组织工程与重建外科杂志２０１６年１２月 第１２卷第６期 ・３４９・ 论著． ｄｏｉ：ｌＯ．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—０３６４．２０１６．０６．００５ 改良小鼠后肢淋巴水肿模型的构建 孙一宇 崔春晓 戴婷婷 蒋朝华 曹卫刚 李圣利 【摘要ｌ 目的 通过调整辐射剂量和手术时机，构建一种更为稳定和持久的小鼠后肢淋巴水肿模型。方法将３６只８ 周龄雌性Ｃ５７小鼠随机分为３组：术前放疗组（Ｒ＋Ｓ）、术后放射组（Ｓ＋Ｒ）、术前及术后放射组（ｒ＋Ｓ＋ｒ）。采用淋巴结摘除 手术联合局部放射的方法进行模型构建。Ｒ＋Ｓ组于术前３ ｄ接受４．５ Ｇｙ的局部放射，Ｓ＋Ｒ组于术后２周接受４．５ Ｇｙ的 局部放射．ｒ＋Ｓ＋ｒ组于术前３ ｄ和术后２周分别接受２．２５ Ｇｙ的局部放射。术后采用排水法测量动物后肢体积变化。术 后２４周时在后肢注射ＦＤＮＧ以显示体内淋巴管的分布，并结合免疫组化计数微淋巴管数目来评价淋巴管新生的情 况 结果在我们为期６个月的观察中，所有小鼠均成功形成淋巴水肿。尤以ｒ＋Ｓ＋ｒ组形成的淋巴水肿最为明显、稳定 持久．且死亡率和并发症率较低。术后２４周的淋巴管造影显示，Ｒ＋Ｓ及Ｓ＋Ｒ组后肢浅表淋巴管密度增加，ｒ＋Ｓ＋ｒ组少有 淋巴管再生 免疫组化结果显示，件Ｓ＋ｒ组的淋巴管数量要少于Ｒ＋Ｓ及Ｓ＋Ｒ组（１９＜０．０５）。结论在术前３ ｄ及术后２周 分别接受２．２５ Ｇｖ的局部放射。可以成功构建稳定持久的小鼠后肢淋巴水肿模型。 【关键词】淋巴水肿动物模型淋巴管放射 【中图分类号】Ｒ５５１，２【文献标识码】Ａ【文章编号】 １６７３—０３６４（２０１６）０６—０３４９－０４ Ａｎ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ Ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ ｉｎ Ｈｉｎｄ Ｌｉｍｂ ｏｆ Ｍｏｕｓｅ ＳＵＮ Ｙｉｙｕ，ＣＵ１ Ｃｈｕｎｘｉａｏ，ＤＡＩ Ｔｉｎｇｉｎｇ， ＪＩＡＮＧ Ｃｈａｏｈｕａ，ＣＡ０ Ｗｅｉｇａｎｇ，ＬＩ Ｓｈｅｎｇｌｉ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｌａｓｔｉｃ ａｎｄ Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｎｉｎｔｈ Ｐｅｏｐｌｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００１１，Ｃｈｉｎａ．Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＬＩＳｈｅｎｇｌｉ ｍａｉｌ：ｄｒｌｉｓｈｅｎｇｌｉ＠ｓｉｎｃａｃｏｍ）． 一 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｏｒｅ ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ ｂｙ ａｄｊｕｓｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｎｇ ｔｉｍｉｎｇ ａｎｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｄｏｓｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｉｒｔｙ－ｓｉｘ ｆｅｍａｌｅ Ｃ５７ ｍｉｃｅ ａｇｅｄ ８ｗｅｅｋｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｒｏｕｐｓ：”ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｂｅｆｏｒｅ ｓｕｒｇｅｒｙ”ｇｒｏｕｐ（Ｒ＋Ｓ，ｎ＝１２），”ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｓｕｒｇｅｒｙ”ｇｒｏｕｐ（Ｓ＋Ｒ，ｎ＝１２），ａｎｄ”ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｓｕｒｇｅｒｙ”ｇｒｏｕｐ ｆｒ＋Ｓ＋Ｌ ｎ＝１２）．Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｔ ｖａｒｉｅｄ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ：Ｓ＋Ｒ ｇｒｏｕｐ，４．