细胞内细胞因子——自身免疫性疾病的新视野

维普资讯 http://www.cqvip.com 医学杂志２００６年８月第２９鲞第８　』　鲤：　垫　：　７６ｌ·　国内夕卜进展．　细胞内细胞因子——自身免疫性疾病的新视野　仲人前杨再兴　自身免疫是机体免疫系统对自身抗原发生免疫应答，产　生自身抗体和（或）自身致敏淋巴细胞的一种现象，其对一　定条件下机体免疫系统的正常自稳性调节具重要意义。当　自身免疫异常时，自身抗体和（或）自身反应性淋巴细胞会　攻击表达靶抗原的组织或器官，引起自身免疫性疾病　（ＡＩＤ）。至今已有３Ｏ余种疾病被列为ＡＩＤ，但对ＡＩＤ的病　因和发病机制尚不清楚，一般认为，主要是各种内外因素打　破机体免疫系统的自身耐受，通过自身过度免疫应答引起组　织或器官损伤。这些因素可能包括机体内在因素（如遗传背　景、自身抗原发生改变等）和外在因素（如发生各种病原微　生物感染；超抗原或非特异性Ｔ、Ｂ细胞多克隆刺激剂作用　等）。随着分子生物学和免疫学技术的飞速发展，对ＡＩＤ研　究日益深入。特别是近年新技术的应用、新的特异性标志物　的发现、发病免疫机理的深入探讨、新的靶分子或位点的寻　找都为ＡＩＤ研究带来了新契机，同时也有利于改进和提高　ＡＩＤ临床诊断和治疗。对ＡＩＤ的临床特征、实验室诊断技术　和诊断指标进展见参考文献［１］，在此仅重点阐述近几年与　ＡＩＤ密切相关的细胞内细胞因子（Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ，ＩＣＫ）　的研究。　细胞内细胞因子的研究方法　细胞因子是由多种细胞分泌的对免疫细胞发育、分化以　及功能调节有极其重要作用的小分子多肽或糖蛋白，但不包　括免疫球蛋白和补体。由于基因工程和细胞工程技术的迅　猛发展，各种细胞因子得以克隆，许多新的细胞因子被发现，　而且对于多种细胞因子的分子结构、受体及信号转导通路、　生物学功能等多方面都进行了大量的研究。特别是近年来　ＩＣＫ染色及流式细胞分析技术等检测方法的出现，使研究者　不但能够继续深入研究分泌至胞外的细胞因子，而且能对尚　未分泌至胞外的ＩＣＫ进行分析和探讨，以直接快速反映体内　细胞的状态和胞浆细胞因子水平，从而对细胞因子的产生、　来源、生物学活性及功能进行更为全面和准确的判断和认　识。　目前，已发展出多种用于检测ＩＣＫ的方法，如原位免疫　组化法（ＩＳＨ）、免疫组化染色及流式细胞术（ＦＣＭ）等。每种　方法都有各自的特点，但ＦＣＭ具有其他方法不可比拟的优　点。例如ＦＣＭ通过同时标记不同颜色荧光的抗细胞表面分　子单抗和抗细胞因子单抗，不仅可以在单个细胞水平检测多　种ＩＣＫ，而且可以在混合细胞群中区分表达特定细胞因子的　作者单位：２００００３第二军医大学长征医院实验诊断科　通讯作者：仲人前，电子信箱：ｒｑｚｈｏｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｅｏｍ　细胞亚型　Ｊ。因此，ＦＣＭ已成为临床和科研中研究ＩＣＫ最　为常用或不可或缺的重要工具。此外，用以检测ＩＣＫ　ｍＲＮＡ　表达水平的各种分子生物学技术也得到广泛应用，如ＲＮＡ　即迹法、ＲＮＡ酶保护检测法和以聚合酶链式反应（ＰＣＲ）为　基础的新基因分析技术　。其中最近发展起来的实时荧光　ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）定量或半定量检测ＩＣＫ　ｍＲＮＡ最为常用，此　类方法是目前检测ＩＣＫ最敏感的方法，尤其适用于极微量的　标本，或仅有少数细胞表达细胞因子基因的标本。随着基因　组学和蛋白组学时代的到来，各种基因芯片技术和蛋白组学　方法也正逐步应用于ＩＣＫ研究，尤其是近几年激光捕获显微　切割技术（ＬＣＭ）与基因组学、蛋白组学或其他生物学技术　的“亲密接触”＿４　，也必将给ＩＣＫ研究带来新的曙光。　二、细胞内细胞因子的分类　目前，已经检测了数十种ＩＣＫ的表达，如代表Ｔｈｌ克隆　的干扰素．－ｙ（ＩＦＮ一＾ｙ）、白细胞介素（ＩＬ）一２、肿瘤坏死因子一１３　（ＴＮＦ—Ｂ）等，代表Ｔｈ２克隆的ＩＬ４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ一１０等。