・５３７・ 第２８卷第６期 实 验 与 检 验 医 学 Ｖ０１．２８ Ｎｏ．６ ２０１０年ｌ２月 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ Ｌ Ｂ０ＲＡＴ０ＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｄｅｅ．２０１０ ・论著・ 探讨ＥＬＩＳＡ法检测血清结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值 张周云，熊国亮 （江西省胸科医院检验科，江西南昌３３０００６） 摘要：目的探讨检测结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值 方法应用酶联免疫吸附试验检测血清中的结核杆菌分泌蛋白 ｄｅｓＡ抗原。结果１３９例活动性肺结核患者血清结核抗原的阳性检出率为８４．１％：６４例非结核性肺部疾病组结核抗原阳性率 ７．８１％，２９例健康对照者均为阴性。特异性为９２．１９％。结论检测血清中结核杆菌分泌蛋白ｄｅｓＡ抗原对诊断肺结核病有较高 的应用价值。 关键词：肺结核：酶联免疫吸附试验：结核杆菌抗原 中图分类号Ｒ３７８．９１＋１，Ｒ４４６．６１，Ｒ５２１，Ｒ８２５．２１ 文献标识码Ａ 文章编号１６７４—１ １２９（２０１ ０）０６—０５３７—０２ Ｉ 堕Ｑ ； Ｑ．≥ 鱼 ！ ！ 鱼２璺＝！！ ！ Ｑ！Ｑ：Ｑ鱼： ｝ Ｔｈｅ‘ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ＺＨＡ ＮＧ Ｚｈｏｕｙｕｎ，ＸＩＯＮＧ Ｇｕｏｌｉａｎｇ．Ｊｉａｎｇｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｉｌａ Ｃｈｅｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｎ— ｃｈａｎｇ３３０００６，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｆｏｒ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｙｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ａｎｔｉｇｅｎ（ｄｅｓＡ）ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍ— ｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ １ ３９ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ８４．１％，ａｎｄ ｗｉｔｈ ７．８１％ｏｆ ６４ ｎｏｎ－ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｃａｓｅｓ，ｗｈｉｌｅ ２９ ｈｅａｌｔｈｙ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｎｅｇａｔｉｖｅ．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｗａｓ ９２．１９％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｓｅｒｕｍ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｓ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ｆｏｒ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；Ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ａｎｔｉｇｅｎ 血清学诊断结核病人抗体已有许多报道．但大 例非结核性肺部疾病ｆ２７例肺炎、１６例慢性支气管 多情况不是敏感性不够就是特异性不强＿１１ 尽管应 炎、２１例肺癌１住院患者，其中男３６例、女２８例，平 用免疫学技术检测结核病抗原已有２０多年的历史． 均年龄５８．７岁。全部病例根椐临床表现、体征、Ｘ 但相关检测报道较少 近年来由于单克隆抗体制备 线、ＣＴ、细菌学、细胞学、生化指标、免疫学或抗结核 技术的提高，取得了高效价的特异性抗体对提高结 治疗有效等进行了确诊 所有患者均抽取空腹血分 核抗原检测的敏感性和特异性起着至关重要作用『２— 离出血清．每个患者的血清分两部分，一部分当天检 ３１。为了探讨检测血清中结核杆菌抗原对肺结核病的 测．另一部分一２０℃冰柜保存 ２９例健康对照血清来 诊断价值，我们应用单克隆抗体．采用ＥＬＩＳＡ夹心 自江西省血液中心献血员 法检测了１３９例临床已确诊的活动性肺结核患者血 １．