对环境反应敏感.如对噪声、湿度敏感。不能呕吐;生长发育期长,长骨骨骺线不骨化。有21对染色体。 对营养缺乏敏感;大鼠的肝脏再生能力强,;垂体、肾上腺功能发达,应激反应敏感,行为表现多样。 小鼠种类:常用品种及品系
一)、小鼠1、BALB/c(1)毛色:白化。自发高血压症、单克隆抗体的制备、乳腺肿瘤自然发生率低、
2、C57BL(1)毛色:黑色。嗜酒精性高;
⑦常被认作\"标准\"的近交系,为许多突变基因提供遗传背景。
(3)主要用途:是肿瘤学、生理学、免疫学、遗传学研究中常用的品系。 3、C3H/He(1)毛色:野鼠色
①乳腺癌发病率高,6~10月龄雌鼠发生率达85%~100%,乳腺癌通过乳汁而不是胎盘途径传播。
4、DBA建立了两个亚系:DBA/1和DBA/2(1)毛色:淡棕色。
DBA/2(DBA/2/Ola及DBA/2N) 主要特性:
①对大部分DBA/1生长的瘤株有抗性(但黑色素瘤S-91在两系小鼠中均能生长); ②雌雄鼠均会自发产生淋巴瘤;听源性癫痫发作,36日龄小鼠为10O%,55日龄后为5%; 5、CBA(1)毛色:野鼠色。 (2)主要特性: ① CBA/J/Olac雌鼠的乳腺肿瘤发生率为33%~65%;雄鼠肝细胞肿瘤发生率为25%~65%; ②CBA/J/Ola对中等剂量放射线有抗性。对麻疹病毒高度敏感;
③CBA/n携带性连锁隐性基因 xid ,该基因使小鼠脾脏B淋巴细胞数目减少并有缺陷,导致成熟B细胞缺少,从而对某些B细胞抗原缺乏免疫应答。 6、A系(1)毛色:白化。
②6月龄雌鼠44%有红斑狼疮(LE)细胞;
③未足月幼鼠进行胸腺切除后,84%出现矮小综合症;
⑥对麻疹病毒高度敏感。
7、AKR ①为高发白血病株小鼠,雌雄鼠淋巴细胞白血病发生率可达68%-90%; 8、615 对津638白血病病毒敏感。 9、TA1(津白1号)和TA2(津白2号) TA1为自发低乳腺癌系,TA2为自发高乳腺癌系。 (3)主要用途:乳腺肿瘤的研究。
11、昆明小鼠(KM) (1)毛色:白色。 (2)主要特性:①繁殖率和成活率高;②抗病力和适应性很强;③雌鼠乳腺肿瘤发生率为25%。 (3)主要用途:广泛应用于药理、毒理、病毒和细菌学的研究,以及生物制品、药品的检定。 14、裸小鼠(nude mice)
由于无胸腺而仅有胸腺残迹或异常胸腺上皮(该上皮不能使T细胞正常分化),导致 缺乏成熟的T淋巴细胞,因而细胞免疫功能低下。B淋巴细胞正常,但其免疫功能欠佳。(2)主要用途:广泛应用于肿瘤学、免疫学、毒理学等基础医学和临床医学的研究。
二)、大鼠 1、F344/N (1)毛色:白化
①寿命:10周龄时雄鼠体重达到190~280g,雌鼠达120~190g。平均寿命雄鼠为31个月,雌鼠为29个月;雄鼠睾丸间质细胞瘤为85%。
2、Lou/CN (1)毛色:白化
(2)主要特性:Lou/CN大鼠免疫细胞瘤(免疫球蛋白分泌瘤)发病率,雄鼠为31%,雌鼠16%,发病部位主要位于回盲部淋巴结。该肿瘤细胞的分化率极低,多在1月内死亡。此肿瘤可移植到同系大鼠及其杂交的F1代,60%的免疫细胞合成并分泌单克隆免疫球蛋白。
(3)主要用途:常用于免疫学研究,特别是制备单克隆抗体。Lou/CN大鼠的腹水量比BALB/c小鼠大几十倍,可大量生产单克隆抗体。
3、SHR/Ola大鼠 (1)毛色:白化。
自发性高血压,且发生率高,无明显原发性肾脏或肾上腺损伤,在10月龄后雄鼠血压的收缩压为26·66~46·66kPa,雌鼠为23·99~26·66kPa;
4、Wistar大鼠(1)毛色:白化。 头部较宽、耳朵较长、尾的长度小于身长; 8、裸大鼠(nuderat) 因免疫力低下易患呼吸道疾病。
豚鼠:全年多发情,性周期平均16天,妊娠期65-70天,产仔3-4只,肝脏缺乏葡萄糖内脂氧化酶,不能合成维生素C,易发生维生素C缺乏症;
常用实验动物对致敏物质的反应程度顺序为:豚鼠>家兔 >狗 >小鼠 >猫 >蛙
豚鼠对维生素C缺乏十分敏感,研究实验性坏血病的动物模型。也可用于叶酸、硫胺素和精氨酸的生理功能,酮性酸中毒,眼神经疾病的研究。