５ Ｇｙ ａｔ ２ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；Ｒ＋Ｓ ｇｒｏｕｐ，４．５ Ｇｙ ａｔ ３ ｄａｙｓ ｂｅｆｏｒｅ ｓｕｒｇｅｒｙ；ａｎｄ ｒ＋Ｓ＋ｒ ｇｒｏｕｐ，２．２５ Ｇｙ ａｔ ｂｏｔｈ ３ ｄａｙｓ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ２ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｔｈｅ ｖｏｌｕｍｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｎｄ ｌｉｍｂｓ ｏｆ ａｎｉｍａｌｓ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｄｒａｉｎａｇｅ ｍｅｔｈｏｄ． Ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｗａｓ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ｂｙ ＦＤＮＧ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｈｉｎｄ ｌｉｍｂ ａｔ ２４ｔｈ ｗｅｅｋ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｓｈｏｗ ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｖｅｓｓｅｌｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ ｓｉｘ—ｍｏｎｔｈ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ， ａｌｌ ｍｉｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓ ｆｏｒｍｅｄ ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｔｈｅ ｒ＋Ｓ＋ｒ ｇｒｏｕｐ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｔａｂｌｅ ｈｉｎｄ ｌｉｍｂ ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ ｗｉｔｈ ｌｏｗｅｒ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ａｎｄ ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ｒａｔｅｓ．Ａｔ ６ ｍｏｎｔｈｓ ｐｏｓｔ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｍａｐｐｉｎｇ，ｔｈｅ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｖｅｓｓｅｌｓ ｉｎ Ｒ＋Ｓ ａｎｄ Ｓ＋Ｒ ｇｒｏｕｐ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｌｅ ｒａｒｅ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒ＋Ｓ＋ｒ ｇｒｏｕｐ． Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｙｒ ｒｅｖｅａｌｅｄ ａ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｖｅｓｓｅｌｓ ｉｎ ｈｅ ｔｒ＋Ｓ＋ｒ ｇｒｏｕｐ，ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｇｒｏｕｐｓ（口＜ｏ．０５）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ａ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｄｏｓｅ ｏｆ ２．２５ Ｇｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ３ ｄａｙｓ ｂｅｆｏｒｅ ｓｕｒｇｅｒｙ ａｎｄ ２ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｍｉｃｅ ｈｉｎｄ ｌｉｍｂ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ；Ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ；Ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｖｅｓｓｅｌｓ；Ｒａｄｉａｔｉｏｎ 构建持久稳定的淋巴水肿动物模型极为困难。 