽珠，吴棱，姚元根，等．酒石酸亚铁分光光度法测定　变化以及萃取次数对茶多酚的分离纯化的影响，其结果见表　茶多酚［Ｊ］．光谱实验室，１９９７，１４（３）：５２．５４．　５。萃取次数对茶多酚的产率有较为显著的影响，见表５，　【７】吴卫国，罗纲要．一种从茶叶中提取咖啡碱方法的研究【Ｊ］．　以２次为好；乙酸乙酯与茶多酚浸提液的体积比对萃取也有　茶业通报，２００４，２６（４）：１５７．１５８．　很大的影响。当它们的体积比为１：１时，萃取效果最佳。　（责任编校：黄光文）　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｑｕｉｃｋ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　ｉｎ　Ｔｅａ　ＤＡＩ　Ｙｏｎｇ－ｑｉａｎｇ　ＺＨＡＯ　Ｙｕ—ｙｕｎ　ＺＥＮＧ　Ｈｅ．ｈｕａ　（Ｈｕｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ｎａｄ　Ｅｎ　ｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｙｏｎｇｚｈｏｕ　Ｈｕｎａｎ　４２５１００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｑｕｉｃｋ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｅａ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｇａｌｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｈｔｅ　ｂａｓｅ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　ｆｅ￣ｏｕｓ　ｔａｒｔｒａｔｅ　ａｓ　ａ　ｒｅａｇｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｇａｉｎｅｄ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ：ｔｈｅ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　７０　ｐｅｒｃｅｎｔ，ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ／ｌｉｑｕｉｄ　ｗａｓ　１：２０，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　３０　ｍｉｎｕｔｅｓ，ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　７０℃，ａｎｄ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｏｎｃｅ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｄｏｐｔｉｎｇ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｗａｓ　ａｌｓｏ　ｓｔｕｄｉｅｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｅａ　Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ；Ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；Ｔｅａ　５６