·论著·／ＣＩＫ细胞联合顺铂对胃癌ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ－细胞的体外杀伤作用
朱正秋 范凡 蔡红星 裴冬生
【摘要】细胞联合顺铂（对胃癌耐顺铂细胞株ＣＩＫ）ＤＤＰ） 目的 探讨细胞因子诱导的杀伤（／／ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ及亲代敏感细胞株ＳＧＣ７９０１的体外杀伤作用。方法 体外培养ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ及－－分为对照（组、组、组和Ｃ组。ＳＧＣ７９０１细胞，Ａ）ＤＤＰ作用（Ｂ）ＣＩＫ细胞作用（Ｃ）ＩＫ细胞联合ＤＤＰ（Ｄ）－ＭＴＴ法、ＲＴ－ＰＣＲ法和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法分别检测肿瘤细胞增殖、ｍｄｒ１基因ｍＲＮＡ表达和Ｐ －－糖蛋白
（）／蛋白表达。结果 与ＳＰＧＣ７９０１细胞相比，ＤＤＰ对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞的杀伤率明显降低－－－ｇｐ（），／耐药指数为１且与Ｐ＜０．０５．７３。在ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞中，Ｃ、Ｄ组杀伤作用明显高于Ａ组，－。与Ｂ、／ＳＧＣ７９０１细胞比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）Ｃ组相比，Ｄ组对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞的－－／体外杀伤活性明显升高，逆转倍数为１．４１。Ｃ、Ｄ组ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞中ｍｄｒ１基因ｍＲＮＡ、Ｐ－－－ｇｐ
）。结论 Ｃ／蛋白表达均明显低于Ａ组（Ｐ＜０．０５ＩＫ细胞与ＤＤＰ的联合应用使ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞－／的生长受到明显抑制，其可能与ＣＩＫ细胞下调ｍｄｒ１基因ｍＲＮＡ、ＰＧＣ７９０１－－－ｇｐ蛋白表达及增加ＳＤＤＰ细胞对ＤＤＰ的敏感性有关。
【关键词】ＳＧＣ７９０１细胞；ｍｄｒ１基因；Ｐ 杀伤细胞；－－糖蛋白
【（）中图分类号】文献标识码】文章编号】７３５ 【２５３３６８５２０１１２３２７４７０４ Ｒ Ａ 【 ０－－－ＫｉｌｌｉｎｅｆｆｅｃｔｏｆｃｔｏｋｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｃｉｓｌａｔｉｎｏｎａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＳＧＣ － －ｇｙｐｇ ／７９０１ＤＤＰｉｎｖｉｔｒｏ ＺＨＵ Ｚｈｅｎｉｕ，ＦＡＮ Ｆａｎ，ＣＡＩＨｏｎｘｉｎｅｔａｌ．ＤｅａｒｔｍｅｎｔｏＭｅｄｉｃａｌ ｇｑｇｇ，ｐｆ ＯｎｃｏｌｏＡｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｉｔａｌ，Ｘｕｚｈｏｕ ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｅ，Ｘｕｚｈｏｕ２２１００２，ＣＨＩＮＡ ｇｙ，ｆｆｐｇ【】Ａｂｓｔｒａｃｔｂｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｔｈｅｋｉｌｌｉｎｅｆｆｅｃｔｏｆｃｔｏｋｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒ（ＣＩＫ）ｃｅｌｌｓ Ｏ － ｇｇｙｊ
（／ａｓｔｒｉｃｗｉｔｈｃｉｓｌａｔｉｎＤＤＰ）ｏｎｔｈｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓＳＧＣ７９０１ＤＤＰａｎｄＳＧＣ７９０１ｉｎｖｉｔｒｏ．ｃｏｍｂｉｎｅｄ － ｇｐ