基金项目：国家自然科学基金（８１５０１５７１）。 作者单位：２０００１１ 上海市 上海交通大学医学院附属第九人 民医院整复外科。 通讯作者：李圣利（Ｅ—ｍａｉｌ：ｄｒｌｉｓｈｅｎｇｌｉ＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ）。 传统的小鼠淋巴水肿模型是通过手术切除淋巴结联 合局部放疗的方法进行的．存在着较高的死亡率及 众多的并发症『１－２３。我们对放射剂量和时机进行了优 化．成功构建出一种持久稳定的小鼠后肢淋巴水肿 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｓｕ蜡ｅｒｙ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１６，Ｖｏ１．１２ Ｎｏ．６ 模型，死亡率及并发症都较低，现报道如下。 １材料及方法 １．１实验试剂与仪器 兔抗小鼠ＬＹＶＥ一１抗体（１：４００，Ａｎｇｉｏｂｉ０公司． 美国）；山羊抗兔抗体（１：２００），二氨基联苯胺（武汉 谷歌生物科技有限公司）；荧光显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ公 司，１３本）；倒置相差显微镜（Ｌｅｉｃａ公司，德国）。 １．２实验动物 ３６只健康８周龄Ｃ５７雄性小鼠（中国科学院动 物研究所），ＳＰＦ级条件下饲养．遵守中国国家卫生 研究院实验室研究动物保健和使用指南 １．３实验分组 ３６只小鼠随机分成３组：Ｒ＋Ｓ组（ｎ＝１２），即术 前３ ｄ接受４．５ Ｇｖ的局部照射；Ｓ＋Ｒ组（ ＝１２），即 术后２周接受４．５ Ｇｖ的局部照射；ｒ＋Ｓ＋ｒ组（ｎ＝１２）。 即分别于术前３ ｄ及术后２周接受２．２５ Ｇｙ的局部 照射 未作处理的对侧后肢作为正常对照组 １．４手术方式 在小鼠右后肢足垫处皮下注射亚甲蓝．使得淋 巴结及淋巴管显影．之后腹腔注射５％水合氯醛进 行麻醉 麻醉后在右后肢膝上１ ｃｍ处作一环形切 口，并环形切除１ ｃｍ的皮肤及皮下组织。术中仔细 保留神经血管束、肌肉及肌腱。在解剖显微镜下摘除 胭窝淋巴结．并切除蓝染的淋巴管，电刀灼烧周围皮 肤 手术完成后伤口处涂抹红霉素软膏预防感染。 １．５放射处理 手术处理侧的后肢置于铯１３９的辐射下．暴露 的放射区域以术区为中心面积１．１ ｃｍ２，余下部位用 铅板进行遮挡 Ｒ＋Ｓ组及Ｓ＋Ｒ组分别于术前３ ｄ和 术后２周接受４．５ Ｇｖ的照射。ｒ＋Ｓ＋ｒ组则分别于术 前３ ｄ及术后２周接受２．２５ Ｇｖ的照射。 １．６排水法测量后肢体积变化 为了观察实验侧后肢体积的变化情况．我们采 用排水法进行测量 将小鼠后肢浸入装满生理盐水 的５ ｍＬ的Ｅｐ管内，浸水深度为膝关节上方１ ｃｍ 平面。将后肢拿出后．重新将离心管装满．此时所需 要的液体量即为后肢的体积 同样的方法测量未接 受处理的后肢。所有动物每周测量１次．持续６个 月。每次测量重复３次，取平均值。 １－７荧光显微镜进行淋巴管成像 前期研究中．我们采用葡聚糖一聚丙烯酸荧光 纳米凝胶（ＦＤＮＧ）作为显影剂【３Ｊ，该材料可在体内清 楚显示淋巴管分布情况．具有生物安全性 本实验仍 以此为显影剂来显示深部淋巴管 为了观察后肢新 生淋巴管的分布情况．在术后２４周进行了荧光显微 镜的拍摄。于局麻下经后肢足垫处皮内注射ＦＤＮＧ （２０ ｇ的样本与２０ ｇ的水混合），并轻轻按摩足 垫促使其更好分散 在荧光光学成像系统下进行拍 摄．观察造影剂的摄取及淋巴管的分布情况 １．８免疫组化染色 所有小鼠在术后２４周处死．取后肢的皮肤及肌 肉组织，４％多聚甲醛固定，石蜡包埋，５ ｍ厚度切 片。脱蜡、水化、封闭后，标本与一抗ＬＹＶＥ—ｌ在４℃ 条件下孵育过夜。次日．标本与二抗孵育３０ ｍｉｎ． ＤＡＢ染色．高倍镜下随意选取４个视野进行ＬＹＶＥ— ｌ阳性的管状结构的计数，结果取平均值 １．９统计分析 采用ＳＰＳＳ １３．０软件进行数据分析．排水法测 量肢体体积，微淋巴管计数采用ｔ检验及方差分析． Ｐ＜０．０５为差异具有统计学意义 ２结果 ２．１ 术后观察 所有动物术后都很快产生了急性淋巴水肿 ｒ＋ Ｓ＋ｒ组有１只小鼠（９％）因麻醉过量死亡，说明重复 低剂量的放射对小鼠来说是可以耐受的 Ｓ＋Ｒ组有 ３只小鼠（２５％）死于感染，还有５只（４２％）发生了肢 端坏死。Ｒ＋Ｓ组有３只（２５％）小鼠死于感染，另有４ 只（３３％）发生肢端坏死。 ２．