高效液相色谱法测定盐酸普鲁卡因溶液中盐酸普鲁卡因的含量

谢鹏

【摘 要】Objective To establish the high performance liquid chromatography ( HPLC) method to detect Pro-caine Hydrochloride content in Procaine Hydrochloride solution. Methods The chromatographic column was Agilent E-clipse XDB-C18 ( 4. 6 mm × 150 mm, 5 μm ); the mobile phase consisted of 0. 1% sodium heptanesulfonate in 0. 05 mol/l monopotassium phosphate solution ( regulated PH value of phosphoric acid up to 3. 0 ) and methanol (68: 32);the flow rate was 1. 0 ml/min; the detection wavelength was set at 290 nm; the column temperature was 25℃, and the injection volume was 10μl with 6 min running time. Results A good linear correlation between Procaine Hydrochloride and its peak area was observed within the range of 1. 002-20. 04 μg/ml (r=0. 9999). The average re-covery was 98. 41% (n=9) with 1. 52% relative standard deviation (RSD). Conclusion The HPLC method is accu-rate with good repeatability, and therefore it is suitable for evaluating the quality of Procaine Hydrochloride solution.%目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定盐酸普鲁卡因溶液中盐酸普鲁卡因的含量.方法 色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为0.1%庚烷磺酸钠0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH值至3.0)-甲醇(68:32),流速为1.0 ml/min;检测波长为290 nm;柱温为25℃;进样量为10μl;运行时间为6 min.结果 盐酸普鲁卡因在

1.002~20.04μg/ml范围内与其峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为

98.41%,相对标准偏差为1.52%.结论 HPLC测定结果 准确、重复性好,可用于盐酸普鲁卡因溶液的质量评价.

【期刊名称】《解放军医药杂志》 【年(卷),期】2016(028)004 【总页数】3页(P106-108)

【关键词】盐酸普鲁卡因溶液;盐酸普鲁卡因;色谱法,高压液相 【作 者】谢鹏

【作者单位】050082 石家庄,解放军白求恩国际和平医院 【正文语种】中 文 【中图分类】R972.7

［DOI］ 10.3969/j.issn.2095-140X.2016.04.026

盐酸普鲁卡因是目前国内外广泛使用的局部麻醉药，临床用于浸润麻醉、阻滞麻醉、腰椎麻醉、硬膜外麻醉和局部封闭疗法［1-4］。其原料药的含量测定一直采用永停滴定法和紫外分光光度法，但由于盐酸普鲁卡因为合成药物，虽然其合成方法经过多次的提高和改进［5］，但目前尚不能完全去除其有关物质对氨基苯甲酸的影响，而盐酸普鲁卡因注射液的含量测定自2010版药典开始采用高效液相色谱法(HPLC)有效的分离盐酸普鲁卡因和其相关物质——对氨基苯甲酸，分析其含量，该方法更简便、快捷、准确［6-7］。盐酸普鲁卡因溶液具有平滑肌解痉和局麻的药理作用，口服用于缓解胃肠道痉挛引起的疼痛，漱口或涂布口腔用于溃疡所致的疼痛［8］。目前，盐酸普鲁卡因原料药的含量测定除采用永停滴定法或分光光度法，还有报道采用荧光法、气相色谱法、电化学法、有机碳分析法等，但考虑到检

验周期、成本和操作普及性等方面原因，HPLC将成为必然的趋势［9-12］。目前尚无HPLC对盐酸普鲁卡因溶液中普鲁卡因含量测定的报道。本文参考有关文献采用HPLC法测定盐酸普鲁卡因溶液中盐酸普鲁卡因的含量，用以控制药品质量［13-17］。

1.1 仪器 Agilent 1200型HPLC仪，四元泵，VWD检测器，自动进样器，ChemStation化学工作站(美国安捷伦公司);AE240型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司);pH计(上海梅特勒-托利多公司)，EVOLUTION 201紫外分光光度计(美国赛默飞公司)。

1.2 药品 盐酸普鲁卡因对照品(100424-201102，中国药品生物制品检定所提供);甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，实验中所用水均为超纯水。盐酸普鲁卡因溶液(规格:1%，批号:150106、150107、150108)。

2.1 色谱条件 色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18(4.6 mm×150 mm，5 μm);流动相为0.1%庚烷磺酸钠0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH值至3.0)-甲醇(68∶32);柱温设定在25℃;检测波长为290 nm;进样量为10 μl，运行时间共6 min。 2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:精密称定盐酸普鲁卡因对照品50.1 mg，置于50 ml容量瓶中，加超纯水至刻度，摇匀，即得1002 μg/ml的溶液，作为盐酸普鲁卡因对照品储备液。精密量取盐酸普鲁卡因对照品储备液1.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加流动相至刻度，即得100.2 μg/ml的盐酸普鲁卡因对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备:精密量取盐酸普鲁卡因溶液1.0 ml，置100 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品储备溶液。精密量取供试品储备溶液1.0 ml，置10 ml容量瓶中，加流动相至刻度，作为供试品溶液。

