试验综述 荧光定量ＰＣＲ方法检测ＩＢＶ病毒 在ＣＥＫ细胞中的动态变化 张中图分类号 Ｓ８５２ ６５９ 颖，刘澜澜，王占锋，尹文献标识码 Ａ 鑫，魏文章编号 萍 １６７２－９６９２（２０１Ｏ）０７－００６４－０５ （东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨 １ ５００３０） ：…’。…’‘…’’’…’… … ’… ’…‘。…‘。…。。…’‘… ’… ’… ’…‘’… ‘… 。… 。… 。…‘‘…‘’… ’…‘’… 。…’‘… 。… 。…’‘…’’… ’…‘‘…‘。… 。…‘。…’‘… ‘…‘ …。。…。‘…‘‘…。； ！ ［摘要］为揭示鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）在鸡胚肾细胞（ＣＥＫ）中复制增殖的动态变化？ ； 规律，通过实时荧光定量ＰＣＲ（ＦＱ－ＰＣＲ）检测ＩＢＶ病毒感染ＣＥＫ ３、６、１２、２４、３６、４８、７２ ｈ： ？ 后病毒增殖量的动态变化。结果显示，随着时间增加，ＩＢＶ病毒增殖出现规律性变化，３～１２ ｈ时÷ ： ＩＢＶ增殖不明显，３６ ｈ时ＩＢＶ开始大量复制，４８ ｈ时达到高峰，但７２ ｈ后有所下降。试验表： ÷ 明ＩＢＶ在细胞内复制增殖的最佳时间在接毒后４８ ｈ，其复制增殖情况与细胞状态负相关。 ÷ ［关键词］荧光定量ＰＣＲ；ＩＢＶ病毒；动态变化 ！ 鸡传染性支气管炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，ＩＢ） 之处。近年来，迅速发展的荧光定量ＰＣＲ方法以 是由鸡传染性支气管炎病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ 其快速、灵敏、特异等优点广泛应用到分子生物 ｖｉｒｕｓ，ＩＢＶ）引起的鸡的一种急性、高度接触性疾 学试验中［５－７］，Ｃａｌｌｉｓｏｎ Ｓ Ａ、崔沛和刘乔然等先后 病。该病可引起肾脏和生殖系统病变，导致雏鸡 将其应用到ＩＢＶ的定量检测中【８＿“］。本研究旨在建 死亡，鸡产蛋量下降，给世界养禽业造成巨大的 立一种基于ＩＢＶ Ｎ基因的ＳＹＢＲ ｇｒｅｅｎ Ｉ荧光定量 经济损失［１１。ＩＢＶ是冠状病毒科，冠状病毒属的成 方法，检测ＩＢＶ病毒在鸡胚肾细胞（ＣＥＫ）中复制 员之一，病毒多呈圆形，基因组为单股正链 增殖情况及其动态变化规律。 ＲＮＡ。ＩＢＶ病毒粒子带有囊膜和纤突，有４种结 １材料和方法 构蛋白，即纤突蛋白Ｓ、核衣壳蛋白Ｎ、膜糖蛋 １．１ 试验材料１７日龄鸡胚购于东北农业大学 白Ｍ和小膜蛋白Ｅ。其中，Ｓ蛋白是主要的结构 校孵化场；ＩＢＶ Ｍ４１株病毒尿囊液由本实验室保 蛋白，也是ＩＢＶ病毒变异的主要部位。Ｎ蛋白负 存；Ｍ１９９细胞培养基购于ＧＩＢＩＣＯ公司；ＲＮＡ 责编码病毒内部的蛋白质，主要功能是包裹核 提取试剂盒ＲＮＡ ｆａｓｔ２００，购自上海飞捷生物公 酸，利于病毒装配入核衣壳内。Ｎ基因相对保 司；Ｍ＿ＭＬＶ鼠源反转录酶、Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）Ｉ８、ｄＮＴＰ、 守，因此可以利用Ｎ基因检测病毒在细胞中的复 ＲＮａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、ＤＥＰＣ、ｐＭＤ一１８Ｔ ｓｉｍｐｌｅ载体、 制变化情况ｆ 。 Ｔａｑ酶和ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ荧光定量ＰＣＲ试剂盒等 目前常规检测ＩＢＶ的方法主要有病毒分离、 购于大连宝生物公司；胶回收试剂盒和质粒小量 血清学试验、病毒干扰试验和分子生物学试验 提取试剂盒购于中科瑞泰生物公司；胎牛血清购 等，但其在敏感性、特异性和时效性上各有不足 于ＮＱＢＢ公司。参照Ｇｅｎｂａｎｋ公布的ＩＢＶ Ｎ基因 序列，应用Ｏｌｉｇｏ ６．０设计一对引物，命名为Ｉｂｖ— ［收稿日期］２０１０—０３—０２ ． ｎｌ和Ｉｂｖ—ｎ２送到上海生工生物公司合成，引物 女口下： ＩＢＶ—ｎｌ： ５ 一ＣＣＴＧＡＴＧＧＴＡＡＴ ＩＴＣ— ＣＣＴＴＧＧ一３ ， ＩＢＶ—ｎ２： ５ 一ＣＣＴＩｒｒＧＴＡＡＴＧＣＧＡ— ［基金项目］黑龙江省教育厅科学技术研究项目（２００３ｆｚ０１２３； 东北农业大学创新团队课题（ｃｘｔＯ０６—４一１） ［通讯作者］魏萍，男，教授，博士生导师，从事动物传染病方面的 教学与科研。 ＧＡＡＣＣＣＴ一３ ，理论扩增２０５ ｂｐ。 ２０１０ ０７ 畜牧兽医 试验综遮 标准质粒稀释为６个浓度（１．８ｘｌＯ８～１．８￣１０３）， 不同病毒扩增的溶解曲线表明见图６，仅 通过荧光定量ＰＣＲ得到其扩增曲线、标准曲线 ＩＢＶ病毒能扩增出特异性峰值，新城疫病毒和传 和溶解曲线，见图３～５。荧光定量ＰＣＲ扩增产物 染性法氏囊病毒检测结果均为阴性。 