*以6孔板为例，每孔0.1-1X106细胞
1. 收集培养液; PBS洗一次并收集；胰酶消化后加入培养液，移液器吹打至单细胞悬液，
收集细胞；置于冰上；(注意将培养液，PBS及消化后的细胞一并收集) 2. 低温4度300g离心5分钟；
3. 弃上清，加入2mL PBS重悬细胞，低温4度300g离心5分钟； 4. 弃上清，加入1mL PBS重悬细胞，移液器吹打均匀后，轻柔涡旋的同时缓慢加入3mL
无水乙醇（预冷至-20度）；
5. 在4度或-20度至少固定2小时，过夜最好（>12小时）。样品在这种情况下可保存
数周；
6. 低温4度300g离心10分钟，弃去乙醇；
7. 用5mL PBS洗涤细胞，低温4度300g离心10分钟，弃去上清； 8. 加入0.5mL RNaseA 溶液（PBS， 200ug/mL RNase A）重悬细胞； 9. 37度5-10分钟以去除RNA；
10. 加入0.5mL PI染色液（PBS，100ug/mL PI）； 11. 避光孵育，室温30分钟，或37度15分钟； 12. 过滤后置于冰上，避光，上机（BD FACScaliber）；
13. 设置机器，设置文件位于BD application/DNA quality control/FACScaliber inst settings； 14. 画FSC v SSC，FL2W v FL2A散点图，FL2A直方图；
15. 调节FL2电压，FL2A增益，使各族群很好地显示在FL2W v FL2A散点图上，FL2A直
方图上第一个峰位于200道；
16. 在FL2W v FL2A散点图上，在FL2W较低的族群上画Region R1；
17. 为FSC v SSC设gate G1=R1；在FSC v SSC上画Region R2，以排除碎片； 18. 为FL2A直方图设gate G2=R2；
19. 收集数据，至少收集20000个细胞。
*若FSC v SSC散点图上并无明显细胞碎片，可省去15、16，直接为FL2A直方图设gate G1=R1。
References:
1. doi:10.1101/pdb.prot4436 Cold Spring Harb Protoc 2006.
2.http://cancer.ucsd.edu/research-training/shared-resources/flow-cytometry/protocols/Pages/cell-cycle-with-pi.aspx
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