２各组模型淋巴水肿效果的比较 术后１周．Ｒ＋Ｓ和ｒ＋Ｓ＋ｒ组的肿胀程度要明显 高于Ｓ＋Ｒ组。１周后，３组体积均有所减小，相较于 Ｓ＋Ｒ组．Ｒ＋Ｓ和ｒ＋Ｓ＋ｒ组的减少速度较慢 术后第２ 周．分别给予Ｓ＋Ｒ组及ｒ＋Ｓ＋ｒ组４．５ Ｇｖ和２．２５ Ｇｖ 的局部放射．之后这两组的体积继续增加。直到第６ 周 相比之下．由于缺少放射对淋巴管的破坏作用， Ｒ＋Ｓ组的体积持续减小 ６周后 ３组的体积均开始 减小 在第１０周和第ｌ２周时．Ｒ＋Ｓ组及Ｓ＋Ｒ组的 体积接近对照组的水平．ｒ＋Ｓ＋ｒ组第８周后肢体的体 积无明显变化，且维持到术后６个月（图１、２）。 ２．３淋巴水肿后肢的淋巴管显影 我们在术后２４周时使用ＦＤＮＧ为造影剂．来 显影淋巴管 在Ｒ＋Ｓ及Ｓ＋Ｒ组．后肢浅表淋巴管不 仅密度增加，且呈现卷曲、分枝的网络状结构（图３）。 大量的微淋巴管穿越术区的瘢痕组织．并形成新的 连接。ｒ＋Ｓ＋ｒ组少有淋巴管再生．也没有观察到术区 两端淋巴管相连接的情况 ２．４淋 水肿 肢淋 僻新 的 的淋 管 现…薄壁、管 扩大且卷『｝打等特点（ 免疫纰化染色 ，Ｊｊ．ｒ＋Ｓ＋ｒ组的淋 销；数量 少 ４）、这表叫多次的局部放射在抑制淋巴管新生方而 】 Ｒ＋Ｓ及Ｓ＋Ｒ （ ４、５）、卡Ｈ较ｒ埘照侧，实验侧 夔 淑 ｏ０ 孥… 鐾”。 时间（阌） 图１ 术后２４周各组肢体肿胀情况对比 图２术后各组肢体体积变化 Ｆｉｇ．Ｉ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｄｅｍａｔｏｕｓ ｌｉｍｂｓ ｉｌｌ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ａｔ ｔｂｅ ２４ｔｈ ｗｅｅｋ ａｆｔｅｒ Ｆｉｇ．２ Ｖｏｌｕｍｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｎｄ ｌｉｍｂｓ ｉｎ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｔｈｅ ｐｏｉｎｔ ｌ・ ： ８ ｜ ＇Ｊ ■ ≤ 采≮ ．≮ Ｄ ｊ． ｓＲ 图３术后２４周后肢活体淋巴管造影 图５微淋巴管计数 Ｆｉｇ．３ Ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｈｉｎｄ ｌｉｍｂｓ ｉｎ Ｆｉｇ．５ Ｍｉｃｒｏｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｃｏｕｎｔ ｖｉｖｔＪ ａｔ ｔｈｅ ２４ ｗｅｅｋ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ３讨论 受４．５ Ｇｖ的局部放射（Ｒ＋Ｓ）．术后２周接受４．５（ ｖ 我 成功制｝；午Ｊ，＿一种较持久ｌＩ．稳定的小鼠 肢 的』南部放射（Ｓ＋Ｒ）．术前３ ｆ１及术后２周分别接受 淋 水『Ｊｆ｛１模， ，【 ｊ‘维持至少６个ＪＪ 我仃】发现．Ｉ 传 ２．２５（ ｖ的放射（１．＋ ＋ｒ组） 结果 示．３ 都发 了 统的放射力 式卡Ｉ｛比１４－５１．通过多次低刺艟照射的方 淋 水肿，其一ｆｌ ＋Ｓ＋ｒ组水肿最为明 目．持久．死 式．实验动物的化’Ｉ ： 及Ｊｒ发症ｎ，Ｊ发 ！｛Ｉ ：降低、 昝及）ｉ：发 率最低． 无肢体坏死发生 此．我『『Ｊ认为血韭过『．术辅以多次低利量局部放射ｆｆ，Ｊ 何报道 ，Ｊ：，放射 致淋 水肿．是｝｝＿ｉ丁射线破 式ｌＪＪ‘以有效制箭持久儿 定的淋 水肿模Ｊ ．为 坏ｒ淋 管内皮细胞，从而导敛脂质沉 、 ＦＧＦ—Ｂ 卡ｌ｛火删：究提供ｒｌ ｆ 的淋 水肿模Ｊ 制箭方法 生成增多（已 其会抑制淋 管内皮的增殖） ．．但 采川ｔ 纯的于术力‘ ．斤不能制备持久的水肿 址．【｝１丁手术刺激会使淋 管内皮细胞及祖细胞参 与淋 管新， 『大ｌ此术前给了放射就有可能会被术 模 ： 蛰址ｍ Ｊ：淋 僻内皮 胞的增殖能力较强． 后刺激所 生的淋 管新牛作』Ｌ｝ｊ所抵消．而无法产 致淋 僻恢复阿通 ＪｏｓｅｐＩ］等 的研究 ，Ｊｊ．淋 ｕ』Ｊ 的淋 水肿效果这就是术后ｌ周Ｒ＋Ｓ组的 １ 。圳。除小＝ 所致的炎性反』、 ．会使Ｊ州 织释放 体积增Ｋ 怏． 水肿状念很快消退．最后 没有形 促淋 竹新ＩＩ－： ｒ．｛ｕ１ ＶＥＧＦ—Ｃ、 （ Ｆ等．激｝ 十乡ｆＩ１ 成【Ｊ』Ｊ 的淋 水肿的原 ，而在术后给 放射．不仪 胞平¨ 仃 的淋 僻内皮 胞．使其分化增殖．从 抑制ｒ ｒ术刺激产生的淋 管新 作用．而且抑制 促进淋 符新 陔研究指…．没仃额外的ｒ 颅很难 Ｊ ＶＥＧＦ—Ｃ的释放 Ｉ『夫Ｉ此．Ｓ＋Ｒ组水肿时问持续史 形成持久的淋 水肿 研究报道．通过术的或术 放 长 然 ．４．