2.3 专属性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液及空白溶剂，照“2.1”项下色

谱条件，分别进样10 μl，分析，记录色谱图。结果显示，在供试品溶液和对照品溶液色谱图中，盐酸普鲁卡因的保留时间一致，且阴性无干扰峰，理论塔板数按盐酸普鲁卡因计算为6560，结果见图1。

2.4 线性关系 精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，加超纯水至刻度，摇匀，即得到浓度分别为1.002、2.004、5.010、10.02、15.03、20.04 μg/ml的对照品溶液。按“2.1”项下色谱条件，分别进样10 μl，记录色谱图，计算结果。以浓度为横坐标(X)，色谱峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，得盐酸普鲁卡因的回归方程为Y=41.31X-2.252，r=0.9 999，结果表明在1.002～20.04 μg/ml范围内，盐酸普鲁卡因浓度和峰面积线性关系良好。 2.5 精密度试验 精密吸取浓度为10.02 μg/ml对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积，计算盐酸普鲁卡因峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.25%，结果表明本试验所使用的HPLC仪的精密度良好。

2.6 重复性试验 取同一批号的盐酸普鲁卡因溶液(批号:150106)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，按“2.1”项下色谱条件，重复进样6次，记录色谱图，积分峰面积，根据“2.4”项下线性关系计算盐酸普鲁卡因溶液浓度，结果盐酸普鲁卡因的平均含量为10.47 mg/ml，RSD为0.27%(n=6)，表明本试验所建立的含量测定方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取盐酸普鲁卡因溶液(批号: 150106)样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于供试品制备后0、1、2、4、8、12 h进样分析，按“2.1”项下色谱条件分析测定，记录色谱图，积分峰面积，计算盐酸普鲁卡因峰面积的RSD为1.20%，表明盐酸普鲁卡因供试品在实验室条件下，12 h内稳定性良好。 2.8 回收率试验 按照处方配制方法，分别配制含盐酸普鲁卡因处方量80%、100%和120%的样品各3份，将9份盐酸普鲁卡因溶液样品分别按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依“2.1”项下色谱条件，分别进样10 μl，记录色谱图，积

分峰面积，计算回收率和RSD。见表1。

2.9 样品测定 取盐酸普鲁卡因溶液样品3批(批号:150106、150107、150108)，按“2.2.2”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件对盐酸普鲁卡因含量进行测定，结果3批样品中盐酸普鲁卡因含量分别为10.47、9.60、9.94 mg/ml，RSD分别为0.15%、1.33%、0.33%。结果表明，3批盐酸普鲁卡因的含量均符合规定，含量测定结果可靠，本方法适用于盐酸普鲁卡因溶液中盐酸普鲁卡因的含量测定。 随着HPLC的不断普及，在医院制剂的药品检验中作用日趋显著，已广泛应用于各种制剂的含量测定。采用HPLC测定盐酸普鲁卡因溶液中盐酸普鲁卡因的含量亦将成为必然趋势。盐酸普鲁卡因溶液原有标准中采用的永停滴定法和分光光度法，本试验中采用HPLC，有效的排除了对氨基苯甲酸的影响，分析方法自动化水平高，分析时间仅5 min，缩短了样品检测时间，且色谱峰型和理论塔板数均非常理想，能够达到盐酸普鲁卡因溶液质量控制要求。

本试验中对盐酸普鲁卡因溶液及其相关物质——对氨基苯甲酸均进行了紫外扫描，发现在盐酸普鲁卡因290 nm处有最大吸收波长，对氨基苯甲酸在该波长处亦有明显吸收，但其最大吸收波长为275 nm处。采用HPLC有效的分离了盐酸普鲁卡因和对氨基苯甲酸，最终选择290 nm作为检测波长。

本试验中比较了不同填料色谱柱Eclipse XDB C18、Zorbax XDB C18、Zorbax SB C18用于盐酸普鲁卡因的分析效果，结果显示3种色谱柱均可以取得令人满意的分离效果，最终确定峰形较好的Eclipse XDB-C18色谱柱作为试验用色谱柱。 根据文献报道，选用HPLC对盐酸普鲁卡因进行含量测定，有选用加酸或者加缓冲盐的方法来提高分离效果，但经过试验对比，发现加酸或者选用不同的缓冲盐均不能得到理想的分离效果。而选用药典中方法，0.1%庚烷磺酸钠0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH值至3.0)-甲醇(68∶32)的方法，能够有效地提高柱效，获得理想的分离度和对称因子。因此最终选用了此流动相体系。

综上所述，HPLC快捷、灵敏，专属性好，方法准确度高，可用于盐酸普鲁卡因的质量评价。

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