重庆医科大学学报２０１３年第３８卷第９期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１３．Ｖｏ１．３８ Ｎｏ．９） ．．．——９６５．．．—— ＤＯＩ：１０．１１６９９／ｅｙｘｂ２０１３０９０２ 小鼠早期营养过剩诱导子代肥胖动物模型的建立 纪金金，董志 ４０００１６） （重庆医科大学药学院药理教研室，重庆【摘要】目的：观察小鼠早期营养过剩对子代肥胖的影响，为研究儿童肥胖机制提供实验基础。方法：通过减少哺乳期间幼鼠 只数建立早期营养过剩动物模型即母代模型，实验组在子代出生第３天调整为３只，窝，对照组调整为１０只／窝。母乳喂养２１ ｄ 后给予小鼠标准饲料喂养至第８周，与同龄正常雄性ＩＣＲ小鼠交配，得早期营养过剩子代和正常小鼠子代．在小鼠出生第３天． 均调整为１０只／窝。每周测定子代体质量，母乳喂养２１ ｄ后给予小鼠标准饲料喂养，并测定第２３～２９天进食量。在第３Ｏ天处死 小鼠，ＨＥ染色观察性腺周围白色脂肪组织形态。结果：第８周合笼时，早期营养过剩母代平均体质量为（４０．７５±０．８９）ｇ，正常母 代平均体质量为（３３．Ｏ１±１．７１）ｇ（ｔ＝４．０２１，Ｐ＝－０．００７）。与正常小鼠子代相比，早期营养过剩小鼠的子代体质量增加（Ｆ＝４６５．３８７， Ｐ＝０．０００），进食量增加（ｆ＝３．７０９，Ｐ＝０．００６），脂肪细胞体积增大（ｔ－－４．４８７，Ｐ＝０．００１）。结论：小鼠早期营养过剩增加了子代肥胖的危 险。 【关键词】母代；早期营养过剩；子代；肥胖 【中国图书分类法分类号１Ｒ５８９．２ 【文献标志码】Ａ 【收稿日期】２０１２—１１－０６ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｏｂｅｓｉｔｙ ｍｏｄｅｌ ｉｎ ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ ｒａｔｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅａｒｌｙ ｏｖｅｒｆｅｅｄｉｎｇ Ｊｌ Ｊｉｎｊｉｎ，ＤＯＮＧ Ｚｈｉ （Ｔｅａｃｈｉｎｇ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｃｔｉｏｎ ｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅａｄｙ ｏｖｅｒｆｅｅｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｏｂｅｓｉｔｙ ｏｆ ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ ｒａｔｓ ａｎｄ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｅｘｐｅｒｉ一 作者介绍：纪金金，Ｅｍａｉｌ：５０２７２８１７８＠ｑｑ．ｃｏｎ，ｒ 研究方向：药理学。 通信作者：董志，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｉｄｏｎｇＯ７３＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｔｏｍ。 ｍｅｎｔ ｉｎ ｃｈｉｌｄ ｏｂｅｓｉｔｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｅａｒｌｙ ｏｖｅｒｆｅｅｄｉｎｇ ｆｅｍａｌｅ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ３ｒｄ ｄ ａｆｔｅｒ ｂｉｒｔｈ ｂｙ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｔｈｅ ｌｉｔｔｅｒ ｓｉｚｅ ｔｏ ３ ｐｕｐｓ ｐｅｒ ｌｉｔｔｅｒ（ｓｍａｌｌ ｌｉｔｔｅｒ，ＳＬ），ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｉｎ ｃｏｎ— ｔｒａｓｔ ｔｏ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｌｉｔｔｅｒ ｓｉｚｅ ｏｆ １０ ｐｕｐｓ ｐｅｒ ｌｉｔｔｅｒ（ＮＬ）．Ｔｈｅ ｐｕｐｓ ｗｅｒｅ ｗｅａｎｅｄ ｏｎｔｏ ｒｅｇｕｌａｒ ｃｈｏｗ ａｆｔｅｒ ｂｒｅａｓｔ ｆｅｅｄｉｎｇ ｆｏｒ ２１ ｄ． Ａｔ ｔｈｅ ８ｔｈ ｗｅｅｋ，ｔｈｅｓｅ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｂｒｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ｍａｌｅ ｒａｔｓ ａｎｄ ｏｆｆｓｐｒｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅａｒｌｙ ｏｖｅｒｆｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ 基金项目：国家自然科学基金面上资助项目（编号：８１１７３０６６）；国家 科技重大专项重大新药创制资助项目（编号：２０１０ＺＸ０９４０１— ３０６—１—１）：重庆市自然科学基金重点资助项目（编号： ＣＳＴＣ２００９ＢＡ５０８６）。 ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ｎｕｌｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｈｓｇ ｇｅｎｅ １４１９． ｌ Ｊ１．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００２，５１（８）：２４５０－２４５８． 【１５］Ｓｉｄｄｉｑ Ａ，Ｌｅｐｒｅｔｒｅ Ｆ，Ｈｅｒｃｂｅｒｇ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｙｎｏｎｙｍｏｕｓ ｃｏｄｉｎｇ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ａｌｐｈａ２一Ｈｅｒｅｍａｎｓ－ｓｃｈｍｉｄ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ ｉｓ 【１９】Ｗｅｎ Ａ Ｑ，Ｗａｎｇ Ｊ，Ｆｅｎｇ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎ－ ｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ｌｂｅｔａ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｏｎ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ｌｂｅｔａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｈｏｃｋ，２００６，２６（１）：２５－３０． 【２０］Ｇｕ Ｗ，Ｓｈａｎ Ｙ Ａ，Ｚｈｏｕ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ ｏｆ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ－２［Ｊ］．Ａｎｎ Ｓｕｒｇ， ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｉｎ Ｆｒｅｎｃｈ Ｃａｕｃａｓｉａｎｓ｝叨．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００５， ５４（８）：２４７７—２４８１． 【１６】李建华，彭惠民．ＡＨＳＧ基因ＳＮＰｓ与２型糖尿病相关性研究【ＪＪ． 湖北民族学院学报（医学版），２００６，２３（３）：５． ⅡＪ Ｈ．Ｐａｎｇ Ｈ Ｍ．Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ＡＨＳＧ ｇｅｎｅ ＳＮＰｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ２００７，２４６（１）：１５１－１５８． 【２１】Ｓａａｄ Ｍ Ｆ，Ｋｎｏｗｌｅｒ Ｗ Ｃ，Ｐｅｔｔｉｔｔ Ｄ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ａ ｔｗｏ－ｓｔｅｐ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｎｏｎ—ｉｎｓｕｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉｂｅｔａｅｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ，１９９１，９０ ｔｙｐｅ ２ ｄｉｂｅｔｅｓ ｍｅｌａｌｉｔｕｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ （２）：２２９—２３５． 【２２】Ｃｕｉ Ｌ，Ｚｈａｏ Ｈ，Ｚｈａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｔｙｐｅ－ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＰＣＯＳ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ＳＮＰｓ ｉｄｅｎｔｉｉｅｄ ｂｙ ＧＷＡＳ ｉｎ ａ ｌｆａｒｇｅ ｃｏｈｏ￣ｏｆ （Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ），２００６，２３（３）：５． ［１７】Ｂａｌｄｉｎｉ Ｍ，Ｌｏｈｍａｎ Ｉ Ｃ，Ｈａｌｏｎｅｎ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ５’ｆｌａｎｋｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ１４ ｇｅｎｅ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｈａｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｏｍｅｎ［Ｊ］．Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ，２０１３，２８（２）：５３８—５４４． 【２３】Ｍａｔｈｅｒ Ｋ Ｊ，Ｋｗａｎ Ｆ，Ｃｏｒｅｎｂｌｕｍ Ｂ．Ｈｙｐｅｒｉｎｓｕｌｉｎｅｍｉａ ｉｎ ｐｏｌｙｃｙｓ— ｔｉｃ ｏｖａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌｒ ｒｉａｓｋ ｉｎｄｅ－ ｓｏｌｕｂｌｅ ＣＤ１４ ｌｅｖｅｌｓ ａｎｄ ｗｉｔｈ ｔｏｔｌ ｓｅｒｕｍ ｉａｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｅ［Ｊ】．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９９９，２０（５）：９７６－９８３． 【ｌ８】Ｗｒａｙ Ｇ Ａ，Ｈａｈｎ Ｍ Ｗ，Ａｂｏｕｈｅｉｆ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒ肌一 ｐｅｎｄｅｎｔ ｏｆ ｏｂｅｓｉｔｙ［Ｊ１．Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２０００，７３（１）：１５０－１５６． ｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓｌＪＩ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｅｖｏｌ，２００３，２０（９）：１３７７－ （责任编辑：冉明会） 重庆医科大学学报２０１３年第３８卷第９期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１３．Ｖｏ１．３８ Ｎｏ．９） ｇｅｎｅｒａｔｅｄ．Ｏｆｆｓｐｒｉｎｇｓ ｏｆ ｂｏｔｈ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｌｅｄ ａｎｄ ｒａｉｓｅｄ ａｓ １０ ｐｕｐｓ ｐｅｒ ｄａｍ ａｎｄ ｗｅａｎｅｄ ｏｎｔｏ ｒｅｇｕｌａｒ ｃｈｏｗ ｏｎ ｔｈｅ ２１ｓｔ ｄ． Ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ａｎｄ ｄａｉｌｙ ｆｏｏｄ ｉｎｔａｋｅ ｗｅｒｅ ｒｏｕｔｉｎｅｌｙ ｒｅｃｏｒｄｅｄ．Ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｋｉｌｌｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ３０ｔｈ ｄ ａｎｄ ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｅｐｉｄｉｄｙｍａｌ ｆａｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｏｖｅｒｆｅｅｄｉｎｇ ｆｅｍａｌｅ ｒａｔｓ ｗａｓ（４０．７５±Ｏ．８９）ｇ ｗｈｉｌｅ ｔｈａｔ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｆｅｍａｌｅ ｒａｔｓ ｗａｓ（３３．叭±１．７１）ｇ（￡＝４．０２１，Ｐ＝Ｏ．００７）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒａｔｓ，ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｏｖｅｒｆｅｅｄｉｎｇ ｒａｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎ（Ｆ＝４６５．３８７，Ｐ－－Ｏ．０００）ａｎｄ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ（ｔ＝３．７０９，Ｐ＝－０．００６）．Ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｓｉｚｅ ｉｎ ｅｐｉｄｉｄｙｍａｌ ｆａｔ ｗａｓ ｌａｒｇｅｒ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｏｖｅｒｆｅｅｄｉｎｇ ｒａｔｓ ｔｈａｎ ｉｎ ｅｏｒｔｒｏｌ ｒａｔｓ（ｔ＝４．４８７，Ｐ＝－Ｏ．