豚鼠听神经对声波特别是700~2000Hz(狗是3000-12000,)的纯音最敏感
地 鼠:常用金黄地鼠和中国地鼠,牙齿十分坚硬,可咬断细铁丝,有很强的贮食习性,兴奋时发出强烈的金属性音响。口腔两侧有一对发达的颊囊, 可储存食物,是免疫抑制区; 性成熟早, 雌鼠比雄鼠强壮, 动情周期为5天, 妊娠为16(14~17)天,为啮齿类动物中妊娠期最短者,哺乳期21天,离乳后雄鼠2月龄,雌鼠1.5月龄可配种。有嗜睡习惯,有时误认为死亡。中国地鼠(黑线仓鼠)胰岛退化,β细胞呈退行性变,易培育成糖尿病品系. 兔 Rabbit 草食性动物,单胃,饲料中需要一定量的粗纤维,有啮齿行为
食粪癖,喜直接从肛门口吃粪。夜间排出的软粪含丰富的粗蛋白,粗纤维和B族维生素 眼球大,虹膜内色素细胞决定眼睛的颜色,生殖生理 -- 性成熟早,一般5-6月,属刺激性排卵(兔 ) ,交配后10-12小时排卵,无明显的动情周期,妊娠期平均为32天.
犬 鼻油状滋润,有凉爽感,称为鼻镜.骨骼系统:共319块,锁骨退化,游离; 齿式:3142/3143 = 42, 犬齿和前臼齿发达,撕咬力强,咀嚼力差;鼻 --- 嗅觉发达,灵敏度高于人类1000倍; 猫 齿式:3131/3131=30,爪尖锐,能缩回脚趾肉垫中;血管壁坚韧,血压稳定; 呕吐反射灵敏;
小型猪 :具皮下脂肪层, 皮肤组织结构与人很相似;齿式: 3143/3143 = 44, 门齿和犬齿发达; 母源抗体不能通过胎盘屏障;
猕猴: 群居性强, 由直线型社会组成;体内不能合成维生素C,故易发生维生素C缺乏症 鸡:红细胞有核;
●《重庆市实验动物管理办法》 2006年7月1日起施行。 ●动物福利:“善待活着的动物、减少动物死亡的痛苦”
●动物实验的设计方案要提交专门的伦理委员会进行审定评估。
动物的房舍、饲料、垫料、运输方式必须符合有关规定,应舒适安全,重视动物的社会性和行为需求。必须确保动物在麻醉、镇痛和镇静的前提下进行实验,最大限度地减轻动物的痛苦。必须用人道的方法处死动物,确保其死亡后方可焚烧处理。 ●动物源性人兽共患病 : 如狂犬病、流行性出血热、布氏杆菌。 人源性人兽共患病 :如人型结核病、阿米巴痢疾、志贺氏杆菌。
互源性人兽共患病:如葡萄球菌病、真菌性皮肤病、大肠杆菌。 ●一般实验选择成年动物。常用实验动物中小鼠的基础代谢率最高,单位体积所需的给药量是人类的10倍以上。选择动物时,一般雌雄动物各半。
●易化原则:选择那些结构功能简单而又反映研究指标特质的模型, 如低等动物线虫、果蝇、斑马鱼、蟾蜍。
第一章 绪论
一、3R 原则:Replacement 替代:尽可能用低等实验动物或非实验动物替代实验动物;Reduction 减少:提高实验的精确度,不盲目增大动物数量或重复实验以获得满意的统计结论; Refinement 优化: 优化实验设计和操作,减轻动物痛苦。 二、实验动物和实验用动物
1.实验动物 Laboratory Animals:经人工培育和人工改造,对其携带微生物、遗传及营养、环境因子实行控制,来源清楚,遗传背景明确,用于科学研究、教学、生产、检验以及其它科学实验的动物。⑴ 遗传背景明确,来源清楚; ⑵ 对其携带微生物、寄生虫进行人工控制;⑶ 用于科学实验。 2.实验用动物 Experimental Animals:指一切用于科学实验的动物,包括野生动物、经济动物、观赏动物和实验动物。⑴ 野生动物 Wild animals ⑵ 经济动物 Economical animals ⑶ 观赏动物 Exhibiting animals
三、实验动物学:以实验动物本身为对象,专门研究它的生物学特性、遗传育种、饲养繁殖、质量控制、疾病防治和开发应用的科学。涉及遗传育种学 、微生物学、寄生虫学、环境生态学、动物营养学 、实验动物医学. 第二章:品种
2. 品种与品系:品种 (stock) 与品系 (strain) 是实验动物分类的基本单元,指同一种动物中具有不同遗传特性的动物群体。品种与品系应具备的条件:
⑴ 相似的外貌特征⑵ 独特的生物学特性⑶ 稳定的遗传性能⑷ 具有共同的遗传来源和遗传结构.
