[12]发明专利申请公开说明书
[21]申请号200410069591.4
[51]Int.CI7
A61K 31/704A61K 9/00A61P 9/12
[43]公开日2005年3月9日[22]申请日2004.07.22[21]申请号200410069591.4
[30]优先权
[32]2003.07.23 [33]CN [31]03132944.6[71]申请人山东绿叶天然药物研究开发有限公
司
地址264003山东省烟台市莱山区宝源路9号[72]发明人田京伟 傅风华 蒋王林 王超云
[11]公开号CN 1589803A
权利要求书 1 页 说明书 5 页
[54]发明名称
20(S)－人参皂苷－Rg3在制备治疗或预防高血压的药物中的应用[57]摘要
本发明提供了20(S)－人参皂苷－Rg3在制备治疗或预防高血压的药物中的应用，本发明还提供了含有20(S)－人参皂苷－Rg3的药物组合物，该药物组合物可以通过口服、舌下、经皮、经肌肉、皮下或静脉途径给出药。
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权 利 要 求 书
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1.20(S)-人参皂苷Rg3在制备治疗或预防高血压病的药物中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于20(S)-人参皂苷Rg3的使用剂量范围为20mg～400mg。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于20(S)-人参皂苷Rg3的使用剂量优选为60mg～200mg。
4.含有20(S)-人参皂苷Rg3的用于治疗或预防高血压的药物组合物。 5.根据权利要求4所述的药物组合物，该组合物可以通过口服、舌下、经皮、经肌肉或静脉途径给药。
6.根据权利要求4或5所述的药物组合物，其特征在于组合物可以以片剂、丸剂、颗粒剂、
胶囊、悬浮液、溶液、糖浆、注射剂、霜剂、软膏、喷雾剂、口嚼剂或贴剂等形式存在。
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说 明 书
20(S)-人参皂苷-Rg3在制备治疗或预防高血压的药物中的应用
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技术领域
本发明涉及20(S)-人参皂苷Rg3在制备治疗或预防高血压的药物中的应用。 背景技术
随着人口老龄化进程的加速以及生活方式的改变，心脑血管病已成为一个全球性的健康问题，冠心病、卒中的死亡率在世界范围分别居第1、3位，高血压一直被认为是卒中的主要危险因素。新型有效的防治高血压病药物的开发已刻不容缓。
20(S)-人参皂苷Rg3是从人参中分离提取的四环三萜类人参二醇型皂苷单体。
20(S)-人参皂苷Rg3结构式(R：-glu-o-glu；R1：-OH；R2：-CH3) 据报道，Rg3具有抗肿瘤、抑制新生血管生成、抗炎等作用，但关于20(S)-人参皂苷Rg3具有预防或治疗高血压病的作用未见报道；鉴于此，本发明人通过大量的实验研究，惊奇地发现20(S)-人参皂苷Rg3具有预防或治疗高血压病的医药用途。 发明内容
本发明提供了20(S)-人参皂苷Rg3在制备治疗或预防高血压病的药物中的应用。 本发明提供了含有20(S)-人参皂苷Rg
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的治疗高血压病的药物组合物。
20(S)-人参皂苷Rg3在用于治疗或预防高血压时其使用剂量范围为20mg～400mg，优选剂量范围为60mg～200mg。
本发明中使用的20(S)-人参皂苷Rg3可以单独使用或以药物组合物形式使用。药物组合物包含活性成分20(S)-人参皂苷Rg3及药用载体。该药物组合物可以通过口服、舌下、经皮、经肌肉、皮下、皮肤粘膜或静脉途径给药。药物组合物可以以片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、
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悬浮液、溶液、糖浆、注射剂的形式存在。本发明所提供的各种药物剂型均可以以药学常规方法制备而成。