经８ ｇ／ｍｌ琼脂糖凝胶电泳鉴定，与预期结果相 ２．２ ＩＢＶ病毒感染鸡胚肾细胞制作的鸡胚肾细 符，大小为２０５ ｂｐ。 胞状态良好，培养３６ ｈ后换液，４２ ｈ时接入 ＩＢＶ病毒，细胞在接毒后２４ ｈ开始出现病变，４８ ｈ 时病变明显，７２ ｈ后细胞大量脱落。 ２．３荧光定量ＰＣＲ检测ＩＢＶ病毒在ＣＥＫ细胞中的动 态变化荧光定量结果显示，病毒感染后３ ｈ， 病毒的拷贝数为６．１７￣１０－ｃｏｐｉｅｓ／ｌ￣ｌ，６ ｈ后病毒 的拷贝数为６．８９ｘ１０ ｃｏｐｉｅｓ／￣ｌ，１４ ｈ后病毒的拷 １ ３ ５ ７ ｅ”１３ １５ １７ １９钉Ｃｖｃｔｅ 由ｅｒ ２３ ２５ ２７ ２９ ３３ ３，５ ３７骑 贝数为７．４４ｘ１０ ｃｏｐｉｅｓ／ｌｚｌ，三者差异不明显，２４ ｈ 图３标准质粒扩增曲线 注：１：１．８×１０。２：１．８×１０ ３：１．８×１０６ ４：１．８×１０ ５：１．８×１０ ６：１．８×１Ｏ。 后病毒的拷贝数为１．２４ｘ１０ ｃｏｐｉｅｓ／ｔｘｌ，３８ ｈ后病 毒的拷贝数为１．１ｘｌＯ ｃｏｐｉｅｓ／ｌｘｌ，４８ ｈ后病毒的 拷贝数为１＿１７ｘｌＯ ｃｏｐｉｅｓ／ｌｘｌ，７２ ｈ病毒的拷贝数 为１．２８ｘ１０ ｃｏｐｉｅｓ／Ｉｘｌ。其扩增曲线和溶解曲线见 图７～８。 』 Ｒ唑 ． 聋蒡；芝譬笺 一善～ ～ ／ ．。≯ ／ ；， ｝ １ ３ ５ ７ ９’ｌ｛３ １５ １７，９ ２１ ２３笛２７ ２９ ３１ ３３ ３５ ３７ ３９ 图７病毒感染不同时间后扩增曲线 图４标准质粒构建的标准曲线 注：１：３ｈ ２：６ｈ ３：１２ｈ ４：２４ｈ ５：３６ｈ ６：４８ｈ ７： ７２ｈ ｇ∞盘畦监 越 ｛ 气 扣 上 溉 口 忍 一 ５０ 髓 ７口 ：７５ 雠 ８ ∞ 话 图５标准质粒溶解曲线 图８病毒感染不同时间后熔解 ３讨论 工ＢＶ ｝ 十 鸡传染性支气管炎（ＩＢ）具有传播迅速、季节 性不明显、病毒变异频繁等特点，由于其血清型 ｌ ７ ｌＥｍ， 众多，所以本试验挑选大多数血清型都比较保守 的Ｎ蛋白基因作为模版【Ｉ３ｊ，设计一对ＰＣＲ引物， 采用ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ法建立一种检测ＩＢＶ病毒的 Ｔ￣ｎｍｔ，ｒｅ酶 图６荧光定量ＰＣＲ特异性检测结果 荧光定量ＰＣＲ方法。ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ染料法具有 操作简单、成本较低的特点，在定量试验中得到 ２Ｄ ７０．Ｄ７ 畜牧兽医 试验综述 广泛应用。但其与Ｔａｑｍａｎ探针法相比缺点是特 溶解曲线来降低其非特异性扩增引起的误差㈣。 本试验建立的ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ荧光定量ＰＣＲ 方法快速可靠，与病毒分离鉴定、血清学试验和 ７５－７８． ３】Ｒｏｓｅｒ Ｄ，Ｊｏａｎ Ｐ，Ｇｅｒｍａｎ Ｏ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｐｉｄｅｍｉ～ 异性相对稍低，但可通过设计特异性引物和分析 ［ｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｖｉａｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｎ Ｓｐａｉｎ ｏｖｅｒ ａ ｆｏｕｒｔｅｅｎ－ｙｅａｒ ｐｅｒｉｏｄ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏ— ｇＹ，２００８：１－－１０． ４】Ｙｏｎｇ Ｗ Ｔ，Ｓｈｏｕ Ｇ Ｆ，Ｈｕｉ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ 普通ＲＴ—ＰＣＲ方法等传统的ＩＢＶ检测方法相比， ［其敏感性高可以检测到初始模版中６．１７ｘｌ０ ｃｏｐｉｅｓ／／Ｍ的病毒核酸，特异性好，操作简便迅 速。应用此方法检测ＩＢＶ病毒感染鸡胚肾细胞不 同时间后病毒复制的动态变化，根据样品的扩增 曲线显示，病毒在感染后３—１２ ｈ增殖不明显， 相对稳定；感染后２４ ｈ，病毒开始大量复制；感 染３６ ｈ后，病毒增殖明显，而４８ ｈ后则达到病 ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ＲＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ Ｎ——ｔｅｒｍｉｎａｌ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｒｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｄｅ－ ｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｉｎ ｃｕｌ—— ｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ［Ｊ１．