５ Ｇｖ的放射趟及手术创伤导致小鼠的步Ｅ 射的 式ｌ１『使淋 水肿的持续时川延Ｋ 址．以 半及肢体坏北率上升 、ｍ 将总量为４．５（；ｖ的放射 往的研究巾．小鼠的化１１＝牢及肢端坏化 钲都较尚．１ＩＪ’ 齐ｌＪ艟分成 等分， 存／ｆ 同时间点给予（术ｎ订３ ｄ． 能是小恰 的放射齐ＩＪ 所导致『人Ｉ此．蒯 放射剂 术后２』州）．结果 永．淋 管新生现象及大剂量辐 使 小鼠 ／ｆ 会产 严吐副作川．义能维持稳定的 射 敛的肢体坏少匕确实得到ｒ抑制及避免．．另外． 淋 水肿， 得尤为霞要 我仃Ｊ 汁ｒ ３种纠ｌ合，以 丁反复放射 敛的细胞辐射敏感性增加 Ｊ．其抑制 确定能与ｒ术较好 介的放射利 ． 术Ｉｍ ３ Ｉ接 淋 管新， 的效应叫！ｌ 得剑加强 、凶此．术后很快就 ・３５２・ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１６，Ｖｏ１．１２ Ｎｏ．６ 能达到淋巴水肿急性期的高峰．且水肿程度在２４周 ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ ａｎｉｍ ａｌ ｍｏｄｅｌ ｗｉｔｈ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｌｙｍｐｈａｄｅｎｅｃｔｏｍｙ 内都维持在一个较高水平．而死亡及肢体坏死之类 的副反应却较少。活体淋巴管造影及免疫组化显示． ［３］ ａｎｄ ｌｏｗ—ｄｏｓｅ ｒａｄｉａｔｉｏｎ［Ｊ】．Ｐｌａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓｔｒ Ｓｕｒｇ Ｇｌｏｂ Ｏｐｅｎ， ２０１４，２（３）：ｅ１２１． Ｄａｉ Ｌ Ｚｈｏｕ Ｓ，Ｙｉｎ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｘｔｒａｎ－ｂａｓｅｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｎａｎｏｐｒｏｂｅｓ 淋巴管密度的差异证实了ｒ＋Ｓ＋ｒ组淋巴管新生作用 较弱。而且辐射的时机对模型的构造也起到关键作 用，之所以选择术前３ ｄ进行放射．是因为有文献报 道辐射对淋巴组织的损害是在３ ｄ后开始的ｔｉｌｌ：而 术后２周正是术后淋巴管新生作用开始的时候 虽 【４】 ｆｏｒ ｓｅｎｔｉｎｅｌ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｍａｐｐｉｎｇ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２０１４，３５（２８）： ８２２７—８２３５． Ｋａｎｔｅｒ ＭＡ Ｓｌａｖｉｎ ＳＡ Ｋａｐｌａｎ Ｗ．Ａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ ．Ｐｌａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓｔｒ Ｓｕｒｇ，１９９０，８５（４）：５７３－５８０． ｉｂａｚ ＪＪ，Ｏ，Ｂｒｉｅｎ ＢＭ ｅｔ ａ１．Ｃｒｅａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｔａｌ ｃａｎｉｎｅ 【５】 Ｃｈｅｎ ＨＣ，Ｐｒｌｉｍｂ ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ［ｄ１．Ｐｌａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓｔｒ Ｓｕｒｇ，１９８９，８３（６）：１０２２—１０２６． ［６】 Ｊｏｓｅｐｈ ＷＪ，Ａｓｃｈｅｎ Ｓ，Ｇｈａｎｔａ Ｓ ｅｔ ａ１．Ｓｔｅｒｉｌｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ 然总剂量仍为４．５ Ｇｖ，但采取分次放射的方法显著 减轻了副作用。因此，我们认为上述联合方式是构建 淋巴水肿模型的有效方法 ４ 总结 ［Ｊ］．Ｐｌａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓｔｒ Ｓｕｒｇ，２０１４，１３４（１）：６０－６８． Ｐａｒｋ ＨＳ，Ｊｕｎｇ ＩＭ，Ｃｈｏｉ ＧＨ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｒｏｄｅｎｔ ｈｉｎｄｌｉｍｂ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ：ｓｕｒｇ．