／Ｍｅｔｈｏｄｓ ＴｈｅＳＧＣ７９０１ＤＤＰａｎｄＳＧＣ７９０１ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄａｎｄｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ４ｇｒｏｕｓｏｆＡ － ｐ
（），，）ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｓＢ（ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＤＤＰ）Ｃ（ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＣＩＫｃｅｌｌｓａｎｄＤ（ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＣＩＫｃｅｌｌｓｌｕｓ ｐ
），ＤＤＰ．ＴｈｅｃｅｌｌｍＲＮＡｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｄｒ１ｇｅｎｅａｎｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｒｏｔｅｉｎｌｃｏｒｏｔｅｉｎ － －ｐｐｐｐｇｙｐ（）ｗ，ＰｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂＭＴＴ，ＲＴ－ＰＣＲａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍａｒｅｄｗｉｔｈ－ ｇｐｙｐｙｐ
，／（）ＳＧＣ７９０１ｃｅｌｌｓｔｈｅｋｉｌｌｉｎｒａｔｅｏｆＳＧＣ７９０１ＤＤＰｃｅｌｌｓｂＤＤＰｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｄｅｃｒｅａｓｅｄＰ＜０．０５－ － ｇｙｇｙ
／，ａｎｄｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘｗａｓ１．７３．ＩｎｔｈｅＳＧＣ７９０１ＤＤＰｃｅｌｌｓｔｈｅｋｉｌｌｉｎｅｆｆｅｃｔｉｎｏｆＣａｎｄＤｒｏｕｓ － ｇｇｐ
（）ｗａｓｈｉｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎＡａｎｄｏｂｖｉｏｕｓｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒｏｍｔｈａｔｉｎｔｈｅＳＧＣ７９０１ｃｅｌｌｓＰ＜０．０５．Ｉｎｒｏｕ －ｇｙｇｐ
／ｗｉｔｈｏｆＢａｎｄＣ，ｔｈｅｋｉｌｌｉｎａｃｔｉｖｉｔｏｆＳＧＣ７９０１ＤＤＰｃｅｌｌｓｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎＤｃｏｎｔｒａｓｔｒｏｕｓｒｏｕ － ｇｙｇｐｇｐ
／，ａｎｄｉｔｓｒｅｖｅｒｓｅｆｏｌｄｗａｓ１．４１．ＩｎｔｈｅＳＧＣ７９０１ＤＤＰｃｅｌｌｓｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｍｄｒ１ｍＲＮＡａｎｄＰ － － －ｇｐｐ
ｒｏｔｅｉｎｒｏｕｓｒｏｕｉｎｏｆＣａｎｄＤｗｅｒｅａｌｌｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎＡ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｐｇｐｇｐ
／，ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆＣＩＫｃｅｌｌｓａｎｄＤＤＰｃａｎｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｒｏｗｔｈｏｆｔｈｅＳＧＣ７９０１ＤＤＰｃｅｌｌｓ － ｇｙｇ
ｗｈｉｃｈｍａｂｅｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｄｏｗｎｒｅｕｌａｔｉｎｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｍｄｒ１ｍＲＮＡａｎｄＰａｎｄｒｏｔｅｉｎ － － － ｙｇｇｐｇｐｐ
／ｉｎｃｒｅａｓｉｎＳＧＣ７９０１ＤＤＰｃｅｌｌｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｔｏＤＤＰ．－ ｇｙ
【】；；；ｌｃｏｒｏｔｅｉｎＫｅｗｏｒｄｓｔｏｋｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓＳＧＣ７９０１ｃｅｌｌｍｄｒ１ＧｅｎｅＰ Ｃ－ －－ｇｙｐｙｙ
［（）：］Ｊｉａｎｓｕ ＭｅｄＪ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０１１，３７２３２７４７－２７５０． ｇ其 胃癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，
；江苏省卫生厅２０１１年度医学科研项目（Ｚ２０１０１６） 基金项目：
）；江苏省六大人才高峰第七批次项目资助（江苏省高校自然科学０３２
）研究计划资助（０５ＫＪＤ３２０２３１
；作者单位：朱正秋、范凡）２２１００２ 徐州医学院附属医院肿瘤科（
（）；盐城卫生职业技术学院蔡红星徐州医学院肿瘤生物治疗重点实
验室（裴冬生）
：责任作者：蔡红星 Ｅ－ｍａｉｌ８２８８０９９９ｚｚｉｎａ．ｃｏｍ＠ｓｑ
治疗以手术结合化疗为主，虽然胃癌的化疗方案不断完善，但是效果仍不太理想，尤其胃癌多药耐药（的产生，严重影响了化疗效果和患者的生存ＭＤＲ）
质量。肿瘤的生物治疗是继手术、放疗和化疗之后的第四大肿瘤治疗技术，近年来引起了广大学者的
１］
。以细胞因子诱导的杀伤（重视与兴趣［ｃｔｏｋｉｎｅ－ｙ
·２７４８·，江苏医药２０１１年１２月第３７卷第２３期 ＪｉａｎｓｕＭｅｄＪＤｅｃｅｍｂｅｒ２０１１，Ｖｏｌ３７，Ｎｏ．２３ ｇ，细胞为基础的细胞免疫过继治ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒＣＩＫ）
同时体外实验证实免疫疗已经取得了一定的疗效，
效应细胞对ＭＤＲ肿瘤细胞的杀伤活性较其对亲代
２］
。目前Ｃ药物敏感肿瘤细胞系相似甚至更高［ＩＫ细胞免疫过继治疗可应用于髓性白血病、黑色素瘤、肾细胞癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌等，针对胃癌及耐药胃癌的研究报道较少。因此，本研究在体外培养胃／细胞株Ｓ癌耐顺铂（ＤＤＰ）ＧＣ７９０１ＤＤＰ及亲代敏－感细胞株Ｓ探讨ＣＧＣ７９０１的基础上，ＩＫ细胞联合－／ＤＤＰ对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞及ＳＧＣ７９０１细胞的－－体外杀伤作用及其作用机制。
材料与方法
一、材料
／ＳＧＣ７９０１及ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞株购自南京－－凯基生物科技发展有限公司；ＤＤＰ购自山东齐鲁制药厂；Ｔｒｉｚｏｌ总ＲＮＡ提取试剂盒购自天根生化科
北京）有限公司；大技（ＲＴ－ＰＣＲ试剂盒购自宝生物（连）有限公司；ｍｄｒ１、ａｃｔｉｎ引物由上海英骏生物－－β
、）有限公司合成；鼠抗人Ｐ单克ａｃｔｉｎＰ－－糖蛋白（－ｇｐβ隆抗体Ｊ羊抗ＳＢ１抗体购自美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司； 鼠二抗购自北京中衫金桥生物技术有限公司；γ干）、白细扰素（ＩＦＮＣＤ３购自武汉生物制品研究所；－γ
胞介素（ＩＬ）２购自北京双鹭药业股份有限公司。
二、方法
１．ＣＩＫ细胞的培养与鉴定 收集正常人以单
／，吸取个核细胞为主的血液，２０００ｒｍｉｎ离心１５ｍｉｎ上层血浆，５６℃水浴，３０ｍｉｎ灭活备用。将下层血细胞与等量生理盐水混匀，加入盛有人淋巴细胞分／离液２０ｍｌ的离心管中，１８００ｒｍｉｎ离心１２ｍｉｎ。吸取白色环状层液体，加入３０ｍｌ生理盐水混匀，／。弃上清液，加入完全培养基２０００ｒｍｉｎ离心２０ｍｉｎ