二、近交系动物定义:经连续20代以上的全同胞兄妹或亲子交配培育而成、品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先的动物群。
●近交系数 Inbeeding coefficiency:群体中某个体通过遗传,携带两个同源等位基因(即源于同一祖先的基因)的概率。大、小鼠为98.6%;豚鼠、 家兔由于繁殖周期长,培育一个品系需10 - 15 年, 近交系数达到 80% 即可。近交衰退 inbred inflation:近交过程中,由于动物群体基因不断地分离与纯合而发生一系列不利于个体或群体发育的现象。 ●近交衰退表现:有害隐性基因的纯合导致一些遗传缺陷或某种疾病的发生率上升;个体发育不如杂合子,对环境的适应能力差,产仔数下降,母性不良,在饲养上存在一定的难度。 三、封闭群动物 Closed colony1.定义:以非近亲交配方式进行繁殖生产的实验动物种群,在不从外部引入新个体的条件下,至少连续繁殖4代以上。封闭群内个体差异的大小取决于其祖先的来源,若祖先来源于一般杂种动物,则个体差异大,若来源于同一品系的近交系动物,则差异小。
3.维持和生产为保持封闭群动物的基因异质性及多态性,动物种群数量要足够大,一般不少于25对,并选择非近亲交配方式,如循环交配法、随机交配法等。
四、突变系动物 Mutant strain 1. 定义:动物受内外因素影响引起染色体畸变或基因突变而育成某些特殊性状表型的品系。 2. 突变的方式 ⑴ 染色体畸变:如染色体的缺失、易位、倒位;⑵ 基因突变:碱基替换和移码突变。3. 突变的种类⑴ 自发性突变 spontaneous mutation ⑵ 诱发性突变 induced mutation
五、系统杂交动物
1. 定义:两个近交系动物之间有计划地进行交配所繁殖的第一代动物,称系统杂交动物,简称 F1 代动物。2. 特点:⑴ 具有杂交优势,适应性和抗病能力强,繁殖旺盛,可 克服近交衰退现象; ⑵ 具有与近交系动物基本相似的遗传均质性,所做的实 验结果重复性好;⑶ 具有亲代双亲的特点;⑷ 国际分布广,便于国际交流。
六、实验动物遗传学监测方法1.遗传学监测的意义:实验动物在培育、维持和生产 等过程中存在基因突变、遗传漂变、遗传污染等风险,从而引起动物遗传性状改变。 2.监测方法的要求:4E 原则,即准确(exact)、简便(easy)、有效(efficient)、经济(economy); 3. 监测方法:⑴ 形态学方法:下颌骨测定法、毛色基因测试法、染色体带纹分析法; 第三章:环境
内环境又分小环境和大环境。小环境:指实验动物生活的饲养盒内、对实验动物直接产生影响的理化因素,如温度、湿度、气流速度、光照周期、噪声等;大环境:指放置实验动物笼架、器具等辅助设施的饲养间和实验室的各种理化因素。
1.Russel 理论: 要获得稳定的、可重复的演出型,须对动物自身(遗传、年龄、性别等)和环境(理化、营养、微生物等)进行控制。 2.反应公式: R = (A + B + C)﹡ D ± E R 实验动物的总反应;
A 实验动物种的共同反应;
B 实验动物品种、品系的特有反应; C 实验动物的个体反应; D 环境因素;
E 实验误差。
1. 温度:不同实验动物的温度要求范围不同,一般啮齿类动物的温度范围为20-26℃,日温差≤4℃。