对于　ＩＣＫ的分类，目前尚无统一的标准可循，可根据其生物学效　应、结构、受体类型、作用的靶细胞等进行分类，不同的分类　方法可将细胞因子划分为不同的类别。如按名称可将与　ＡＩＤ密切相关的ＩＣＫ分为ＩＬ和ＴＮＦ类、ＩＮＦ类、转化生长因　子．１３（ＴＧＦ．１３）家族等几大类。需要指出的是，名称相似或相　关的细胞因子功能不一定相关，如白细胞介素系列大部分在　功能上并无关联。　１．自细胞介素：自１９７９年ＩＬ被命名以来，至今已报道　了２９种ＩＬ（ＩＬ．１～２９），凡命名的ＩＬ　ｃＤＮＡ基因克隆和表达　均已成功完成。已检测的细胞内ＩＬ中，有很多被证实与　ＡＩＤ关系密切，如ＩＬ一１、ＩＬ一２、ＩＬ４、ＩＬ—ｌ２、ＩＬ一２３。　２．肿瘤坏死因子：根据ＴＮＦ产生来源和结构的不同可　分为ＴＮＦ．ｄ、ＴＮＦ一１３和淋巴毒素一１３（ＬＴ一１３）。近年来，由于不　断有新的分子被发现，已形成一个肿瘤坏死因子超家族，其　成员有２Ｏ余种。　３．干扰素：是最早发现的细胞因子，其具干扰病毒感染　和复制的功能。包括ＩＦＮ—ｄ、ＩＦＮ一１３、ＩＦＮ一＾ｙ、ＩＦＮ一（１）等４类。　其中ＩＦＮ．＾ｙ是Ｔｈｌ类淋巴细胞的特征性细胞因子，检测细胞　内ＩＦＮ一＾ｙ的表达情况，对于判断Ｔｈｌ和Ｔｈ２之间的平衡具重　要意义。　４．转化生长因子．１３家族：ＴＧＦ—Ｂ家族具有调节细胞生　长和分化及维持细胞稳定性等功能，其成员多达３５个以上，　包括ＴＧＦ．１３、骨形成蛋白（ＢＭＰ）等。　５．其他：其他细胞内细胞因子包括粒细胞集落刺激因　子（Ｇ—ＣＳＦ）等集落刺激因子家族；巨噬细胞炎症蛋白（ＭＩＰ）　维普资讯 http://www.cqvip.com

７６２·　中华检验医学杂志２００６年８月第２９卷第８期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ａｕｇｕｓｔ　２００６．Ｖｏｌ　２９，Ｎｏ．８　等趋化性细胞因子家族；及表皮生长因子（ＥＧＦ）、成纤维细　胞生长因子（ＦＧＦ）、血小板衍生的生长因子（ＰＤＧＦ）等。　三、细胞内细胞因子与ＡＩＤ的关系及检测意义　机体免疫系统的自身调节网络有赖于促炎和抗炎细胞　因子的平衡。当这种平衡被打破，就会引起自身免疫现象和　ＡＩＤ的发生。某些细胞因子，如ＩＬ－２、ＴＮＦ—Ｏｔ、ＩＦＮ等既可促　进炎症应答，导致自身免疫现象，也具有免疫抑制功能。因　此，这些细胞因子的促炎和抑炎作用问是否平衡，对ＡＩＤ发　生至关重要。正常情况下，细胞因子的表达和分泌受机体的　严格调控，而在ＡＩＤ中，细胞因子会出现异常表达，因此检　测细胞因子对ＡＩＤ的诊断和治疗至关重要。现对常见ＡＩＤ　与ＩＣＫ的关系总结如下。　系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）是一类复杂的系统性ＡＩＤ，其确　切的发病机制尚不清楚。研究表明，ＳＬＥ的发生发展与多种　细胞因子表达水平异常或细胞因子之间的平衡紊乱有关，特　别是ＴＮＦ、ＩＬ－６、ＩＬ一８和ＩＦＮ．　等促炎性细胞因子全身或局部　的过度表达，在ＳＬＥ组织的炎性损伤中具有重要作用　。　ＩＦＮ—Ｏｔ与ＩＬ－６联合作用可促使Ｂ细胞分化为浆细胞，且与　ＳＬＥ的多种免疫异常有关　Ｊ。此外，Ｂａｅｃｈｌｅｒ等　发现ＳＬＥ　患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）也有ＩＬ一１　ｍＲＮＡ的高表达。　狼疮性肾炎（ＬＮ）是ＳＬＥ的主要局部表现。在ＬＮ的小鼠模　型中发现，ＩＦＮ一　可诱导ＬＮ的自身抗体的持续表达。研究　表明，ＩＬ一１８在诱导ＩＦＮ一　等Ｔｈｌ类细胞因子的产生中发挥　关键作用，而在小鼠模型的肾组织和ＬＮ患者的外周血　ＰＢＭＣｓ中均过量表达ＩＬ一１８，说明ＩＬ．１８与ＬＮ的发病密切相　关　Ｊ。这些细胞因子已成为治疗ＳＬＥ的候选靶分子。Ｌｏｐｅｚ　等　探讨了ＩＬ一１０与ＴＮＦ—Ｏｔ启动子区的基因多态性与抗疟　药对ＳＬＥ治疗效果的关系，发现高表达ＩＬ一１０和低表达ＴＮＦ—　Ｏｔ的联合基因型患者对药物治疗比较敏感，为ＳＬＥ患者进行　个体化用药以及早期判断药物疗效提供了借鉴。　类风湿关节炎（ＲＡ）是一种以关节滑膜炎症为特征的慢　性全身性ＡＩＤ，其发病机制尚不清楚，细胞因子在其中扮演　重要角色。