＇ ｃａｌ ｒａｄｉｃａｌｉｔｙ ｖｅＹｓｕｓ ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｂｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ Ｉｎｔ，２０１３，２０１３： ２０８９１２． 我们通过“低剂量放射＋手术＋低剂量放射”的 方式成功构建小鼠淋巴水肿模型，效果持久，死亡率 及并发症率较低，此模型能够满足继发性淋巴水肿 研究的要求。 参考文献 Ｌｅｅ－Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ Ｌ，Ｗｉｔｔｅ ＭＨ，Ｂｅｍａｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ ｏｆ ａ ＳＲ．Ｓｔｒｏｍ ＥＡ．Ｆｉｆｅ Ｃ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ：ｃｌｉｎｉｃａ１ 【８］ Ｈｙｍｅｓｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ，ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ２００６【Ｊ】．Ｊ Ａｍ Ａｃａｄ Ｄｅｒｍａｔｏｌ，２ｏ０６，５４（１）：２８—４６． ｅｒ ＣＴ，Ｋｕｏ ＡＨ，Ｗｏｎｇ ＨＩ（’ｅｔ ａ１．Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ［９】 Ｋｅｓｌｆａｃｔｏｒ—Ｃ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ［Ｊ］．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，２０１４，１７（２）：４１９－４２７． 【１０】 Ｈｏｐｅｗｅｌｌ ＪＷ，Ｎｙｍａｎ Ｊ，Ｔｕｒｅｓｓｏｎ Ｉ．Ｔｉｍｅ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ａｃｕｔｅ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ：ａ ｂａｌａｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｒａｄｉｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ啊．Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｂｉｏｌ， ２００３，７９（７）：５１３—５２４． ｔｒｕｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｎ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ 【１ １］ Ｃｏｎｇｄｏｎ ＣＣ．Ｔｈｅ ｄｅｓｍｄｅｎｔ ｍ。ｄｅｌ。ｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａ１ ｌｙｍｐｈｅｄｅｍａ［Ｊ】．ＬｙⅡｌｐｈ。１。ｇｙ，１９９９，３２ （３）：１１１－１１７． ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ａ ｌｏｗｅｒ ｌｉｍｂ ［２１ Ｙａｎｇ ＣＹ，Ｎｇｕｙｅｎ ＤＨ，Ｗｕ ＣＷ，ｅｔｔｉｓｓｕｅ［Ｊ】．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９６６，２６（６）：１２１ １－１２２０． （收稿Ｅｔ期：２０１６年９月１０日；修回日期：２０１６年１Ｏ月２９ １３） （上接第３４５页） ［Ｊ］．Ｊ Ｃｒａｎｉｏｆａｃ Ｓｕｒｇ，２０１４，２５（５）：１７４０－１７４５． ＪＷ，Ｋｉｍ Ｎ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｐｒｉｎｔｉｎｇ ［１３】 ＣｈｏｉＣｅｌｌｓ，２００７，２５（１０）：２６４８—２６５９． 【９】 Ｃａｓａｐ Ｎ，Ｖｅｎｅｚｉａ ＮＢ，Ｗｉｌｅｎｓｋｙ Ａ，ｅｔ ａ１．ＶＥＧＦ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ ｐｅｒｉｏｓｔｅａｌ ｄｉｓｔｒａｃｔｉｏｎ—－ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ：ａ ｍｉｃｒｏ—－ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ ｃｒａｎｉｏｆａｃｉｌａ ｐｌａｓｔｉｃ ｓｕｒｇｅｒｙ［Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｐｌａｓｔ Ｓｕｒｇ， ２０１５，４２（３）：２６７－２７７． ｙ ＳＭ，ｅｔ ａ１．