６／。调节细胞浓度至１×１混匀制成白细胞悬液，０ｍｌ将自身血浆、白细胞悬液及配制的Ｃ已ＩＫ培养液（／）加入Ｉ通过自制的细胞ＦＮ０００ＩＵｍｌ－γ终浓度为１传输管转移到２置３０００ｍｌ细胞培养袋中，７℃、５％其中含ＣＯ２４ｈ后加ＣＩＫ混合因子（２培养箱中培养，
／／／５００ｎｍｌ抗人ＣＤ５０００ＩＵｍｌＩＬ２和５ｎｍｌ －ｇｇ３、）继续培养，每天观察细胞生长状态并根据情况ＩＬ１－进行扩增。培养至第３天、第６天时，分别留取２ｍｌ培养液样品做无菌试验。细胞培养至第８天，经过严格质量控制，无菌试验培养合格后可以终止／培养，收集悬浮培养的ＣＩＫ细胞，２０００ｒｍｉｎ离心
。将细胞沉淀溶于Ｐ调节细胞浓度至８ｍｉｎＢＳ中，
６／。用流式细胞仪检测细胞表型后用于１×１０ｍｌ实验。
２．ＭＴＴ法检测细胞增殖 取培养于ＲＰＭＩ、１６４０１０％新生小牛血清中对数生长期生长的ＳＧＣ－／调整密度为１×７９０１ＤＤＰ细胞和ＳＧＣ７９０１细胞，－５／，。待２接种于９每孔１ｍｌ６孔板中，００μｌ４ｈ左１０
右细胞贴壁后加入药物干预，实验分为对照（Ａ）／，组、组（ＤＤＰ单独作用（Ｂ）５、１０、２０、４０、８０μｍｌｇ
、即Ｂ组１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５组）ＣＩＫ细胞单独作用（Ｃ）（、效靶比为５∶１、即Ｃ１０∶１、２０∶１，１、Ｃ２、Ｃ３组）组（效靶比２ＣＩＫ细胞联合ＤＤＰ（Ｄ）０∶１的ＣＩＫ细胞／，即Ｄ＋ＤＤＰ５、１０、２０、４０、８０μｍｌ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４、 ｇ。每组设５个复孔，置３Ｄ５组）７℃、５％ＣＯ２培养箱，每孔分别加入ＭＴ继续培养中培养４８ｈ后，Ｔ１０μｌ
／孔，加入ＤＭＳ酶联免疫检４ｈ。弃上清液，Ｏ１５０μｌ 测仪４９０ｎｍ处检测Ａ值。按公式求出耐药指数（，）／／ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘＲＩ＝ＩＣＳＧＣ７９０１ＤＤＰ）ＩＣ －５０（５０
（）、，逆转倍数（ＳＧＣ７９０１ｒｅｖｅｒｓｅｆｏｌｄＲＦ）＝ＩＣ－ ５０（／和杀伤率：抑制率＝（Ｂ组）ＩＣＤ组）１－实验组Ａ５０（／对照组Ａ值）值×１００％。
３．ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｍｄｒ１基因ｍＲＮＡ 将－５
／／ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞调整密度为１×１０ｍｌ接种于－待细胞贴壁后进行实验干预。提取细胞６孔板中，
的ｍＲＮＡ做ＲＴ－ＰＣＲ，以βａｃｔｉｎ为内参照，－、ａｃｔｉｎｍｄｒ１引物序列见表１。反应条件为：９４℃－－β
，，，共３５ｍｉｎ，９４℃１ｍｉｎ５７．５℃４５ｓ７２℃１ｍｉｎ３个
循环。反应结束后，取５μｌＰＣＲ产物与１％琼脂糖 以凝胶成像系统分析结果，计算各目的条凝胶电泳，
带与内参条带光密度比值，以其表示各浓度组ｍＲＮＡ含量的相对强度。Ｃ组每组设３个平行样本，Ｄ组每组５个平行样本。
表１ 引物序列及片段长度
引物名称ｍｄｒ１－引物序列上游：５′ＣＣＡＴＣＡＴＴＧＣＡＡＴＡＧＣ３′－ＧＴＡＣ－下游：５′ＴＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＡＧＴＣ３′－ＣＡＡＡＣ－上游：５′－ＡＣＣＣＣＣＡＣＴＧＡＡＡＡＡＧＡＴＧＡ－３′下游：５′ＣＴＴＣＡＡＡＣＣＴＣＣＴＧＡＴＧ３′－ＡＴ－片段长度（ｂｐ）１６７ｃｔｉｎ－ａβ１２０４．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＰＧＣ －ｇ－ｐ蛋白 取Ｓ
６
／／调整密度为１×１７９０１ＤＤＰ细胞，０ｍｌ接种于
待细胞贴壁后加入药物干预。继续６孔培养板中，