本发明人通过下列试验证实了20(S)-人参皂苷Rg3具有治疗或预防高血压病的作用。试验所用的20(S)-人参皂苷Rg3由山东省天然药物工程技术研究中心药物化学研究室提供，按文献【汤明辉，姜志宏，赵中振，等.HPLC法分离与检测20(S)-人参皂苷Rg3和20(R)-人参皂苷Rg3.中草药.2003，35(3)：208～282.】所述方法检测。 具体实施方式
制备例1：20(S)-人参皂苷Rg3的制备
以三七总皂苷(或人参皂苷)为原料，加入50％的醋酸水溶液，70℃水浴加热6小时，冷却，加入5％碳酸钠溶液，溶液经正丁醇萃取，萃取物蒸干后，上硅胶柱，以氯仿-甲醇为洗脱剂，进行梯度洗脱，得到20(S)-人参皂苷Rg3，经反复硅胶柱层析，得到20(S)-人参皂苷Rg3。
制备例2：制备注射剂
称取0.50g 20(S)-人参皂苷Rg3，加入50g PEG-400，使皂苷溶解；配制50g pH5.5的磷酸盐缓冲液，称取0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中；将缓冲液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均匀，加入0.01％针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤、0.22um的微孔滤膜过滤，过滤后的药液分装成2ml/支的针剂50支，分装好的注射剂可以直接压塞、压铝盖成针剂。 制备例3：冻干粉针的制备
称取0.50g 20(S)-人参皂苷Rg3，加入50g PEG-400，使皂苷溶解。配制50g pH5.5的磷酸盐缓冲液，称取0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中；将缓冲液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均匀，加入0.01％针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤、0.22um的微孔滤膜过滤；过滤后的药液分装成2ml/支的西林瓶中，经冻干机冻干制成冻干粉针。
试验例1：20(S)-人参皂苷Rg3对实验性高血压大鼠血压的影响 (1)材料：20(S)-人参皂苷Rg3注射剂：按制备例2制备。
实验动物：普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号：鲁动质字200106005号。
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(2)方法与结果：
将大鼠随机分为假手术组(等容量溶剂)，模型对照组(等容量溶剂)，20(S)-人参皂苷Rg3小剂量组(2mg/kg)，20(S)-人参皂苷Rg3中剂量组(4mg/kg)，20(S)-人参皂苷Rg3大剂量组(40mg/kg)，每组10只。禁食12小时后，ip乌拉坦(1.2g/kg)麻醉，气管插管，腹位置于恒温手术台，在左背肾区切口腹膜外避开肾神经分离肾动脉，用套橡皮管的小动脉夹，完全阻断左肾动脉血流，暂时封闭切口，保持呼吸道通畅，直肠体温控在37.5℃，静置4h，改仰卧位固定。于颈动脉插管(PE50)，经压力换能器记录动脉血压于Powerlab(8sp)。在阻断肾血流4h后开始记录对照基础血压曲线，稳定后放开肾动脉夹，可见动脉血压逐渐上升，约3～6min趋于稳定(如MAP达不到14.5KPa则弃之)。术后各组动物静脉输注(用输液泵注射)相应药物(给药体积3ml，30min输完)。记录给药前及给药后1，5，10，15，30min时的收缩压、舒张压及心率变化。
结果如表1、表2所示，不同剂量的20(S)-人参皂苷Rg3明显降低实验性高血压大鼠的收缩压、舒张压，但对心率变化无影响。
表1 20(S)-人参皂苷Rg3对实验性高血压大鼠收缩压的影响( X±s，n＝10) 收缩压(mmHg) 分组
1min 5min 10min 15min 30min 正常对照组 125±16 129±18 126±15 124±15 126±18 模型对照组 193±21
##
196±23
##
195±25
##
194±21
##
196±24
##
大剂量组 186±20 165±18* 135±18** 129±20** 128±19** 中剂量组 191±18 176±20* 155±24** 138±25** 131±29** 小剂量组 189±16 178±18* 160±15** 158±15** 149±18** 与模型对照组比较P＜0.05，
