食品中的丙烯腈化学分析方法

食品添加剂〔间接引入的〕 气相色谱法

〔适用于冷包乳酪、花生浆、蜂乳和人造黄油中的丙烯腈〔AN〕的测定，含量应大于15ppb〕。

A原理

在容器中将食品、水和NaCl充分搅拌成浆料。取一份浆料，加入丙腈作为内标，装入罐内封上，在100℃加热。注射最上层的液体进入配有N-P选择性检测器的气相色谱仪。

B仪器

B.a气相色谱仪

配备N-P选择性检测器适于柱头进样的仪器，6ft×4mm内径的玻璃柱，填充以80－100目Chromosorb102填料。在载气流下于200℃老化新填充的柱子过夜。操作参数：检测器225℃，注射器单元200℃，柱温140℃，氦载气流速40ml/min，高极化电压。在每次注射样品之后，让N-P检测器减敏2min。调节载气流速及炉温使得AN的保留时间为6－7min，丙腈(PN)的保留时间为9－10min。调节氢气流速〔一般为3ml/min〕、空气流速〔一般为110ml/min〕。调节供热电流〔背景电流通常稳定在20pA〕使得注射4μl约0.4μgAN/ml溶液得到大于满量程50%的信号，满量程时为32×10^-12^A/mV。用1mV长条记录纸的记录仪以1cm/min速度记录色谱图。

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B.b注射器

配有87204型加热套的1ml1001TLL型气密注射器。如果注射器上的聚四氟乙烯头失效了，则可用聚四氟乙烯条密封针头与注射器连接处。用2in×22号侧孔针头。标记注射器活塞的位置使注射溶液的量为1ml。用蒸汽管线，或用水泵吸取沸腾水浴中的热水通过加热套以加热注射器。不要用水浴加热样品。用球形接头或管接头将加热套与蒸汽源连接。

B.c水浴

按下法改装以能放置顶空样品罐：用圆金属板代替圆环，圆金属板周边上有若干槽口，刚好与顶空样品罐的颈相配。将螺栓或螺母固定在金属盘的中心。用松紧带将每个罐栓紧在螺栓上。

B.d顶空样品罐

30ml，用聚四氟乙烯/硅酮胶合的橡胶盘或相当的产品和铝密封圈密封。用颈压紧橡胶盘使得其不能被转动。密封盘一次使用后即弃去。

B.e移液管

10ml的血清型。将管尖部分完全截去使其能用来转移花生浆或人造黄油浆；将管尖截到内径1－2mm处以使其能用来转移蜂乳或奶酪浆。

C试剂和材料

注意：丙烯腈是致癌物质。丙腈毒性很大。全部操作都要在通风橱中进行。

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C.a对-甲氧基苯酚酚 氢醌的单甲基醚(MEHQ)。 C.b丙烯腈(AN)。 C.c丙腈〔PN〕。 C.d蒸馏水

将MEHQ(a)加入水中，使其浓度达1%(w/v)。如有必要，可用包裹上聚四氟乙烯的棒搅动，以加速溶解。

C.e无水乙醇

将MEHQ(a)加入乙醇中，使其浓度达1%(w/v)。转动以加速溶解。 C.f标准溶液 冷溶液。 C.f.1AN贮备液

0.806μg/ml。移取1.00ml(0.806g)AN，放入盛有约50ml乙醇的100ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。移取1.00ml乙醇稀释液一份，放入100ml容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。移取1.00ml水洗释液一份放入100ml容量瓶，用水稀至刻度，摇匀。

C.f.2PN贮备液

0.806μg/ml。移取1.00ml(0.806g)AN，放入盛有约50ml乙醇的100ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。移取1.00ml乙醇稀释液

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一份，放入100ml容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。移取1.00ml水洗释液一份放入100ml容量瓶，用水稀至刻度，摇匀。

C.f.3含PN和AN标准溶液

由上述贮备液(1)和〔2〕制备6个标准溶液，AN的浓度分别为0,40.3,8.6,161.4,241.8和403ng/ml，每个溶液均含386ngPN/ml。制备方法是：向6个10ml容量瓶中用移液管加入5mlPN溶液，再分别加入0.00,0.50,1.00,2.00,3.00和5.00mlAN溶液，用水稀至刻度。