，江苏医药２０１１年１２月第３７卷第２３期 ＪｉａｎｓｕＭｅｄＪＤｅｃｅｍｂｅｒ２０１１，Ｖｏｌ３７，Ｎｏ．２３ ｇ·２７４９·
培养４收集细胞蛋白定量后检测Ｐ８ｈ后，－ｇｐ蛋白表达。Ｃ组每组设３个平行样本，Ｄ组每组５个平行样本。
三、统计学处理
采用Ｓ计量数ＰＳＳ１６．０软件进行统计学分析，
珚±据用均数±标准差（表示，组间对比采用单因ｘｓ），联合杀伤效果采素方差分析（ｏｎｅａＡＮＯＶＡ）－ｗｙ
用析因分析法分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
结
果
二、ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｍｄｒ１基因的表达－且Ｃ组和Ｄ组ｍｄｒ１基因ｍＲＮＡ表达下降，－随着效靶比及Ｄ与Ａ组比ＤＰ浓度的增大而降低，）。（）表３较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５
珚，表３ ＲＴ－ＰＣＲ检测ｍｄｒ１基因ｍＲＮＡ表达（ｘ±ｓ％）－组别Ａ组Ｃ１组Ｃ２组Ｃ３组Ｄ１组Ｄ２组Ｄ３组Ｄ４组Ｄ５组
ｎ
３ ３ ３ ３ ５ ５ ５ ５ ５
ｍＲＮＡ０．８２±０．０３
ａ
０．７６±０．０３ａ０．７１±０．０２ａ０．６４±０．０７ａ０．６１±０．０１ａ０．５８±０．０１ａ０．５４±０．０２ａ０．４９±０．０２ａ０．４１±０．０３
／一、ＭＴＴ法检测ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ耐药指数及－／ＣＩＫ细胞联合顺铂对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞的体外－杀伤率
／ＤＤＰ对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞、ＳＧＣ７９０１细胞－－的生长抑制作用呈剂量依赖性。与ＳＧＣ７９０１细胞－／相比，ＤＤＰ对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞的杀伤率明显降－），／，低（其Ｉ而ＳＰ＜０．０５Ｃ３．４２μｍｌＧＣ７９０１－ｇ５０为３／，细胞对ＤＤＰ的ＩＣ９．３０μｍｌＲＩ为１．７３。在ｇ５０为１
／ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞中，Ｃ、Ｄ组杀伤作用明显高于－其生长抑制作用随ＣＡ组，ＩＫ细胞效靶比及ＤＤＰ
浓度的升高而增加，与Ｓ差异有ＧＣ７９０１细胞比较，－。与Ｂ、统计学意义（Ｐ＜０．０５）Ｃ组相比，Ｄ组对
／其ＤＳＧＣ７９０１ＤＤＰ的体外杀伤活性明显升高，ＤＰ－／／，对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ的ＩＣ３．７８μｍｌＲＦ－ｇ５０下降至２
为１．４１。与ＳＧＣ７９０１细胞相比，ＣＩＫ细胞联合－／ＤＤＰ对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞具有明显的协同杀伤－）。（）表２作用（Ｐ＜０．０５
／表２ ＣＩＫ细胞联合ＤＤＰ对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞、－ａ
Ｐ＜０．０５ 与Ａ组比较，
三、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测Ｐ －ｇｐ蛋白的表达与Ａ组相比，Ｃ组和Ｄ组Ｐ－ｇｐ蛋白表达下降；）。且Ｄ组细胞ＰＰ＜０．０５－ｇｐ蛋白表达较Ｃ组下降（（）表４
珚，表４ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｐｘ±ｓ％） －ｇｐ蛋白表达（
组别Ａ组Ｃ１组Ｃ２组Ｃ３组Ｄ１组Ｄ２组Ｄ３组Ｄ４组Ｄ５组
ｎ
３ ３ ３ ３ ５ ５ ５ ５ ５
Ｐ－ｇｐ蛋白１．０５±０．０５
ａ
０．８７±０．０２ａ０．７７±０．０２ａ０．６８±０．０２ａ０．６０±０．０３ａ０．５２±０．０２ａ０．４７±０．０３ａ０．４１±０．０２ａ０．３６±０．０１
