２０１３年２月 中国实验动物学报 ＡＣＴＡ ＬＡＢＯＲＡＴ０ＲＩＵＭ ＡＮＩＭＡＬＩＳ ＳＣＩＥＮＴＩＡ ＳＩＮＩＣＡ Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１３ Ｖ０Ｉ．２ｌ Ｎｏ．１ 第２１卷第１期 二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌组织ＣＬＤＮ１ 基因表达及其甲基化 张斌 ，李琦 ，殷佩浩 ，高虹 ，赵成根 ，范忠泽 （１．上海中医药大学附属普陀医院中医肿瘤科，上海２０００６２；２．复旦大学附属中山医院青浦分院肝病科，上海２０１７００） 【摘要】 目的探讨二乙基亚硝胺（ｄｉｅｔｈｙ１ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ，ＤＥＮ）诱导大鼠肝癌发生中肝癌组织ＣＬＤＮ１基因表达 及其启动子甲基化的规律。方法６５只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机选择４Ｏ只作为模型组，其余作为正常组。模型组在 １—１２周饮用含ＤＥＮ ８０ ｍｇ／Ｌ的饮水以诱癌（每日８ｒａｇ／ｋｇ），各组在造模过程的第４周、８周、１２周、ｌ６周随机５只 取肝，第２Ｏ周剩余大鼠取肝，应用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测肝组织ＣＬＤＮ １ ｍＲＮＡ的表达，应用ＭＳＰ法检测肝组织ＣＬＤＮ１ 启动子甲基化和非甲基化。结果 模型大鼠病死率为１０％（４／４０），正常组无死亡。至第２Ｏ周，成瘤率达到 １００％。ＲＴ—ＰＣＲ显示，与正常组比较，模型组在１６周和２０周ＣＬＤＮ１ｍＲＮＡ表达下调（Ｐ＜０．０５），其他各周两组差 异不显著。ＭＳＰ结果表明，模型组肝组织ＣＬＤＮ１甲基化率达７７．７８％，而正常肝组织甲基化率为２４％，两者比较差 异有显著性（Ｐ＜０．Ｏ１）。结论进一步深入研究。 ＣＬＤＮ１启动子甲基化及ＣＬＤＮ１基因表达下调与大鼠肝癌病变相关，对其机制值得 【关键词】 原发性肝癌；二乙基亚硝胺；大鼠；ＣＬＤＮ１；ＤＮＡ甲基化 【中图分类号】Ｑ９５—３３，Ｒ７３０．２ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１００５－４８４７（２０１３）Ｏ１－００８０－０４ Ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－４８４７．２０１３．０１．０１６ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ Ｏｆ ＣＬＤＮ １ ｉｎ ｒａｔ ｍｏｄｅｌｓ ０ｆ ｈｅｐａｔＯｃｅＵｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ ＺＨＡＮＧ Ｂｉｎ ，ＬＩ Ｑｉ ，ＹＩＮ Ｐｅｉ－ｈａｏ‘，ＧＡＯ Ｈｏｎｇ ，ＺＨＡＯ Ｃｈｅｎｇ—ｇｅｎ ，ＦＡＮ Ｚｈｏｎｇ—ｚｅ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ａｆｉｌｉｆａｔｅｄ Ｐｕｔｕｏ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００６２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ Ｑｉｎｇｐｕ Ｂｒａｎｃｈ ｏｆ Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１７００） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＣＬＤＮ１ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｒａｔ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｌｅ Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ｒｔ＝２５）ａｎｄ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（ｎ＝４０）．Ｔｈｅ ｒａｔｓ ｏｆ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ＤＥＮ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ（８０ ｐｐｍ） ａｔ ａ ｄｏｓｅ ｏｆ ８ ｍｇ／（ｋｇ‘ｄ）ｆｏｒ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ １２ ｗｅｅｋｓ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｈｅｐａｔｏｍａ．Ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｅｘｅｃｕｔｅｄ ５ ｒａｔｓ ａｔ ｔｈｅ ４ｔｈ， ８ｔｈ，１２ｔｈ，１６ｔｈ ｗｅｅｋ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｋｉｌｌｅｄ ａｔ ｔｈｅ ２０ｔｈ ｗｅｅｋ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ ｗａｓ ｄｅ— ｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ．Ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ，ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＬＤＮ１ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ＭＳＰ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｔ ｔｈｅ ｅｎｄ ｏｆ ２０ｔｈ ｗｅｅｋ，ｔｈｅ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｒａｔｅ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ０ ａｎｄ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ １０．Ｏ％，ａｎｄ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｆｏｒ— ｍａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ａｔ ２０ｔｈ ｗｅｅｋ ｗａｓ １００％．ＲＴ—ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｄｅｃｌｉｎｅｄ ｏｎｌｙ ａｔ １６ｔｈ ｗｅｅｋ ａｎｄ ２０ｔｈ ｗｅｅｋ（Ｐ＜０．０５ ｖｓ．ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ）．ＭＳＰ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＣＬＤＮ１ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ７７．７８％，ｗｈｉｌｅ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｏｎｌｙ ２４％（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＬＤＮ１ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ＣＬＤＮ１ ａｒｅ ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒ０ｓａｍｉｎｅ，ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｓ ｗｏｔｒｈ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｐｒｉｍａｒｙ ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ；Ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ（ＤＥＮ）；Ｒａｔ；ＣＬＤＮ１；ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ［基金项目］上海市普陀区科委自主创新基金课题资助项目（普科委２００９３７）；上海市嘉定区卫生局基金资助（ＮＯ．ＫＹＸＭ２０１０．１２－０３）。 ［作者简介］张斌（１９６７一），男，副主任医师，博士。研究方向：肝病的诊治。Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｘｙ２０１０＠１６３．ｃｏｒｎ 中国实验动物学报２０１３年２月第２ｌ卷第１期Ａｃｔａ Ｌａｂ Ａｎｉｍ Ｓｃｉ Ｓｉｎ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１３，Ｖｏ１．２１．Ｎｏ．１ ８１ 目前原发性肝细胞肝癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏ． ｍａ，ＨＣＣ）仍是全球发病率较高的恶性肿瘤，其发病 主要与乙肝病毒感染、饮酒及饮食中的黄曲霉菌污 染等多种因素有关，素有“癌中之王”之称，尽管在 肝癌领域方面取得了突飞猛进的进展，但是死亡率 仍然非常高，目前对其发病机制还不清楚¨。 。紧 密连接蛋白１（ｃｌａｕｄｉｎ一１，ＣＬＤＮ１）基因是粘着小带 蛋白家族成员，是非常重要的抑癌基因。为进一步 探索肝癌发病机制，本研究对大鼠二乙基亚硝胺 （ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ，ＤＥＮ）肝癌模型开展研究，对其 ＣＬＤＮ１基因启动子甲基化及基因表达情况进行了 分析。 １材料与方法 １．１ 材料 ＤＥＮ，０．９５ ｇ／ｍＬ，纯度９９．９％（Ｓｉｇｍａ公司）。 Ｔｒｉｚｏｌ ＲＮＡ试剂（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；ＰＣＲ试剂（Ｐｒｏ－ ｍｅｇａ公司）；ＳＰＦ级Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠，８周龄，６５只， 体重（１００±１０）ｇ，购自上海西普尔一必凯实验动物有 限公司【ＳＣＸＫ（沪）２００８－００１６】，饲养于上海中医药 大学附属普陀医院实验动物房【ＳＹＸＫ（沪）２００８． ００５５】。 １．２ 方法 １．２．１ 大鼠肝癌模型制备 所有大鼠适应性饲养１周后，随机选择４０只作 为模型组，其余作为正常组。除正常组常规给饮用 灭菌水外，模型组在１～１２周的每天给饮用含ＤＥＮ 饮水以诱癌，用量为每天８ ｍｇ／（ｋｇ・ｂｗ），不足部分 用灭菌水补足，１２周后改为提供灭菌水，于实验过 程的第４周、８周、１２周、１６周，各组随机取５只大 鼠取肝，第２０周剩余大鼠全部取肝，观察大鼠肝脏 质地及结节形成情况，统一取肝右叶组织保存于 一８０℃备用。 １．２．