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６，３４（１７）： ４８１６－４８２５． ［５】马莉，岳华，黄兴，等．荧光定量ＰＣＲ技术及其在动 物病毒病定量检测中的应用［Ｊ１．西南民族大学学报 （自然科学版），２００５，６９～７２． 毒增殖的高峰阶段，其荧光扩增曲线从１３个循 【６】Ｌｉｖｉａ Ｄ Ｔ，Ｂａｒｂａｒａ Ｂ，Ｉｓａｂｅｌｌａ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ 环时就能检测到模板的扩增，说明此时病毒含量 ｏｎｅ－ｓｔｅｐ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｖｉａｎ ｉｎ－ 最高；而７２ ｈ后病毒数量有所下降，只能从１５ 个循环开始后才能检测到模板的扩增。同时，细胞 状态与病毒数量呈负相关性，病毒感染后３～１２ ｈ， 变明显，７２ ｈ时细胞大量脱落。由以上结果可 知，ＩＢＶ病毒在感染细胞后不同时间内病毒活性 ｌｆｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓｅｓ ｕｓｉｎｇ ａ ＭＧＢ ｐｒｏｂｅ ａｎｄ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ［Ｊ］．ＢＭＣ Ｉｆｅｃｔｎｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，２００６，６： ８７ ７］肖国生，曹三杰，文心田．荧光定量ＰＣＲ技术及其在 细胞状态良好，２４ ｈ后细胞出现病变，４８ ｈ时病 ［动物传染病定量检测中的应用［Ｊ］．动物医学进展， ２００５，２６（２）：１３—１７． ８】Ｃａｌｌｉｓｏｎ Ｓ Ａ，Ｈｉｌｔ Ｄ Ａ，Ｂｏｙｎｔｏｎ Ｔ Ｏ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐ－ 和复制能力存在一定差异，４８ ｈ时病毒状态最 ［佳，活性和复制能力最强。刘乔然等利用ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ荧光定量ＰＣＲ方法在宏观上揭示了ＩＢＶ ｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ Ｔａｑｍａ—ｎ ＲＴ— ＰＣＲ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ 病毒在鸡体内的动态分布规 ｎ］，本试验在微观上 研究了ＩＢＶ病毒在细胞内复制增殖的动态变化情 况，揭示了病毒在细胞上复制增殖的动态规律， 掌握病毒在细胞上复制增殖的动态规律，可以针 对病毒复制的不同时期进行药物试验，筛选有效 的抗病毒药物；根据ＩＢＶ增殖的动态规律，还可 以确定病毒增殖的最佳时问，获得质量较好的病 ｖｉｒｕｓ ｆｒｏｍ ｉｆｅｃｔｎｅｄ ｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００６，７（１８）：１－６． 【９］Ｃａｌｌｉｓｏｎ Ｓ Ａ，Ｈｉｌｔ Ｄ Ａ，Ｊａｃｋｗｏｏｄ Ｍ Ｗ．Ｒａｐｉｄ ｄｉｆｆｅｒ－ ｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｖｉａｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｂｙ ｓａｍｐｌｅ ｔｏ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｒａｔｉｏ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ～ ｔｉｍｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ－ｐｏｌｙｍｅｒ—＿ａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ Ⅲ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００５，１２４：１８３— １９０． 毒，为后续试验提供质量优良的病毒。本试验建 ［１０】崔沛．鸡传染性支气管炎病毒实时荧光ＰＣＲ检测 立一种快速准确检测ＩＢＶ病毒的荧光定量方法， 方法的建立【Ｄ】．河南：河南农业大学，２００７． 并在其基础上，研究ＩＢＶ病毒在细胞水平上复制 【１ １】刘乔然，刘胜旺．