００１）ｂａｓｅｄ ｏｎ ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｍａｔｅｒｎａｌ ｏｂｅｓｉｔｙ ｃａｎ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｏｂｅｓｉｔｙ ｉｎ ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｍａｔｅｒｎａｌ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｅａｒｌｙ ｏｖｅｒｆｅｅｄｉｎｇ；ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｏｂｅｓｉｔｙ 随着生活水平的提高，儿童肥胖已成为世界各 国关注的焦点Ⅲ。肥胖及相关疾病不仅影响儿童的 正常发育，而且增加儿童和青少年的社会及心理问 题 。研究表明儿童肥胖是由遗传和环境多因素造 成的。母代肥胖是子代肥胖的主要原因之一，因为 宫内环境和出生后早期营养对饮食回路的形成有 一定的作用［３】 动物模型是基础研究的重要方法之 一。高脂饮食诱导和转基因是经典的肥胖动物模 型，近几年也有文献报道通过减少哺乳期喂养的动 物只数造成早期营养过剩的肥胖模型 。已有相关 文献［５１报道高脂饮食诱导的母代肥胖对子代肥胖的 影响，而通过减少Ｎ－％期动物只数造成的早期营养 过剩诱导的母代肥胖模型对子代的肥胖报道甚少。 本文通过早期营养过剩诱导母代肥胖的动物模型 研究母代肥胖对子代肥胖的影响。 １材料与方法 １．１动物饲料 标准小鼠饲料（包含１０％脂肪、７０％碳水化合物、２０％蛋 白质），购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号 为“沪饲审（２００８）０４００２”。 １．２实验动物及模型建立 １．２．１第１代动物８周龄ＩＣＲ小鼠（ＳＰＦ级），体质量（２０．０ ４－ ２．０）ｇ，雌雄只数比例２：１，共１２只，购于北京维通利华实验 动物技术有限公司。饲养于重庆医科大学动物中心，温度 （２４±２）。Ｃ，湿度（６０±５）％。 １．２．２第２代动物（即文中的母代）待购买的ＩＣＲ小鼠适 应环境后，将其按雌雄比例为２：１合笼。幼鼠出生只数在８ １２只的动物被用于后续实验研究。动物出生当天记为第１ 天，在小鼠出生第３天，随机调整为１０只／窝，喂养至第２１ 天，筛选出其中的雌性小鼠，自由饮食、饮水。给予标准小鼠 饲料喂养８周，至其性成熟，作为正常母代；在小鼠出生第３ 天，随机调整为３只／窝，喂养至第２１天，筛选出其中的雌性 小鼠，自由饮食、饮水，给予标准小鼠饲料喂养８周，至其性 成熟，作为早期营养过剩母代。 １．２．３第３代动物（即文中的子代）将８周性成熟的正常 母代和早期营养过剩母代都与同龄正常雄性小鼠交配，其子 代分别定义为早期营养过剩子代和正常子代。２组小鼠均在 出生第３天，随机调整为１０只／窝。母乳喂养２１ ｄ，自由摄取 标准小鼠饲料。自由饮水。 ｌ－３体质量和进食量测定 每周固定时问测定体质量（梅特勒一托利多电子天平 ＰＬ２００２一ＩＣ）。早期营养过剩子代组和正常子代组在２１ ｄ断 奶后，小鼠每笼１只饲养，于第２３ ２９天每天早上９：Ｏ０测定 其饲料重，并计算每天进食量（梅特勒一托利多电子天平 ＰＬ２００２－ＩＣ）。 １．４脂肪组织ＨＥ染色 第３０天，用１０％水合氯醛（Ｏ．００４ ｍｌ／ｇ）麻醉处死小鼠， 取性腺周围白色脂肪组织，称重（梅特勒一托利多电子分析天 平ＡＢ１０４一Ｓ）后固定于４％多聚甲醛中４８ ｈ。梯度酒精脱水， 石蜡包埋，切片（４．５ Ｉ，ｚｍ），ＨＥ染色。镜下观察并拍照（Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ５１，Ｅｔ本），用Ｉｍａｇｅ Ｊ１．４０软件进行脂肪细胞体积分析。 １．５统计分析 用ＳＰＳＳ １７．０软件进行统计分析，实验结果用均数±标 准差（ｘ±ｓ）表示，采用两样本均数比较的ｔ检验对各组累积 进食量和脂肪细胞大小进行统计学分析，采用重复测量方差 分析对子代体质量进行统计学分析。以Ｐ≤０．０５为差异有统 计学意义。 ２结果 ２．１母代体质量结果 因为本研究中母代肥胖是早期营养过剩造成的，故选出 生当天、第３周断奶时和第８周性成熟合笼３个关键时间点 分别测定母代体质量。出生当天，正常母代组平均体质 量为（１．７４±０．０１）ｇ，早期营养过剩母代平均体质量为（１．７５± ０．０４）ｇ，出生体质量差异没有统计学意义（ｔ＝０．３８４，Ｐ＝Ｏ．７１４， ｎ＝４）（图１Ａ）：第３周断奶时，正常母代组平均体质量为 （１５．１２－４－０．１７）ｇ，早期营养过剩母代组平均体质量为（１９．４１± ０．３３）ｇ．说明通过减少哺乳期动物只数，造成了动物的早期 营养过剩（ｔ＝ｌ１．４４０，Ｐ＝Ｏ．０００，ｎ＝４）（图１Ｂ）；断奶后２组小鼠 均给予标准小鼠饲料，自由饮食、饮水至其第８厨ｌ生成熟时， 正常母代组平均体质量为（３３．０１±１．７１）ｇ，早期营养过剩母 代组平均体质量为（４０．７５±０．８９）ｇ．表明母鼠体质量增加是 由早期营养过剩引起的（ｔ＝４．０２１，Ｐ＝Ｏ．００７，ｎ＝４）（图１Ｃ）。