ＲＡ的滑膜细胞会产生大量以ＴＮＦ—Ｏｔ为主的炎　性细胞因子，如ＴＮＦ—Ｏｔ、ＩＬ．１、血小板获得性生长因子　（ＰＤＧＦ）、ＧＭ—ＣＳＦ、Ｍ．ＣＳＦ、ＥＧＦ、血管内皮细胞生长因子　（ＶＥＧＦ）等，Ｔ细胞和巨噬细胞也会进入滑膜液，并产生　ＴＮＦ、ＩＬ一１、ＩＬ－６等多种细胞因子，引起滑膜损伤。应用抗　ＴＮＦ抗体、ＩＬ一１受体拮抗剂、抗ＩＬ－６受体抗体则可以封闭细　胞因子的作用，减轻滑膜损伤　。　多发性硬化症（ＭＳ）是一种主要发生在中枢神经系统的　ＡＩＤ，主要表现为脱髓鞘损伤和广泛的神经症状。在ＭＳ活　动期，ＩＬ一１、ＩＬ－２和ＩＦＮ一　的表达或分泌明显增加，而在恢复　期，ＩＬ．４、ＩＬ—ｌ０和ＴＧＦ－Ｂ表达或分泌增多，Ｔｈｌ型细胞因子表　达下降”　。因此，通过检测细胞因子的表达变化可判断疾　病的发展情况，同时也可用Ｔｈ２型细胞因子或抑制Ｔｈｌ型细　胞因子的药物阻止其进一步发展。　ＩＬ．４是Ｔｈ２类细胞因子的代表，在ＳＬＥ、银屑病、实验性　色素膜炎、实验性自身免疫性脑脊髓炎（ＥＡＥ）、ＲＡ、非胰岛　素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）等ＡＩＤ中有着重要的调节作用，使　产生ＩＦＮ一　的且以Ｔｈｌ为主的免疫调节偏移转向以Ｔｈ２为　主，同时能缓解疾病而不诱导广泛强烈的免疫抑制。因此，　在使用ＩＬ．４类药物对ＡＩＤ进行治疗时，可通过检测Ｔｈｌ类　细胞因子（如ＩＦＮ一　、ＴＮＦ）和Ｔｈ２类细胞因子（如ＩＬ．４、ＩＬ一５、　ＩＬ一１０、ＩＬ一１３）的表达水平变化判断药物疗效。　ＩＬ一１２具有诱导Ｔｈ０细胞向Ｔｈｌ细胞转化的功能，并与　Ｔｈｌ细胞介导的ＡＩＤ密切相关。迄今，已发现ＩＬ一１２在多种　ＡＩＤ动物模型中发挥重要作用，如ＥＡＥ（ＭＳ的实验动物模　型）、实验性自身免疫性葡萄膜炎（ＥＡＵ）、ＩＤＤＭ、炎症性肠　病，这使得ＩＬ一１２已经成为研究Ｔｈｌ细胞介导的多种诊断和　治疗的靶分子”　。ＩＬ－２３是近来发现的一种细胞因子，属于　ＩＬ一１２家族的成员。在ＥＡＥ小鼠模型的脾细胞其ｍＲＮＡ的　表达量明显增加，Ｃｕａ等　研究指出ＩＬ一２３在自身免疫性反　应中具有重要作用。　ＴＧＦ—Ｂ是一种多功能细胞因子，对于细胞增殖、分化、凋　亡，免疫调节，创伤修复等都有重要作用。ＴＧＦ—Ｂ表达异常　可能与炎症性肠病等多种ＡＩＤ密切相关。研究表明，ＴＧＦ．　ｐ１基因敲除的小鼠会发生细胞因子调节紊乱，ＩＦＮ一　、ＩＬ－２　等细胞因子ｍＲＮＡ的表达明显增高，从而出现各种ＡＩＤ表　现　。　此外，自身免疫性肝病［包括原发性胆汁性肝硬化　（ＰＢＣ）、自身免疫性肝炎（ＡＩＨ）、原发性硬化性肝管炎　（ＰＳＣ）］、各种中枢或周围神经炎、糖尿病等多种ＡＩＤ都与细　胞因子调节网络的异常存在直接或间接的关系。本实验室　在探讨ＩＬ一１、ＩＬ－６和ＩＬ一１０基因多态性与中国人ＰＢＣ发病的　相关性时发现，ＩＬ一１ＲＮ位点和ＩＬ－６的第１７４位点基因多态　性与中国人ＰＢＣ的易感性相关　．这有利于指导中国人群　ＰＢＣ发病的流行病学研究和筛选。　四、前景与展望　综上所述，细胞因子是免疫调节网络中的一个重要组成　部分，对于维持免疫系统的稳态以及机体正常的免疫应答具　有关键作用。细胞因子的产生或调节异常，可能引起包括　ＡＩＤ在内的多种疾病的发生。因此．细胞因子的检测对于判　断机体免疫功能是否正常，是否有ＡＩＤ的发生及病情都有　重要意义。与已分泌的细胞因子比较，ＩＣＫ受外界各种因素　直接影响小，尤其是ＦＣＭ可以在单细胞水平上检测ＩＣＫ，可　以更早期，更准确地判断疾病状态下细胞的亚型特点和功能　状态，为ＡＩＤ的诊断和治疗提供参考依据。如皮质类固醇　激素等非特异性的免疫抑制药物是治疗ＡＩＤ的常用药物，　但用量大会引起继发性感染等副作用，用量小又达不到疗　效，因此把握药物用量是临床上十分棘手的问题。通过检测　ＩＣＫ可以反映Ｔ细胞亚群的免疫功能状态，作为确定应用皮　质类固醇药物临界剂量的客观指标，这样不仅可保证药物能　最大程度地发挥其抑制自身免疫反应的作用，而且可大大降　低药物的毒副作用。　目前检测ＩＣＫ最常用的是ＦＣＭ法，但该法亦存在局限　性，如现有的激活剂和破膜剂会影响细胞破膜过程中抗体与　维普资讯 http://www.cqvip.com 中华检验医学杂志２００６年８月第２９卷第８期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ａｕｇｕｓｔ　２００６，Ｖｏｌ　２９，Ｎｏ．