氨基酸衍生

首先将标准溶解于50%甲醇（v/v）或者是格林试剂当中，用前将其进行干燥

采用OPA进行衍生快速，但是有些氨基酸的衍生物不稳定，衍生必须在分析之前进行。 Prcl衍生：

将氨基酸标品溶解于80μL0.1mol/L的硼酸缓冲液中（pH=8.0）和40μL的丙醇吡啶混合液（4:1v/v）中，其中丙醇吡啶混合液用于羧基的衍生，样品混合物加入5μL的氯甲酸酯，摇匀蒸干上述混合物再重新加入0.1%的甲酸丙烯腈混合液（11.25：1，v/v）和加入10μL的2.5μmol/L的N-1-萘乙酰胺在丙烯腈中，N-1-萘乙酰胺的作用是为了监控质谱仪的性能，Prcl对氨基酸的摩尔比超过了2700，对应的样品中的氨基酸浓度少于8μmol/L 取40μL的样品或氨基酸标准蒸干，其他的衍生过程与上述方法相同，但要加入10μL的prcl。衍生和蒸干之后，将样品溶解于40μL的0.1%的甲酸/丙烯腈混合液（10:1，v/v）中。 FMOC衍生：

加入100μL的12mmol/L的芴甲基氯甲酸酯（溶解在丙烯腈中）到氨基酸标准浓缩液中，室温（25℃）下振荡反应1h，在分析前加入290μL的0.1%的甲酸丙烯腈混合液（6.25:1，v/v）和10μL的2.5μmol/L的N-萘乙酰胺（溶解于丙烯酰胺中），FMOC与氨基酸的摩尔比超过75（以样品氨基酸含量少于8μmol/L相当） Butanol衍生：

Butanol衍生操作为：加入200μL的正丁醇和乙酰氯混合液（4:1，v/v）到蒸干的氨基酸标准中，样品70摄氏度振荡反应1h，然后将样品蒸干，加入490μL0.1%的甲酸丙烯腈混合液（11.25：1，v/v）和10μL的2.5μmol/L的N-1-萘乙酰胺（溶解于丙烯腈中）。Butanol与氨基酸的摩尔比超过150000（样品中氨基酸的浓度少于8.5μmol/L） 液相色谱：

实验所用的仪器是Agilent HP 1100液相色谱仪，

柱子：AtlantsTM dC-18（50mm×2.1mm，粒径3µm，waters）， 进样量：15µL

流动相：丙烯腈和0.1%的甲酸溶液

采用Prcl和butanol衍生流动相的梯度为： 0-10min：10-70%ACN 10-20min：70%ACN

12-12.1min：70-10%ACN 12.1-15min：10%ACN

采用butanol衍生20种氨基酸梯度的起始浓度为5%ACN 在进样前柱子先平衡5min

采用prcl衍生的话，起始4min流动相直接排到废液中 采用FMOC衍生的线性梯度为： 0-10min：30-80%的ACN 10-20min：80%ACN

12-12,1min：80-30%ACN 12,1-15min：30%ACN

前面的1.5min流动相排到废液中 分析没有衍生的氨基酸梯度为; 0-0.5min:10%ACN 0.5-0.6min:10-50%ACN 0.6-2min:50%ACN

2-2.1min:50-10%ACN 2.1-7.5min:10%ACN 流速：0.3ml/min

在质谱分析前流动相比例1:10 质谱：

采用API3000操作系统并配有涡旋离子喷雾源三重四级杆质谱仪进行检测分析。