鸡传染性支气管炎病毒Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ 增殖的动态变化，揭示了ＩＢＶ在细胞内复制增殖 ＰＣＲ方法的建立及其对感染鸡体内病毒的检Ｎ［ＪＩ． 的动态规律，对临床上快速准确诊断ＩＢＶ有一定 的指导意义，并为ＩＢＶ的深入研究提供了基础。 ［参考文献］ ［１１陈溥言．］兽医传染病学【Ｍ】．北京：中国农业出版社， ２００６：３５ １－３５５． 中国预防兽医学报，２００８，３０（８）：６３７～６４１． ［１ ２］缪从容，吴贤福．几种鸡胚原代细胞的制作方法ｌＪ】． 中国兽药杂志，１９９７，３１（１）：１４—１６． ［１ ３】Ｋｅｌｌｙ—Ａｎｎｅ Ｓｐｅｎｃｅｒ ａ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｄｅｅ ｂ，Ｐａｕｌ Ｂｒｉｔｔｏｎ ｂ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｃｌｕｓｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏ－ ｇ）ｒ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｎｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｎｕ— 【２】谢景伟，陈峰，谢青梅，等．鸡传染性支气管炎病毒分 子流行病学研究进展ｆＪ］．动物医学进展，２００８，２９（８）： ｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ『Ｊ１．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００８，３７０（２００８）： ２０ ７０．０７ ●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．● ．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．● ３７３—３８１． 时荧光定量ＰＣＲ检测方法的建立和初步应用【Ｊ］．经 济动物学报，２００９，１３（１）：３９—４２． 【１４］王荣，孔繁德，陈琼，等．猪瘟病毒ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ实 ●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●”“●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…ｔ●…・●…ｔ●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・● Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｄｙｎａｍｉｃ Ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ＩＢＶ ｉｎ Ｃｈｉｃｋ Ｅｍｂｒｙｏ Ｋｉｄｎｅｙ Ｃｅｌｌ ｂｙ ＦＱ－ＰＣ Ｒ Ｚｈａｎｇ Ｙｉ ｎｇ，ＬｉＵ ＬａｎＩａｎ，Ｗａｎｇ Ｚｈａｎｆｅｎｇ，Ｙｉ ｎ Ｘｉｎ，Ｗｅｉ Ｐｉ ｎｇ （ＣｏＩ Ｉｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ＭｅｄｉＣｉ Ｒｅ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ ＡｇｒｉＣＭＩｔｕｒａＩ Ｕｎｉ ｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉ ｎ Ｈｅｉ Ｉｏｎｇｊ ｉ ａｎｇ １５００３￣ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｔｏ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｄｙｎａｍｉｃ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ＩＢＶ ｉｎ ｃｈｉｃｋ ｅｍｂｒｙｏ ｋｉｄｎｅｙ ｃｅｌｌ，ｄｅｔｅｃｔｅｄ ＩＢＶ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ＣＥＫ ｃｅｌ１Ｓ ｂｙ ＦＯ—ＰｅＲ ａｆｔｅｒ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌＳ ３，６，１２，２４，３６，４８ ａｎｄ ７２ ｈ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＢＶ ｄｉｓｐｌａｙ ｒｅｇｕｌａｒｉｔｙ ｃｈａｎｇｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｔｉｍｅ． Ａｔ ３￣１２ｈ，ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｓ ｎｏｔ ｏｂｖｉｏｕｓ：ａｔ ３６ ｈ，ＩＢＶ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｒａｐｉｄｌｙ；４８ ｈ ｒｅａｃｈ ｔｈｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｅ ｐｅａｋ ｔｉｍｅ ｂｕｔ ａｆｔｅｒ ７２ ｈ ｔｈｅ ｖｉｒａｌ ＲＮＡ ｌｏａｄ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｓｌｉｇｈｔｌｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｒｅｆｌｅｃｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｔｉｍｅ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ＣＥＫ ｃｅｌ１Ｓ ｉＳ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ４８ ｈ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｉＳ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅ］ａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｃｅｌｌＳ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ＦＯ—ＰＣＲ；ＩＢＶ；ｄｙｎａｍｉｃ ｃｈａｎｇｅ ｉ…．●…．●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…－●…・●…一●…・●…・●…ｔ●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…ｔ●…・●…・●…・●…・●…・●…－●…・●…・●…・●…－●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●…・●・ ．． ：：ｊ：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：；：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：： ．． ‘ ０瑟０ ：： ．． 母猪难产的治疗 ；； ．． ｉｉ 母猪难产要立即进行助产，助产人员应 阵缩，缓缓地将胎儿拉出。 ｉｉ ｉｉ 剪短指甲，手和手臂应先用ｏ．１％高锰酸钾液 对胎位异常而引起难产的母猪，助产人 ｊｉ 或者２％来苏儿液洗净，再用酒精消毒，然 员可将手伸入产道，推入胎儿后肢或前肢， 埒 ．． 后在手和手臂上涂上油类润滑剂。猪外阴部 取出胎儿；如果母猪产道干燥，可向产道注 ：： ．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●；．●－＿：● ．●；．●；．●；．●；．●；．● ．●；．● ．●； ●；．●；．●；。● ．． 周围也可用以上浓度的来苏儿液或高锰酸钾 射清洁的润滑剂；如果无法矫正胎位，又不 ．． ．． 液消毒。助产器械也要煮沸消毒。根据母猪 能或不宜进行剖腹产，可将胎儿的某些部位 ；； 彗 难产的不同情况，对症施治。 截断取出。 婪 釜 对老龄体弱的母猪，可注射脑垂体后叶 在助产过程中，要尽量防止损伤产道和 婪 釜 素ｌ０～３０ Ｉｕ，促进子宫收缩，使仔猪产出。如 感染，助产后应当给母猪注射抗菌药物，以 珏 ；； ３０ ｍｉｎ左右胎儿仍未产出，助产人员可将手 防感染。母猪不食或有脱水症状，应在耳静 ｉｉ 强 伸入产道，按摩子宫颈，随着母猪阵缩，将 脉注射５％葡萄糖盐水５００～ｌ ０００ ｍｌ，维生素 强 强 胎儿慢慢拉出。 ｃ ０．５ ｇ，加强对母猪的产后护理工作。（辽 ｉｊ ｉｉ 对母猪羊水排出过早、产道狭窄干燥、 宁省盘锦市双台子区动物防疫检疫站 丁利 ．． ．． 胎儿过大等引起的难产，可向产道注射油类 ；； ．主主： 润滑剂，助产人员将手伸入产道，随着母猪 强 釜 ：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：二， ：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：