８　７６３·　细胞表面或细胞内分子的特异性结合。破膜染色后，细胞已　死亡，很难进行后续的功能实验，这使得ＦＣＭ的应用受到限　制。近来有研究报道，利用高敏感性染色技术可以检测一些　分泌至细胞表面的低表达细胞因子，如ＩＦＮ－　ＩＬ一１０　。因　此，寻找新的可以克服上述问题的激活剂和破膜剂是相关研　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒａｔｉｏｎａｌ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ．ｒｅａｌｉｓｔｉｃ　ｈｏｐｅ？　Ａｎｎａｌｓ　Ｏｎｃｏ１．２００５，ｌ６：ｌ６＿２２．　６　Ｓｍｏｌｅｎ　ＪＳ，Ｓｔｅｉｎｅｒ　Ｇ，Ａｒｉｎｇｅｒ　Ｍ．Ａｎｔｉ－ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｌｕｐｕｓ　ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｌｕｐｕｓ，２００５，１４：１８９－１９１．　７　Ｊｅｇｏ　Ｇ，Ｐａｌｕｃｋａ　ＡＫ，Ｂｌｎｃｋ　ＪＰ，ｅｔａ　ａ１．Ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ　ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｄｕｃｅ　ｐｌａｓｍａ　ｃｅｌｌ　ｄｉｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｔｈｍｕｇｈ　ｔｙｐｅ　Ｉ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００３，ｌ９：２２５－２３４．　８　Ｂａｅｃｈｌｅｒ　ＥＣ，ＢａｆｌｉｗａＵａ　ＦＭ，Ｋａｒｙｐｉｓ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ．ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｓｉｇｎａｔｕｒｅ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｓｅｖｅｒｅ　ｌｕｐｕｓ．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　Ｕ　Ｓ　Ａ，２００３，ｌ００：２６ｌ０＿２６ｌ５．　９　Ｃａｌｖａｎｉａ　Ｎ．Ｔｕｃｃｉａ　Ｍ，Ｒｉｃｈａｒｄｓｂ　ＨＢ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｌ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｌｕｐｕｓ　ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ：Ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ＩＬ－ｌ　８．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ　Ｒｅｖ，　２００５．４：５４２－５４８．　究的重要内容。酶联免疫斑点试验（ＥＬＩＳＰＯＴ）是以传统的　酶联免疫夹心法为基础，在单个细胞水平检测细胞因子，尤　其是对体液中半衰期短的细胞因子检测方法，其较ＥＬＩＳＡ灵　敏约１００倍。但比ＥＬＩＳＡ技术复杂费时，人为影响因素较　多，也不适于大量产生细胞因子的细胞　检测。　近些年，很多有关应用细胞因子及相关抗体的药物治疗　１０　Ｌｏｐｅｚ　Ｐ，Ｇｅｍｅｚ　Ｊ，Ｍｏｚｏ　Ｌ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｕｔｃｏｍｅｓ　ｉｎ　ＳＬＥ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌ　ｄｒｕｇｓ．　