2. 相对湿度:湿度指大气中的水分含量,每立方米空气中的实际含水量(克)称为绝对湿度。特定温度下,空气中的实际含水量与该温度下的饱和含水量的百分比值,称为相对湿度。 动物实验室和饲养室的相对湿度应控制在 40-70%,50±5% 为最佳相对湿度。 3. 气流速度:指饲养室内的空气流动速度,主要来源于通风换气设备。合理的气流速度有利于动物体表的蒸发散热,使空气的温度、湿度、及化学物质均匀一致,将污浊气体排出室外。一般动物饲养室的气流速度为0.1- 0.2 m/s,换气次数为10-20 次/小时。 4. 氨浓度控制标准为20 ppm (14 mg/m3) 以下。 5.空气洁净度
⑵ 空气过滤:初效过滤:直径大于 5 um 的微粒.中效过滤:直径大于1.0 um的微粒 高效过滤:直径大于0.5 um 的微粒 ⑶ 空气洁净度
10000 级: ≥0.5 um 的颗粒物 350 个/升, 落下菌落数为2.45 个/皿 100 级: 落下菌落数为0.49 个/皿 6./噪音 :国家标准:动物饲养室的噪音≤60 dB
6.光照 可见光 (350-750 nm电磁波) :亮度、波长、光照时间或明暗交替时间 四、实验动物设施 1.开放系统:通常单走廊
2.屏障系统:通常单走廊或双走廊,空气洁净度达到10000 级,用于饲养 SPF动物或实验
3.隔离器:空气洁净度100级,用于饲养无菌动物、 SPF动物或进行动物实验,不直接接触动物。
4.层流架:本身带有空气净化和通风系统,分正压和负压层流架,适合于小规模和短时间的实验动物饲养和试验。 5.隔离罩:为无菌动物饲养繁殖、实验操作和处理后观察的唯一设备。空气洁净度达到 100
级,可保障动物1-3年内处于无菌状态,一般采用正压,压差达150 Pa。
6. 运输笼:国际上通用的运输笼具有控温控湿和空气过滤系统,内部基本达SPF 级标准。 7.垫料:吸收水分,保持笼内干燥;吸附动物排泄物,维持动物和笼内的清洁卫生;材质柔软,有保温作用。1) 中国:未标准化,混合木屑,成分和毒性不确定2)国际:白杨木、玉米芯、高吸收纸筋
六、感染性实验室:使用病原体对动物进行实验感染的设施。P1: 进行普通微生物实验的动物实验室,对工作人员的进出要求不严。P2: 禁止非工作人员进入实验区, 可能发生气溶胶扩散的实验在二级生物安全柜中进行。P3 : 禁止非工作人员进入设施内, 由双重密闭门隔离, 外部空气通过高效过滤器送入室内,向外排出的空气也须高效过滤器处理。P4: 独立的建筑物内采用隔离区和外部隔断的构造,隔离区内保持负压,在三级生物安全柜内进行 实验,非本区人员禁止入内。
第五章 营养控制一、实验动物营养学:1.营养成分:蛋白质、糖类、脂类、无机盐和维生素等。2. 研究方向:
(1)标准化饲养:畜禽营养以生长速度、饲料利用率和经济效益为主要目标;
(2)比较营养研究:人与动物、动物之间。我国至今尚未对实验动物的营养和饲料问题进 行全面系统的研究,许多基础数据缺乏。 三、饲料的分类: 1.日粮:一只(头)动物24小时所摄入的饲料量。2.按原料的精度划分 ⑴ 天然饲料:经过加工的谷物、麦类、骨粉等;⑵ 加工饲料:蔗糖、奶粉、鱼肝油等;⑶ 化学物质:氨基酸、无机盐、维生素等。
2.按物理性状划分⑴ 粉料:将各种原料的干粉按比例混合,加热处理;⑵ 颗粒料:混合干粉加水经过蒸气加压制成颗粒状;⑶ 凝胶料:将琼脂或其他凝胶剂加入粉料配制而成; ⑷ 膨化饲料:将粉料拌水压入模管,高温高压下制成;⑸ 液体饲料:供特殊实验,如无菌动物或剖腹产幼仔。
3.饲料的消毒
⑴ 干热灭菌:饲料在 80-100℃条件下烘烤2-3小时,营养成份破坏多,饲料易褐变; ⑵ 高压蒸气灭菌:120℃ 15-20分钟;
⑶ 药物熏蒸:化学药品的汽雾剂对饲料进行消毒; ⑷ 射线照射灭菌:冷灭菌,60Co 辐射,是理想的灭 菌方法。
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