１．２试剂为郑州安图绿科生物工程有限公司 清中结核杆菌分泌蛋白ｄｅｓＡ抗原．现将结果评价报 产品，批号：２００９０８１３。 告如下。 ２方法 材料与方法 ２．１（１）取出一定量的包被孔。编号。留空白１孔，２ ｌ材料 孔加入阴性对照１００￣１．２孔加入阳性对照ｌＯ０１ｘｌ， １．１标本来源２０１０年２月～７月我院结核内科 其余各孔加样品稀释液１００￣１．分别加入血清２０ｐ，１。 １３９例活动性肺结核病住院患者，其中男８３例、女 ｆ２１在微量振荡器上振荡３０ｓ使孔内液体混合均匀。 ５６例，平均年龄５４－３岁；我院呼吸内科、肿瘤科６４ （３）置３７ｃＩ二下温育３０ｍｉｎ。（４）ｆｉ］洗板机洗板６次。（５） 江西省卫生厅科技资助项目．编号２００９１２６６ 每孔分别加入酶结合物ｌＯ０１ｘｌ，空白孔不加。（６）重复 作者简介：张周云，男，１９７０年出生，主管技师，主要从事临 操作步骤（３）（４）。（７）每孑Ｌ中加入底物、显色剂各５０ｐＪ， 床微生物免疫检验。 第２８卷第６期 实 验 与 检 验 医 学 ＶｏＩ．２８ Ｎｏ．６ ２０１０年ｌ２月 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＬＡＢ０ＲＡＴ０ＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｄｅｃ．２０ｌＯ 轻轻震荡混匀，３７℃避光反应１０ｍｉｎ。ｆ８）加终止液 １检测结核病患者血清结核杆菌抗原可以作为 ５ｏ￣１／：Ｋ．振荡混匀．立即用酶标仪４５０ｎｍ／６３０ｎ１ＴＩ双 结核杆菌存在的直接证据．也可以避免结核病患者 波长测定各孔的吸光值。 因免疫应答低下导致的体液免疫检测或细胞免疫检 ２．２结果判定 测的“假阴性”结果 一段时间以来．因检测结核抗 ２．２．１结果有效性阳性对照孔ＯＤ值应大于 原用的结核抗体存在交叉反应．导致结核抗原检测 ０．８，阴性对照孔ＯＤ值应小于０．１，否则实验无效。 的特异性和敏感性低下。近年来由于单克隆抗体制 ２．２．２ ＣＵＴ ＯＦＦ值计算ＣＵＴ ＯＦＦ值＝０．１＋阴性 备技术的提高．取得了高效价的特异性抗体。使得临 对照孔平均ＯＤ值ｆ若阴性对照孔平均ＯＤ值小于 床上检测结核病患者的血清中结核杆菌抗原成为可 ０．０５，按０．０５计算１。 能 本实验采用的单克隆抗体是利用基因工程方法 ２．２．３检测血清ＯＤ值≥ＣＵＴ ＯＦＦ值时．判为阳 在体外表达结核分枝杆菌的ｄｅｓＡ蛋自抗原制备而 性．否则为阴性 成Ｄ１．利用该单克隆抗体采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法 结果 检测了１３９例临床已确诊的活动性肺结核患者血清 ｌ方法学稳定性实验表明．新鲜血清与一２０ｑＣ冰 中结核抗原，结果表明：其敏感性为８４．１７％。特异性 柜存放３０ｄ的血清的结核杆菌抗原检测结果无差 为９２．１９％。 别。 ２实验结果也表明．血清在一２０＂１２条件下存放３０ｄ ２ １３９例活动性肺结核患者血清结核抗原检出的 与新鲜血清的检测结果无差异．有利于标本少的实 敏感性为８４．１％ｆ１１７／１３９）；６４例非结核性肺部疾病 验室集中时间检测 组结核抗原阳性率７．８１％（５／６４），特异性为９２．１９％， ３表２中显示．痰菌阳性患者与血清结核杆菌抗 ２９例健康对照血清检测全为阴性结果。详见表ｌ。 原检测阳性的一致性很高ｆ涂片阳性为９２．７３％。培 表１ 二组病例及健康对照组结核抗原检测结果 养阳性为９３．２４％１。对菌阴患者血清结核杆菌抗原 检测阳性为７８．５７％ ４ ６４例非结核性肺部疾病患者血清中有５例阳 性．查阅该５例病历都没有合并结核的情况。为假阳 性．因此检测非结核性肺部疾病患者的假阳性率为 ３ １３９例活动性肺结核患者痰涂片抗酸染色和痰 ７．８１％。 结核杆菌培养结果与血清结核抗原检出的关系．详 综上所述．采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法检测活动 见表２。 性肺结核患者血清结核抗原虽有一定的假阳性．但 表２痰涂片和痰培养结果与血清结核抗原检测的关系 仍有可能成为结核病敏感性高、特异性强的新型诊 断方法 检测血清中结核杆菌分泌蛋白ｄｓｅＡ抗原对 诊断肺结核病有较高的应用价值。 参考文献 …Ｉ刘金花，彭泽华．血清结核抗体与特异性ＣＩＣ测定综合诊断肺结核 从表中显示．结核杆菌抗原测定阳性与痰涂片 病１６３例册．江西医学检验，２００６，２４（５）：４４ｌ—４４２． 阳性一致率为９２．７３％．结核杆菌抗原阳性与痰培养 ［２１唐宇龙．三种结核分枝杆菌分泌蛋白的抗体制备及其在抗原检测 中的应用［ＪＪ．中国传染病杂志，２００７，２５（１０）：５９７－６００． 一致率为９３．２４％。 ［３］顾军．结核分枝杆菌分泌蛋白ｄｅｓＡ的单克隆抗体及其在结核病 讨论 血清学诊断中的应用［ＰＩ．中国专利．２００７１００５４３７６．０．２００８．１１．１２．