C.f.4PN内标液

0.386μg/ml。移取5.00ml上述PN贮备液〔2〕，放入10ml容量瓶，用水稀至刻度，混匀。

D测定

D.a校准用标准溶液的制备

如果没有玻璃包装或非AN基塑料包装的待分析食品的样品，则可用下述方法从AN包装的食品中提取AN：称取200－300g(x×2g)食品，放入2L圆底烧瓶，称烧瓶和内容物的重量〔y×2g〕。加入2×2xg水〔不含MEHQ〕，用旋转蒸发器蒸发水直到烧瓶中剩下约yg重量的液体。加2份〔每份xg〕水，每次加水后都蒸发到约yg。加入xg水(含1%MEHQ〕，混匀，倾进已称过重量的混合器中，称重，加入这个重量的1/4的NaCl，混合1min。$$对玻璃包装或非AN基塑料包装的食品，则称取200－300g(xg)食品，放入混合器，加入xg水(含1%MEHQ〕和x/2gNaCl，混合5min。$$使用合适的移液管和水泵，从混合器中吸取

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食品-水-NaCl浆料以充满移液管。用纸擦去移液管尖外边所附液体，向12个30ml顶空样品罐中分别精确加入10.0g浆料〔约等于4.00g原食品〕，每次取样时要稍微混合一下。向12个罐中加入1ml含PN的AN标准溶液(f)(3)，使得PN的浓度均为96.5ppb，而AN浓度分别为0.0,10.1,10.1,20.2,20.2,40.3,40.3,60.5,60.5,100.8,100.8ppb。加入1ml标准溶液后立刻封严，旋转混合以保证充分混匀。

D.b标准曲线的制备

在沸水浴上加热2h，按顶空技术所述那样取样和分析。$$先纪录样品空白的色谱图，画基线，测量谱图上AN的峰高(Ha)和PN的峰高(Hp)，准确到0.1mm，对样品空白中的干扰峰进行校正。计算10次注射的Ha/Hp值。以Ha/Hp对ppbAN作图，最好的情况下，该直线通过零点和各数据点。对每一种类型的食品分析，分别制备校准曲线。

D.c样品的制备

在制备食品-水-NaCl浆料之前，保持全部用于分析的样品、NaCl和水〔内含1%MEHQ)于冷却状态，将混合器罐放在冰箱中冷却。样品混合完毕，将盛有物料的混合器罐放在冰浴中进行取样，只有在两次取样之间进行混合时才可以从冰浴中取出混合器罐。$$尽可能地将AN基塑料包装的食品转移到冷却的已称重的混合器罐中，注意不要划破塑料容器。称取食品样品的重量〔xg〕。加入xg冷水和x/2gNaCl，混合5min或到完全混匀为止。不要过分混合，因为样品会发热。$$使用合适的移液管和水泵，从混合器中吸取食品-水-NaCl浆料以充满移液管。用纸擦去移液管尖外侧的液体。两每个30ml顶空样品罐中精确加入

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10.0g浆料〔相当于4.00g原食品〕，在取样时要稍微混合一下浆料。向每个罐中加入1.00mlPN内标液(f)(4)，每加完1ml内标，立刻封严罐子。旋转混合以保证彻底混匀。$$在热水浴中加热平衡2h，象顶空技术所述那样移取罐头的样品。

D.d顶空技术

在取样前，用蒸汽加热注射器加热套及注射器至少15min。将活塞保持在用蒸汽加热的试管中。在每次取样前约7min，用氮气稍微吹一下注射器以保证除尽针尖内的液膜。$$用下法进行顶空取样：将热活塞塞进注射器并推到头。从蒸汽管线上取下针筒加热套，不再对注射器加热，将针头插入罐封口膜下1cm处，慢慢地拉活塞(5s)到1ml刻度，不要再动活塞，等10s使液体充满。拨出针头并立刻注射入色谱仪。从气相色谱仪上拨出针头，再将加热套与蒸汽源连接，准备吸取下一个样品。根据保留时间识别AN和PN。$$注射人造黄油、蜂乳或冷包装乳酪，应每隔15min顶空取样一次。只是对花生浆，淋洗峰〔相对于PN来说，保留时间约为3.8min〕又迟又大，因此注射两次后就出现干扰。故两次注射后，应增加炉温到200℃，加热10min。冷却后再在原来的炉温下达到平衡，这样可注射两个以上的样品。

E计算

测量色谱图上的AN峰高(Ha)和PN峰高(Hp)，确定两次平行测定的Ha/Hp的平均值。由校准曲线确定样品中的ppbAN。

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