真蛋白的测定
方法一,盐析法
①试剂
1. 硫酸铜溶液:10%,称取50.00g硫酸铜加水溶解,并稀释至500ml
2. 氢氧化钠溶液:2.5%,称取12.50g氢氧化钠,加水溶解,并稀释至500ml
3. 盐酸标准溶液:0.05mol/L
②真蛋白测定
精确称取样品1g左右,置于250ml烧杯中,加50ml蒸馏水,于电炉上加热煮沸,加入20ml10%硫酸铜溶液,再在搅拌下缓缓加入20ml2.5%氢氧化钠溶液,摇匀。从电炉取下,室温放置2小时。沉淀物用中速定性滤纸倾泻法过滤。并用少量70℃以上热水多次洗涤烧杯和沉淀物,直至滤液无so2+4离子(用5%BaCl2溶液检验无沉淀),连沉淀物一起放入80℃干燥箱中烘至略潮,和入凯氏定氮烧瓶中,消化,测定其中的蛋白质含量(同粗蛋白的测定),同时进行空白测定。另取样品0.5g进行粗蛋白的测定。
方法二:测非蛋白氮(NP)法
①NP的测定
称取15g左右样品(精确到0.1mg),准确加入100ml5% 三氯乙酸溶液,浸泡振荡2h ,静置过滤,精确量取10-20ml滤液定氮(消化时可加2-3滴正辛醇作消泡剂),同时做空白实验。
②NP的计算
同粗蛋白质(CP)的计算
③真蛋白质(TP)的计算
TP%=CP%-NP%
真蛋白质的比率=TP%/CP%*100%
一般来讲,真蛋白质的比率应符合下列数值:
进口鱼粉应≥80%,国产鱼粉≥75%。
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