２肝组织ＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ的表达量检测 取肝组织匀浆后提取总ＲＮＡ用于逆转录反应， 采用紫外分光光度计测定其吸光度，其中逆转录体 系为２０ Ｌ，反应条件为２５℃１０ ｍｉｎ，４０＂１２６０ ｍｉｎ， ８５￣Ｃ５ ｍｉｎ后结束。取１ Ｌ的ｃＤＮＡ用于ＰＣＲ扩 增，扩增体系为２５ Ｌ，其中ＣＬＤＮ１上下游引物分 别为：５ ．ＧＴＧＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＧＴＴＴＣＧ一３ ；５ ．ＧＧＴＧ— ＧＡＣＡＣＡＡＡＧＡＴＴＧＣＧＡＴ－３ ，探针为５ 一ＣＣＡＡＴ— ＴＡＣＣＡＴＣＡＡＧＧＣＴＣＴＧＧＴＴＧＣＣ一３ ；反应条件为： ９５℃３０ ｓ变性，９５ ｃＩ：５ ｓ，６Ｏ℃３０ ｓ，４０个循环，取３ 个复管的平均值测定其Ｃｔ值，肝组织ＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ 的表达量＝２’△ｎ（Ａ Ｃｔ值＝靶基因Ｃｔ值．ＧＡＰＤＨ Ｃｔ值）。 １．２．３ ＭＳＰ法检测肝组织ＣＬＤＮ１启动子甲基化和 非甲基化 ＭＳＰ扩增ＣＬＤＮ１启动子甲基化，其中甲基化 ＣＬＤＮ１上下游引物分别为：５ 一ＡＣＧＴＴＴＧＴＴＡＧＴ－ ＴＣＧＡＧＧＣ一３ ；５ 一ＡＴＡＡＣＣＧＣＡＡＣＣＣＧＡＡＴＴＣ－３ ， 未甲基化ＣＬＤＮ１上下游引物分别为：５ 一ＴＧＧＡＴ－ ＧＴ ｒＴＧＴＴＡＧＴ ｒＴＧＡＧＧＴ－３ ： ５ 一ＡＴＡＡＣＣＡＣＡＡＣ－ ＣＣＡＡＡＴＴＣＡＣＡ Ｃ一３ ，检测方法如下：（１）提取大鼠 肝组织ＤＮＡ；（２）对ＤＮＡ进行纯化和修饰，用去离 子水稀释２ ｊｘｇ ＤＮＡ至５０ Ｌ，加入４ Ｌ ３ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ后３７￣Ｃ ３０ ｍｉｎ，然后加入３ ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ ５．０的 重亚硫酸钠５２０ ＩｘＬ和１０ ｍｏｌ／Ｌ的苯二酚３Ｏ Ｌ，石 蜡油覆盖，５５℃水浴１６ ｈ；（３）纯化回收ＤＮＡ；（４） ＰＣＲ扩增体系为２５ Ｌ，其条件为９５℃５ ｍｉｎ后按照 ９５℃３０ Ｓ，５５℃３０ Ｓ，７２℃３０ ｓ进行３５个循环，然后 ７２￣（２６ ｍｉｎ；（５）对ＰＣＲ产物电泳情况进行甲基化状 态分析，其中以ＣｐＧ甲基化酶修饰大鼠肝组织ＤＮＡ 作为甲基化阳性对照，以ｄｄＨ：Ｏ作为空白对照。结 果判定：ＭＳＰ产物电泳时只出现未甲基化条带，样 本计为未甲基化；出现甲基化条带，无论是否出现未 甲基化条带，均为甲基化。 １．２．４数据统计 采用ＳＰＳＳ １１．０软件进行分析，计数资料的统 计采用卡方检验，计量资料以平均数±标准差表示， 采用单因素方差分析，两组间均数比较采用ｔ检验， Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２ 结果 ２．１肝组织病理 在２０周实验结束时，正常大鼠无死亡，而模型 大鼠病死率为１０％（４／４０）（病死动物：指实验过程 中已经自然死亡的，或已经病死的；而每个时间点选 择的５个，是尚成活部分中随机选的）；模型组大鼠 肝脏表面粗糙，至１６周后肝表面及切面可见散在结 节形成，在２Ｏ周后成瘤率为１００％，而正常组无肝 脏肿瘤形成。肝组织ＨＥ染色进行观察，发现正常 肝脏组织结构正常，无明显炎症、坏死、纤维化及肿 瘤形成，如图１Ａ所示。而模型组在２０周时，肝小 叶结构紊乱，肝细胞炎症、坏死明显，肝组织散在肿 瘤样组织形成，局部还有假小叶和肝囊肿形成，可见 中国实验动物学报２０１３年２月第２ｌ卷第１期 Ａｃｔａ Ｌａｂ Ａｎｉｍ Ｓｃｉ Ｓｉｎ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１３，Ｖｏ１．２１．Ｎｏ．１ ８３ ＣＬＤＮ１在肝癌方面的研究报道还较少，但是也有报 道认为与肝癌发病有关，可以作为肝癌转移复发相 关研究的重要靶点［９ ３。本课题对二乙基亚硝胺诱 导大鼠肝癌模型进行初步研究，结果发现，与正常组 比较，模型组在１６周和２０周ＣＬＤＮ１ｍＲＮＡ表达下 调（Ｐ＜０．０５），其他各周两组差异不显著，表明大鼠 在癌变期间出现了ＣＬＤＮ１的表达下调，表明大鼠肝 癌发病过程可能与ＣＬＤＮ１表达下调有关。 在哺乳动物生长过程中，基因组印记是长期进 化过程中形成的自我监护机制，在胚胎生长、发育过 程中起着重要作用。“印记”机制是呈印记一方的 基因调控序列ＤＮＡ（一般为启动子）被甲基化、组蛋 白被乙酰基化和组蛋白被甲基化，其中ＤＮＡ甲基化 是其关键。肝癌的发生是复杂的、多步骤、多阶段不 断演进的过程，其中抑癌基因启动子甲基化在肿瘤 ｝ ［ ［ ［ １ ２ ３ ４ ５ ６ ｉ ］ ］ ］ 发病中起着重要的作用，与肿瘤血管生成、浸润及转 移等密切相关¨ “ ，本研究对模型组和正常组肝组 织中ＣＬＤＮ１启动子甲基化水平检测后发现，在１６ 周成瘤的３６例肝癌前病变组织中发生ＣＬＤＮ１完全 及部分甲基化共２８例，甲基化率达７７．７８％，而正 常肝组织２５例，发生完全及部分甲基化６例，甲基 化率为２４％，两者比较差异有显著性（Ｐ＜０．０１），表 明在ＤＥＮ诱导大鼠肝癌过程中，ＣＬＤＮ１启动子甲 基化发生是造成肝癌形成的因素之一。 本研究采用ＤＥＮ诱导大鼠肝癌模型，发现在 ２０周实验结束时，正常大鼠无死亡，而模型大鼠病 死率为１０％（４／４０），模型组大鼠肝脏表面粗糙，至 １６周后肝表面及切面均可见结节形成，在２Ｏ周后 成瘤率为１００％，这也得到病理及电镜的进一步证 实。ＤＥＮ诱导肝癌模型与人类肝癌发病过程比较 接近，经过中毒损伤一增生硬化一癌变３个阶段，是 理想的研究肝癌动物模型，值得进一步推广应用。 （本文图１见封三）。 参 考 文 献 Ｓｉａ Ｄ，Ｖｉｌｌａｎｕｅｖａ Ａ．Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉ－ ｎｏｍａ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．２０１１；８１ Ｓｕｐｐｌ １：１８—２３． Ｈｕｙｎｈ Ｈ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｙ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏ— ｍａ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１０，８０（５）：５５０—５６０． Ｚｅｎｄｅｒ Ｌ，Ｖｉｌｌａｎｕｅｖａ Ａ，Ｔｏｖａｒ Ｖ，Ｓｉａ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｃａｎｃｅｒ ｇｅｎｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ，２０１０，５２（６）： ９２ｌ一９２９． Ｓａｗａｄａ Ｎ，Ｍｕｒａｔａ Ｍ，Ｋｉｋｕｃｈｉ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｔｉｇｈｔ ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｈｕ— ｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｍｅｄ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃ，２００３，３６（３）：１４７—１５６． Ｍｏｒｏｈａｓｈｉ Ｓ，Ｋｕｓｕｍｉ Ｔ，Ｓａｔｏ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌａｕｄｉｎ一１ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２００７，２０（２）：１３９—１４３． Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｋ，Ｋｕｓｕｍｉ Ｔ，Ｓａｔｏ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌａｕｄｉｎ一１ ｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｓｑｕａ－ ［ ［ ［ ［ ［ ７ ｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉ８ ｎｏｍａ．Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ．２００８ Ａｐｒ；２９（２）：９ Ｏ ７１—７６．１ ］ ］ ］ ］ ］ Ｃｈａｏ ＹＣ，Ｐａｎ ＳＨ，Ｙａｎｇ ＳＣ，ｅｔ ａ１．Ｃｌａｕｄｉｎ－１ ｉｓ ａ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒ－ ｃｉｎｏｍａ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．２００９ Ｊａｎ １５；１７９（２）：１２３ 一ｌ３３． Ｙｏｓｈｉｄａ Ｔ，Ｋｉｎｕｇａｓａ Ｔ，Ａｋａｇｉ Ｙ，ｃｔ ａ１．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌａｕｄｉｎ－１ ｉｎ ｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇ・・ ｎｏｓｉｓ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１，３１（７）：２５１７—２５２５． Ｓｕｈ Ｙ，Ｙｏｏｎ ＣＨ，Ｋｉｍ ＲＫ，ｅｔ ａ１．Ｃｌａｕｄｉｎ－１ ｉｎｄｕｃｅｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃ－Ａｂｌ—ＥＲＫ ｓｉｇ－ ｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｌｉｖｅｒ ｃｅｉｌｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２０１２，１９． ［Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ］ Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ＪＭ，Ｇｏｏｄｍａｎ ＪＩ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｔｈａｔ ｍａｙ ｐｌａｙ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ（ＰＢ）一ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｉｖｅｒ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ ｄｕｅ ｔｏ ａｌｔｅｒｅｄ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｓｃｉ，２００８，１０４（１）：８６ —９９． Ｈｅｒｍａｎ ＪＧ．Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｃａｎｃ－ ｅｒ．Ｓｅｍｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ，１９９９，９（５）：３５９—３６７． ［收稿日期］２０１２－１０—１２