红掌愈伤组织高效再生体系建立研究

红掌愈伤组织高效再生体系建立研究

摘要 红掌愈伤组织高效再生体系建立研究结果表明：1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.4 mg/L+NAA 0.3 mg/L+KT 0.3 mg/L红掌诱导愈伤组织效果最佳，诱导率达50%；1/2 MS+6-BA 0.4 mg/L+KT 0.1 mg/L+蔗糖25 g/L+NAA 0.3 mg/L产生丛生芽的效果最好，愈伤分化率达90%。

关键词 红掌；组培苗；激素；诱导；分化

红掌（Anthurium andraeanum Lind.）又名安祖花、火鹤花、花烛，原产于美洲、南美洲热带雨林，是天南星科花烛属的多年生常绿草本植物[1-2]。因其花色鲜艳夺目、外被蜡质、保鲜期长而成为高档盆花、插花摆设，具有较高的观赏价值和经济价值[3]，研究和开发红掌这一名贵花卉，对满足国内外花卉市场的需求及出口创汇具有重要的意义。但是红掌是肉质根系，生长缓慢，分蘖较少，常规分株繁殖方法难以满足规模化生产的种苗需求[4]。因此，组织培养凭借无性繁殖的独特优势，成为红掌脱毒与快速繁殖的主要途径[5]。在红掌的组织培养研究与实践中发现红掌的顶牙、茎段及地下部分表面和内部都带菌，不利于外植体灭菌和建立无菌材料[6-7]。而红掌幼叶灭菌相对容易，且外植体采集对原母株伤害小。鉴于此，笔者以粉冠军为接种材料，系统研究了红掌植株再生的途径，以期为红掌组培苗工厂化生产提供理论依据和技术支撑。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试红掌品种为粉冠军，选择新抽出的长势旺、无病斑并完全伸展的幼叶作试验材料。

1.2 试验方法

1.2.1 材料处理。先用自来水冲洗干净，再用75%的酒精处理20 s后置于0.1%升汞灭菌8~10 min，最后用无菌水冲洗4~5次，再将幼叶分别剪成带主脉的叶片小块（1 cm×1 cm×1 cm），以备接种。

1.2.2 愈伤组织的诱导。经灭菌的外植体分别接种于添加不同浓度激素的1/2 MS诱导培养基上，置于无菌纸箱内进行黑暗培养，利用正交设计法L9（34）探讨培养基中6-BA、2，4-D、NAA和KT 4种因素对红掌愈伤组织诱导的影响，具体试验设计见表1。将叶片接种在附加不同水平6-BA、2，4-D、NAA及KT的1/2 MS培养基上，45 d后观察愈伤组织的诱导情况。每组接10瓶，每瓶接种2个材料。

1.2.3 愈伤组织的分化。将产生的愈伤组织接种到添加不同浓度激素的1/2 MS分化培养基上进行光照培养，培养温度为 25~28 ℃，光照强度为2 000 lx，

每天光照16 h。利用正交设计法L9（34）探讨培养基中6-BA、KT、蔗糖和NAA等4种因素对红掌愈伤组织分化形成不定芽的影响。具体试验设计见表2。将大小基本一致、生长情况良好的愈伤组织转接到不同水平6-BA、NAA、KT及蔗糖的1/2 MS培养基上，30 d后观察愈伤组织的分化情况。每瓶接种1个材料。

1.2.4 芽的增殖培养和生根壮苗。分化培养50 d左右（不定芽长至0.5 cm时）转接于1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+KT 0.1 mg/L培养基上进行第1次继代培养。继代培养时，应尽量减少切面（切口），以免影响芽体分化和延长继代周期。当不定芽长至1.0～1.5 cm，第2片、第3片完全叶形成时，将其从基部切下，转接于1/2 MS+NAA 0.1 mg/L上生根。

2 结果与分析

2.1 不同外源激素水平对红掌愈伤组织诱导的影响

处理外植体接种25 d左右叶片切口边缘开始产生少许嫩黄色的泡状物，45~60 d泡状物逐渐长大成嫩黄的瘤状突起的愈伤组织。由表3可知，处理A1~A9均能诱导出愈伤组织，处理A3诱导率最高，达50%。因此，最佳组合为1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.4 mg/L+NAA 0.3 mg/L+KT 0.3 mg/L。

2.2 不同外源激素水平和不同蔗糖浓度对红掌愈伤组织分化的影响

愈伤组织转接到分化培养基上20 d左右开始由原来的黄色转变成黄绿色，7 d后开始出现萌动的小芽。由表4可知，愈伤组织均能分化出小芽，其中处理B4芽分化率最高，达90%。因此，愈伤诱导最佳组合为1/2 MS+6-BA 0.4 mg/L+KT 0.1 mg/L+蔗糖25 g/L+NAA 0.3 mg/L。

3 结论与讨论

红掌组培快繁中，利用完全展开的幼嫩叶片为外植体诱导愈伤组织，产生不定芽，不同外源激素6-BA、2，4-D、KT和NAA的合理组合能提高愈伤组织的诱导率，并产生大量丛生芽。试验结果表明：1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.4 mg/L+NAA 0.3 mg/L+KT 0.3 mg/L是诱导红掌愈伤组织的最佳培养基，1/2 MS+6-BA 0.4 mg/L+KT 0.1 mg/L+蔗糖25 g/L+NAA 0.3 mg/L是产生丛生芽的最佳培养基。高度大于1.0 cm的芽即可转入生根培养基，红掌的最佳生根培养基是1/2 MS+NAA 0.1 mg/L。外植体接种45 d后部分较小的愈伤组织转接到诱导培养基上继代1次（25 d左右），然后转接到分化培养基上有利于分化成芽。另外，在愈伤组织转接到分化培养基后挑出一部分进行光照培养，一部分暗培养7 d后进行光照培养，其结果没有明显的差别。

4 参考文献

[1] 陈育青.红掌的叶片培养及快速繁殖技术研究[J].江西农业学报，2006（4）：104-105.

[2] 周辉明，尚伟，陈燕，等.外植体、基本培养基和生长调节剂对红掌愈伤组织诱导影响的研究[J].江西农业学报，2010（1）：64-65.

[3] 夏时云，麦瑜玲，许继勇，等.红掌叶片离体培养过程中内源激素含量的变化[J].华北农学报，2006（3）：16-18.

[4] 凌雷.红掌快速繁育最适培养条件的筛选研究[J].现代农业科技，2011（11）：212-213.

[5] 文慧婷，张翠玲.红掌组培快繁技术研究[J].现代农业科技，2006（7）：8-9.

[6] 夏慧敏，傅玉兰，杨海燕，等.红掌组培快繁技术研究现状的综述[J].安徽农业科学，2006（21）：5516-5517.

[7] 陈彦云，曹君迈，赵志新.北方红掌组培苗练苗技术研究[J].北方园艺，2010（3）：132-134.