ＡＩＤ动物模型已获成功，但能够真正应用于临床的却很少，　如应用抗ＴＮＦ单抗对多种ＡＩＤ都有明显疗效，如ＲＡ、炎症　Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｅｓ　Ｔｈｅｒ．２００６．８：Ｒ４２．　１ｌ　Ｆｅｌｄｍａｎｎ　Ｍ．Ｓｔｅｉｎｍａｎ　Ｌ．Ｄｅｓｉｎ　ｏｆｇ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｉｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ　ｆｏｒ　ｈｕｍａｎ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ．２００５．４３５：６ｌ２－６ｌ９．　１２　Ｏｅｒｔｅｌｔ　Ｓ，Ｓｅｌｍｉ　Ｃ，Ｉｎｖｅｍｉｚｚｉ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｇｏａｌｓ：Ａｎ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　ｍｉｃｍａｒｒａｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ，２００５，　４：４１４－４２２．　性肠病、强直性脊柱炎、银屑病、Ｍｓ　都是成功用于临床的　范例。而有的细胞因子在用于其他疾病治疗时，还会引起　ＡＩＤ的发生，如应用ＩＦＮ—ｄ进行免疫治疗时，ＩＦＮ－ｄ可通过活　１３　Ｖａｎｄｅｎｂｒｏｅｃｋ　Ｋ．Ａｌｌｏｚａ　Ｉ，Ｇａｄｉｎａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｏｆ　化ＴＯＬＬ样受体诱发炎症反应造成或加重自身免疫性胰岛　细胞损伤引起１型糖尿病　。种类繁多的细胞因子相互作　用形成一个级联的网络系统，针对一种或几种细胞因子均　难以阻止疾病的发展。细胞因子是通过胞内信号转导途径　来发挥作用的，而信号转导途径是有限的，因此，以信号转导　途径为靶向比针对细胞因子可能会取得更佳的效果，这也可　能是今后细胞因子研究的着眼点。　参考文献　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１２　ｆａｍｉｌｙ：ｒｅｃｅｎｔ　ａｄｖ￣ｎｃｅｓ　ａｎｄ　ｎｏｖｅｌ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ．Ｊ　ＰｈａｌＴｌｌ　ＰｈａｒＩｎａｃｏｌ，２Ｏｏ４，５６：ｌ４５．１６ｏ．　１４　Ｃｕａ　ＤＪ，Ｓｈｅｒｌｏｃｋ　Ｊ，Ｃｈｅｎ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２３　ｒａｔｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ．１２　ｉｓ　ｔＩｌｅ　ｃｒｉｔｉｃａｌ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｏｒ　ｆａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　ｉｌａｍｍａｔｆｎｉｏｎ　ｏｆ　ｔＩｌｅ　ｂｒａｉｎ．Ｎａｔｕｒｅ，２００３．４２ｌ：７４４－７４８．　１５　Ａｏｋｉ　ＣＡ，Ｂｏｒｃｈｅｒｓ　ＡＴ，Ｌｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　Ｂ　（ＴＧＦ—ｂｅｔａ）ａｎｄ　ａｕｔｏｉｍｕｎｉｔｙ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ　Ｒｅｖ，２００５，４：４５０－４５９．　１６范列英，朱烨，仲人前，等．细胞因子基因多态性与中国人原发性　胆汁性肝硬化的相关性．中国医学科学院学报，２００４，２６：５０５．　５０９．　１７　Ｃｏｘ　ＪＨ．Ｆｅｒｒａｒｉ　Ｇ．Ｊａｎｅｔｚｋｉ　Ｓ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　ａｔ　ｌ仲人前，耿红莲．