【免疫学实验】流式CBA多因子检测详解

CBA原理详细介绍

Cytometric Bead Array（CBA），即细胞因⼦微球检测技术。是⼀种基于流式细胞检测系统的多重蛋⽩定量检测⽅法，它能够同时对单个样品中的多个指标进⾏检测。BD公司利⽤流式细胞仪可对荧光信号进⾏级数放⼤的特性，将受检的可溶性因⼦附着于⼀些具有近似细胞直径的微粒上，即可对受检样品中的各种可溶性因⼦进⾏检测。 CBA的基本原理近似于ELISA的检测，即利⽤微⼩、分散的颗粒捕获液体待测物，并利⽤流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光，从⽽测定待测物的数量。

详细原理介绍

每个CBA微球⼤⼩⼀致，具有特定的荧光强度，包被有适⽤于特定分析（如其它抗体或者可溶性蛋⽩）的特异性捕获抗体（Capture Antibody），提供了类似ELISA孔板的捕获表⾯。当微球和待测样品溶液混合后，微球上的特异性抗体就与样品（⾎清、⾎浆或者细胞培养液）中相应的抗原或蛋⽩结合，然后加⼊荧光标记的检测抗体，就会形成“三明治”夹⼼复合物。最后通过流式细胞仪对特异性⽬的蛋⽩进⾏检测。CBA的每种微球携带有不同强度的红⾊荧光，在流式细胞仪的FL3通道通过检测微球荧光强度的差异对⽬的蛋⽩定性；检测抗体带有PE荧光素标记，在流式细胞仪的FL2通道检测，通过检测抗体的PE荧光强度定量⽬的蛋⽩。

CBA技术特点

CBA具有FCM的宽范围荧光检测特点，对样本需求量更少，检测更快速、更准确。下⾯我们介绍⼀下CBA主要的技术特点:

1、轻松实现多重检测。最多可同时对⼀个样本中的、轻松实现多重检测。75个⽬的蛋⽩进⾏精确定量。

2、样本需要量⼩。仅需要、样本需要量⼩。50µL溶液就可进⾏⼀次检测。

3、更⾼的灵敏度。分析灵敏度⾼达、更⾼的灵敏度。2.8pg/mL。

4、更⾼的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性。CBA技术使蛋⽩定量的分析灵敏度⾼达pg/ml级别,检测范围达0-5000pg/ml，所有分析只需⼀组标准曲线。根据抗体的荧光强度对⽬的蛋⽩定量，排除了ELISA反应中酶联放⼤产⽣的假阳性。

5、检测对象的灵活组合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同时检测试剂盒配好的6个指标，形式⽐较固定。为满⾜不同客户的实际需要和研究兴趣，BD于2005年初推出了CBA Flex set。它改变了CBAkit的固定形式，成为⾃由组合、灵活搭配的“⾃助餐”。您可以根据需要组合不同的捕获微球来检测多个指标，最多能同时检测75个指标。除了拥有CBA kit的优势外，FlexSet还配有独⽴的软件分析系统（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上，直接⽤96孔和384孔板进⾏操作。CBA Flex set赋予研究者更灵活、更⾃由，更⼤的选择空间，⽽且进⼀步丰富了CBA产品线。种类涉及免疫、细胞信号传导、细胞凋亡等许多领域的蛋⽩定量分析。

6、操作简单，省时省⼒。CBA技术采⽤芯⽚式集成测定，所有检测只需⼀组标准曲线，就可计算出每种待测蛋⽩浓度；操作简单，整个流程只需要3.5⼩时，对待测样本可做实时分析，缩短检测了时间，提⾼了检测效率。

7、强⼤的软件分析系统。BD CBA软件具有强⼤的数据处理能⼒，直接将⽬标蛋⽩的检测结果换算成标准浓度；除了为⽤户提供待测物的计数结果外，还能提供可视轮廓或信号图形以帮助⽤户获得更多的信息。有⽤于Macintosh和Microsoft系统两种版本供您选择。和传统的液相蛋⽩定量技术相⽐，CBA技术是⼀种“多元”和“同步”的检测技术。⾰新的CBA技术与传统的蛋⽩定量相⽐有下列优点：

CBA检测对象

⾎清、⾎浆、眼泪、房⽔、唾液、体腔灌洗液、细胞培养液上清、细胞裂解物等。

CBA应⽤领域

▶炎症因⼦的⽔平的分析

▶肿瘤研究及肿瘤疾病的辅助诊断、疗效和预后监测

▶凋亡相关蛋⽩分析

▶系统性红斑狼疮（SLE）和新⽣⼉脓⾎症等免疫疾病的监控▶⼲细胞研究和⼲细胞治疗监测

▶免疫学研究和免疫疾病的辅助诊断和监控▶感染疾病的研究及辅助诊断和疗效评价▶免疫功能监测

▶药效评价，药物研发、疫苗研究

▶细胞信号传导中磷酸化蛋⽩、凋亡相关蛋⽩定量分析

CBA指标检测明细:1、CBA指标

3、CBA Flex Set 信号转导指标

4、CBA Flex Set ⼲细胞指标