*
**
P＜0.01；与正常对照组比较P＜0.05，
###
P＜0.01
表2 20(S)-人参皂苷Rg3对实验性高血压大鼠舒张压的影响( X±s，n＝10) 舒张压(mmHg) 分组
1min 5min 10min 15min 30min 正常对照组 85±11 89±12 86±13 84±12 86±11 模型对照组 132±22
##
136±21
##
135±23
##
134±22
##
136±21
##
大剂量组 116±20* 105±18* 95±18** 89±20** 80±19** 中剂量组 121±18 116±20* 105±24** 91±25** 82±29** 小剂量组 129±16 118±18* 108±15** 100±15** 97±18** 与模型对照组比较P＜0.05，
*
**
P＜0.01；与正常对照组比较P＜0.05，
5
###
P＜0.01
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试验例2：20(S)-人参皂苷Rg3的舒张血管作用
(1)材料：20(S)-人参皂苷Rg3注射剂：按制备例2制备。
去氧肾上腺素(PE)注射液，上海禾丰制药有限公司生产；除特殊说明外，上述药物均于实验开始前用K-H液配制成梯度稀释液备用。
实验动物：成年实验用家兔，性别不拘，体重250kg～300kg，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。
(2)方法：按【李安龙，叶益新.羟苯氨酮的舒张血管作用及其机理研究.药学学报，2002，37(1)：10～3】所述的方法，将家兔击打头部、颈动脉放血处死，取肾动脉，置入富氧的K-H溶液中。除去血管外脂肪和粘膜后，以螺旋状连续剪成5mm×20mm的血管条，一端固定于含K-H液的5ml浴槽底部，另一端固定于量程为5g的张力换能器上，整个血管条自始至终浸泡于K-H液中，连续充以95％O2与5％CO2混合气，浴槽与恒温水浴连接，以(37.0±0.5)℃循环水温育。换能器接Powerlab生理记录仪，加1.5g前负荷，平衡60～90min，每隔15min换液1次。血管张力稳定后，加入不同浓度20(S)-人参皂苷Rg3，观察20(S)-人参皂苷Rg3对正常血管条张力变化的影响；加血管收缩剂去氧肾上腺素(PE)后加20(S)-人参皂苷Rg3，观察20(S)-人参皂苷Rg3对PE所致血管条收缩的影响。 (3)结果：
A、20(S)-人参皂苷Rg3对正常血管条张力变化的影响
结果如表3所示，不同终浓度的20(S)-人参皂苷Rg3可降低血管条收缩幅度，舒张血管，与空白对照组、溶剂对照组均有显著性差异。
表3 20(S)-人参皂苷Rg3对正常血管条张力变化的影响( X±s，n＝6) 浓度C 收缩幅度(g) (mg/100ml) 溶剂 20(S)-人参皂苷Rg3 空白对照组 1.6±0.5 1.7±0.6 0.5 1.6±0.3 1.5±0.5 1 1.5±0.5 1.2±0.3 2 1.4±0.5 1.0±0.4 4 1.2±0.5 0.7±0.3 8 1.2±0.3 0.3±0.2 与空白对照组比较P＜0.05，
*
**
***#**#**##
#
##
P＜0.01；与溶剂对照组比较P＜0.05，
6
P＜0.01
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B、20(S)-人参皂苷Rg3拮抗PE的缩血管作用
结果如表4所示，PE促进血管条收缩，不同终浓度的20(S)-人参皂苷Rg3可以拮抗PE的缩血管作用，舒张血管，与PE对照组比较有显著性差异。
表4 20(S)-人参皂苷Rg3拮抗PE的缩血管作用( X±s，n＝6) 浓度C 收缩幅度(g) (mg/100ml) 溶剂 20(S)-人参皂苷Rg3 空白对照组 1.6±0.5 1.7±0.6 PE对照组 3.5±1.8 0.5 3.6±1.8 1 3.5±1.5 2 3.4±1.5 4 3.2±1.2 8 3.0±0.9 与PE对照组比较*
P＜0.05，**
P＜0.01
3.6±1.7 2.8±1.2 2.4±1.5* 1.6±0.8** 1.2±0.9** 0.7±0.6**
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