自身免疫性疾病实验室诊断进展．中华检验医　学杂志，２００５，２８：８６７－８６９．　２　Ａｒｏｒａ　ＳＫ．Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ｕｓｉｎｇ　ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．　ｔｈｅ　ｓｉｎｇｌｅ　ｃｅｌｌ　ｌｅｖｅｌ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＥＬＩＳＰＯＴ　ａｓｓａｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００６，３８：　２７４．２８４．　１８　Ｆｅｌｄｍａｎｎ　Ｍ．Ｍａｉｎｉ　ＲＮ．Ｌａｓｋｅｒ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｗａｒｄ．　ＴＮＦ　ｄｅｆｉｎｅｄ　ａｓ　ａ　ｈｅｒｔａｐｅｕｔｉｃ　ｔａｒｇｅｔ　ｆｏｒ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ａｎｄ　ｏｔＩｌｅｒ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄ．２００３，９：ｌ２４５．１２５０．　１９　Ｄｅｖｅｎｄｒａ　Ｄ．Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｈ　ＧＳ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ａ．ａ　ｐｏｔｅｎｔｉｌ　ｌａｉｎｋ　ｉｎ　ｔＩｌｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｖｉｒａｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔｙｐｅ　ｌ　ｄｉａｂｅｔｅｓ　ａｎｄ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｃｌｉｎ　Ｉｎｌｒｌｌｕｎｏ１．２Ｏｏ４．１ｌｌ：２２５－２３３．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｃｅｌｌ　Ｓｃｉ，２００２，２４（１－３）：３７４０．　３　Ｌｏｚａ　ＭＪ，Ｆａｕｓｔ　ＪＳ，Ｐｅｒｕｓｓｉａ　Ｂ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｃｏｌｏｒ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｔ　ｔｈｅ　ｓｉｒＩｌｅ．ｇｃｅｌｌ　ｌｅｖｅｌ，Ｍｏｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００３，　２３：２４５－２５８．　４　Ｂｒａｎｄｔ　ＳＰ．Ｍｉｃｍｇｅｎｏｍｉｃｓ：ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｔ　ｔＩｌｅ　ｔｉｓｓｕｅ－　ｓｐｅｃｉｉｃｆ　ａｎｄ　ｓｉｎｇｌｅ－ｃｅｌｌ　ｌｅｖｅｌｓ．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｂｏｔ，２００５，５６：４９５－５０５．　５　Ｐｏｓａｄａｓ　ＥＭ，Ｓｉｍｐｋｉｎｓ　Ｆ，Ｌｉｏｔｔａ　ＬＡ，ｅｔ　ａ１．Ｐｍｔｅｏｍｉｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｆｏｒ　（收稿日期：２００６－０５－０８）　（本文编辑：李建陵）　读者．作者．编者．　敬告作者　为了使您的稿件得到及时准确的处理，本刊建议作者在　投稿时除了有纸样稿件２份、审稿费、单位介绍信以外，还应　再增加一张首页，注明以下内容：（１）中、英文文题；（２）作者　姓名；（３）作者单位；（４）通信地址；（５）电子邮箱地址；（６）　联系电话。　以下资料如有也应同时提供：（１）基金资助证明复印　件；（２）本刊ＶＩＰ会员会员号；（３）中华医学会会员证复印　件。