珚，ＳＣＧ７９０１细胞的体外杀伤作用（ｘ±ｓ％）－组别Ａ组Ｂ１组Ｂ２组Ｂ３组Ｂ４组Ｂ５组Ｃ１组Ｃ２组Ｃ３组Ｄ１组Ｄ２组Ｄ３组Ｄ４组Ｄ５组
ｎ
５５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５
／ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞－ ０１２．２２±２．３４ ２４．８２±１．１６ ４３．０５±１．６７ ５１．８６±２．０７ ６８．１２±０．９４ ２７．５２±１．２０ ４０．６８±１．２０ ４９．４５±１．６３ ５０．５６±０．６２ ５７．７２±２．０１ ６７．４４±２．７７ ７８．１１±１．５０ ８６．１１±０．６５
ＳＧＣ７９０１细胞－ ０
ａ
２２．６６±２．２３ａ４３．２３±１．９６ａ４９．７５±６．６４ａ６３．２７±１．７４ａ７４．３９±２．９５ａ１８．４６±２．１０ａ２８．９７±２．３４ａ３６．１０±１．１５ａ４８．６１±１．０９ａ５０．８９±１．６５ａ５８．８９±２．７６ａ６９．５０±１．５９ａ７７．４４±０．６０
ａ
Ｐ＜０．０５ 与Ａ组比较，
讨论
细胞因子诱导的杀伤（细胞最早是１ＣＩＫ）９９１
［］
年由美国Ｓ具有易培ｔａｎｆｏｒｄ大学首次报道的３，
增殖快、活性高、谱广、对多重耐药肿瘤细胞同样养、
４］
。对正常骨髓造血前体细胞毒性小的特点［敏感、
骨髓瘤等血液系统恶ＣＩＫ早期主要应用于白细胞、
性肿瘤的治疗，近年来对于治疗恶性实体瘤的报道逐渐增多。铂类药物ＤＤＰ是当前消化道肿瘤联合化疗中最常用的药物之一，但其药理作用的发挥往往需要很高剂量，不但有毒副作用而且容易产生耐众多学者一直致力于研究如何降低Ｄ药，ＤＰ的使用
ａ／ＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞比较，Ｐ＜０．０５ 与Ｓ－·２７５０·，江苏医药２０１１年１２月第３７卷第２３期 ＪｉａｎｓｕＭｅｄＪＤｅｃｅｍｂｅｒ２０１１，Ｖｏｌ３７，Ｎｏ．２３ ｇ剂量及耐药逆转。本研究结果显示，与ＳＧＣ７９０１－／细胞相比，ＤＤＰ对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞的杀伤率明－显降低，ＲＩ为１．７３。ＣＩＫ细胞及ＣＩＫ细胞联合
／抑ＤＤＰ作用后均可抑制ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞生长，－制作用随Ｃ与ＩＫ细胞效靶比的增加而逐渐增强，提示ＣＳＧＣ７９０１细胞相比具有统计学意义，ＩＫ细－／胞对ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞有较强的杀伤活性。本－［］
卵巢癌细胞研究结果与Ｓｃｈｍｉｄｔｏｌｆ等２在肺癌、－Ｗ
通过下调耐药基因ｍＣＩＫ细胞攻击后，ｄｒ１ｍＲＮＡ、－导致ＤＰＤＰ更易于进入其作用靶－ｇｐ蛋白的表达，／点即细胞核中，增加了ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞对ＤＤＰ－的敏感性，进而ＤＤＰ与ＣＩＫ细胞协同发挥抗肿瘤作用，表现出较强的杀伤作用。但本研究就其协同杀伤作用的机制、ＣＩＫ细胞体内实验最适药物浓度以及和ＤＤＰ联合作用的最适间隔尚需进一步的动物实验及临床应用证明。
参
考
文
献
系中的结果是一致的，从而印证了免疫效应细胞对ＭＤＲ肿瘤细胞的杀伤活性较其对亲代药物敏感肿
瘤细胞系相似甚至更高。
近年来，细胞免疫治疗与化疗对肿瘤的协同治疗在临床应用中已有相关报道。有报道，ＣＩＫ细胞通过联合应用于化疗提高了胃癌、耐药肺腺癌、耐药乳腺癌的治疗效果
［５～７］
［］邢淑贤．１ＣＩＫ细胞的特点及其在肿瘤生物治疗中的作 李淑艳，
］（）：用［癌变畸变突变，Ｊ．２００７，１９５４２４４２６．－［］２ｃｈｍｉｄｔｏｌｆＩＧ，ＬｅｆｔｅｒｏｖａＰ，ＪｏｈｎｓｔｏｎＶ，ｅｔａｌ．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｏｆ Ｓ－Ｗ ｙ
ｍｕｌｔｉｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｍｏｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓｔｏｉｍｍｕｎｏｌｏｉｃｅｆｆｅｃｔｏｒ－ ｇｇ［］，（）：ｃｅｌｌｓＪ．ＣｅｌｌＩｍｍｕｎｏｌ１９９６，１６９１８５９０． －［］］李景和，王宽松．胃癌耐药机制研究进展［世界华人３Ｊ． 王俊普，
（）：消化杂志，２００９，１７２６２６９２２６９９．－［］４ｅｒｎｅｒｉｓＭＲ，ＫｏｒｎａｃｋｅｒＭ，ＭａｉｌｎｄｅｒＶ，ｅｔａｌ．Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｖ
ｅｘｖｉｖｏｅｘａｎｄｅｄＣＤ３＋ＣＤ５６＋ＴｃｅｌｌｓｔｏＦａｓｅｄｉａｔｅｄｏｆ －ｍｐ［］，：Ｊ．ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ２０００，４９（６）３３５ａｏｔｏｓｉｓ －ｐｐ３４５．
［］蒋敬庭，邓海峰，等．细胞因子诱导的杀伤细胞治疗中晚５ 王琦，
］（）：期胃癌的疗效［江苏医药，Ｊ．２００７，３３８８００８０２．－［］陈龙邦．６ＣＩＫ细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌耐药细胞 刘鹏英，
／］中国免疫学杂ＳＰＣ－Ａ１ＤＴＸ的体外杀伤作用的实验研究［Ｊ．（）：志，２００８，２４１２１０７９１０８３．－［］虞积仁，朱平，等．细胞因子诱导的杀伤细胞降低乳腺７ 石永进，
］癌耐药细胞对阿霉素的耐受效应［北京大学学报：医学版，Ｊ．（）：２００１，３３５４１５４１８．－［］８ｉｅｔｈａｍｍｅｒＡＧ，ＷｏｄｒｉｃｈＨ，ＬｏｅｆｆｌｅｒＭ，ｅｔａｌ．Ｍｕｌｔｉｄｒｕ Ｎ ｇ
：ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ１（ＭＤＲ１）ａｎｅｗｔａｒｅｔｆｏｒＴｃｅｌｌｂａｓｅｄｉｍｍｕｎｏ－－ － －ｇ［］，（）：ｔｈｅｒａＪ．ＦＡＳＥＢＪ２００５，１９１１５８１５９． －ｐｙ
［］９ｒｏｕｉｌｌａｒｄＦ，ＴｏｎｄｅｌｉｅｒＤ，ＥｄｅｌｍａｎＡ，ｅｔａｌ．Ｄｒｕｒｅｓｉｓｔ Ｂ －ｇ
ａｎｃｅｉｎｄｕｃｅｄｂｏｕａｂａｉｎｖｉａｔｈｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＭＤＲ１ｇｅｎｅ ｙ ［］ｅｘｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｃａｒｃｉｎｏｍａｔｏｕｓｃｅｌｌｓＪ．Ｃａｎｃｅｒｕｌｍｏｎａｒ ｐｐｙ ，（）：Ｒｅｓ２００１，６１４１６９３１６９８．－（）收稿日期：２０１１０７１１－－（供稿编辑：杨郁）
。在本研究中亦证实随着
联合杀伤活性逐渐增强。ＤＤＤＰ的浓度的升高，１组Ｄ联合作用后的ＤＰ杀伤率约为Ｂ１组的４．１４倍，ＲＦ为１．４１。
［］
至于其作用机制，Ｎｉｅｔｈａｍｍｅｒ等８研究发现，
从而打ＭＤＲ１上调Ｔ淋巴细胞的表面活性标志，－破了Ｔ淋巴细胞对ＭＤＲ１的免疫耐受，ＭＤＲ１成－－为Ｔ淋巴细胞新靶点。ｍｄｒ１基因编码的Ｐ－－ｇｐ是分子量为位于浆膜表面的能量依赖性药物输出泵，它能将细胞内药物“泵”出细胞外，以降低１７０ＫＤ，
从而产生肿瘤细胞内药物浓度和减轻细胞毒作用，
耐药现象，是肿瘤细胞产生多芍耐药基因ＭＤＲ的
９］
。因此，在本研究中，我们对于ｍ经典途径［ｄｒ１－结果发现ＣＰＩＫ细ｍＲＮＡ、－ｇｐ蛋白表达进行检测，
／胞作用及联合用药后ＳＧＣ７９０１ＤＤＰ细胞ｍｄｒ１－－ＰＤＰ浓度的ｍＲＮＡ、－ｇｐ蛋白表达随着效靶比及Ｄ
／增大而降低。故我们有理由推测，由于ＳＧＣ７９０１－ＤＤＰ细胞上过度表达的Ｐ－ｇｐ增强了靶细胞的免疫
因而更易于成为免疫效应细胞攻击的靶点。原性，
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