３Ｄ ｐｒｉｎｔｉｎｇ ｏｆ ｓｃａｆｆｏｌｄｓ ｆｏｒ ［１４］ Ｄｏ ＡＶ，Ｋｈｏｒｓａｎｄ Ｂ，Ｇｅａｒｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ ｓｔｕｄｙ【Ｊ］．Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ Ｐａｒｔ Ａ，２００８，１４（２）：２４７—２５３． ［１０］ Ａｌｔｕｇ ＨＡ，Ａｙｄｉｎｔｕｇ ＹＳ，Ｓｅｎｅｉｍｅｎ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌａｔｅｎｃｙ ｐｅｒｉｏｄｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｎｅｗ ｂｏｎｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ１．Ａｄｖ Ｈｅａｌｔｈｃ Ｍａｔｅｒ，２０１５，４ （１２）：１７４２－１７６２． ｏｐｏｕｌｏｓ Ｌ，Ｋａｒｒｉｎｇ Ｔ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｅｒｉｏｓｔｅｕｍ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ［１５】 Ｋｏｓｔｂｙ ｐｅｒｉｏｓｔｅａｌ ｄｉｓｔｒａｃｔｉｏｎ：ａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｂｂｉｔ ｍｏｄｅｌ［Ｊ１＿Ｏｒａｌ Ｓｕｒｇ Ｏｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ Ｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｌ Ｅｎｄｅｄ， ｊａｗ ｂｏｎｅ Ａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ，１９９５，２２ （３）：２４７－２５４． ｉｎｉ ＲＰ，Ｓｃｈａｅｆｅｒ Ｄ，ｅｔ ａ１．／ｎ ｖｉｖｏ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ［１６］ Ｓｔｅｖｅｎｓ ＭＭ，Ｍａｒ２０１ １．１ １ １（５）：５３９—５４６． ［１ １］ Ｂａｙａｒ ＧＲ，Ｇｕｎａｙｄｉｎ Ｙ，Ｏｒｔａｋｏｇｌｕ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｎｅｗ ｂｏｎｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ｐｅｒｉｏｓｔｅａｌ ｄｉｓｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄ ｒａｂｂｉｔｓ叭０ｒａｌ Ｓｕｒｇ ０ｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ ｏｒｇａｎｓ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ【Ｊ】．ＰＮＡＳ，２００５，１０２（３２）：１１４５０一ｌ１４５５． ｅｒ Ｐ，Ｂｕｍｉｌｌｅｒ Ｌ，Ｓｃｈｌｅｇｅｌ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｄｙｎａｍｉｃ ｐｅｒｉｏｓｔｅａｌ ［１７】 ＫｅｓｓｌＯｒａｌ Ｒａｄｉｏｌ，２０１２，１ １３（４）：４７２—４７９． ［１２】Ｓｕｅｒ ＢＴ，Ｏｒｔａｋｏｇｌｕ Ｋ，Ｇｕｎａｙｄｉｎ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｂａｒｉｃ ｏｘｙｇｅｎ ｏｎ ｄｅ ｎｏｖｏ ｂｏｎｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｐｅｒｉｏｓｔｅａｌ ｄｉｓｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ Ｂｒ Ｊ Ｏｒａｌ Ｍａｘｉｌｌｏｆａｃ Ｓｕｒｇ，２００７，４５㈤：２８４－２８７． （收稿日期：２０１６年９月２３日；修回日期：２０１６年１１月１４日）