中国医药指南２０１０年２月第８卷第６期Ｇｕｉｄｅ ｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２０１０，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．６ 实验研究Ｉ ４５ ２．４干扰试验 ３讨论 ２．４．１血红蛋白干扰试验 目前如何准确可靠地测定血清胆红素是大家一致关注的问题， 由于胆红素极易氧化，导致标准品制备困难，即使各厂家试剂配 取１份新鲜混合血清（ＤＢＩＬ为２６，６ ｍｏｌ／Ｌ）分别加入不同浓度的 血红蛋白，用本法测定ＤＢＩＬ。结果血红蛋白＜３．２ｇ／Ｌ时，对测定结果 无显著干扰，但当血红蛋白浓度≥５ｇ／Ｌ时，测定值出现负数，表明血 方相同，但由于校准液的问题，测定结果之间差异也较大。如果 统一使用由Ｄｏｕｍａｓ等” 提出的采用二牛磺酸胆红素作为ＤＢＩＬ 测定的校准物，各种方法测定结果会得到很大改善，这与文献报 道相一致 】。本研究使用的测定试剂，经实验证明其稳定性好、 抗干扰能力强，准确度和精密度良好，测定线性满足临床要求， 值得推广应用。 红蛋白浓度￣＞５ｇ／Ｌ时，严重干扰ＤＢＩＬ的测定。 ２．４．２脂血干扰试验 取１份新鲜混合血清（ＤＢＩＬ为２６．６ ｕ ｍｏｌ／Ｌ）分别加入不同浓度的 脂肪乳，用本法测定ＤＢＩＬ。结果三酰甘油＜８ｍｍｏｌ／Ｌ时对测定结果无 显著干扰。 ２－４．３抗坏血酸干扰试验 取ｌ份新鲜混合血清（ＤＢＩＬ为６．６ ｕ ｍｏｌ／Ｌ）分ＩＩＩＩ入不同浓度的 抗坏血酸，用本法测定ＤＢＩＬ。结果抗坏血酸＜１．５ｇ／Ｌ时对测定结果无 显著干扰。 ２．５方法学比较 参考文献 【ｌ】叶应妩，王毓三，申子瑜，全国临床检验操作规程（Ｍ】．３版＿南京：东 南大学出版社，２００６：４５２． ［２】杨昌国，许叶，张抗．线性评价和干扰试验中ＮＣＣＬＳ评价方案的应 用【Ｊ】．临床检验杂志，１９９９，ｌ７（３）：１８４． ［３】韩志钧．临床化学常用项目自动分析法［Ｍ】．沈阳：辽宁科学技术 出版社，２００５：１ ０６６． ［４］Ｄｏｕｍａｓ ＢＴ，Ｐｅｒｒｙ ＢＷ，Ｓａｓｓｅ ＥＡ，ｅｔ ａ１．Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｉｌｌｉｒｕｂｉｎ ａｓｓａｙｓ；Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｂｉｌｉｍｂｉｎ 选择含量在５－３５０“ｍｏｌ／Ｌ的临床标本８Ｏ份测定ＤＢＩＬ，按ＮＣ—ＣＬＳ （ＥＰ９一Ｐ）的评价方案作方法学比较，结果见表２。 表２两种方法测定ＤＢＩＬ的相关性比较 ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，１９７３，１９（９）：９８４—９９３． ［５】Ｙｏｕｎｇ ＤＳ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐｒｅａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅｓ ｏｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｓｔｓ［Ｍ］．３ｒｄ ｅｄ．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ：ＡＡＣＣ Ｐｒｅｓｓ，２００７：１７５． 复方甘草酸苷片的质量标准研究 陈传莹 单 亮 李 强 【摘要】目的研究复方甘草酸苷片的质量控制方法。方法采用Ｋｒｏｍａｓｉｌ １００Ａ Ｃｌ８柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ ＩＤ，５ ｍ），以２％的醋酸． 乙腈（６５：３５）为流动相；检测波长为２５４ｎｍ；流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ。结果甘草酸单铵在７６．８－７９６．２ ｇ／ｍＬ范围内有良好的线性关 系（ｒ＝０．９９９９），平均加样回收率为９８．７４％，ＲＳＤ为０．９％，同时测定甘氨酸和蛋氨酸的含量。结论该方法专属性强，定量方法简便、 准确，可用于复方甘草酸苷片的质量控制。 【关键词】高效液相色谱法；复方甘草酸苷片；质量标准 中图分类号：Ｒ９２７．１１ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１－８１９４（２０１０）０６—００４５—０３ 复方甘草酸苷片（商品名：美能）是由甘草酸单铵盐、甘氨酸、 ＤＬ一蛋氨酸组成的复方制剂，于１９４８年在日本上市，现主要用于治疗 慢性肝病，改善肝功能异常…，疗效确切，临床应用多年。从传统中 药材甘草中可提取得到甘草酸，再经成盐可制备得甘草酸单铵盐，长 １－３对照品 甘草酸单铵（批号：２００４０８１１，由甘草酸单铵原料精制而成，含 量为９９．０５％，有关物质为０．５７％）。 １ ４复方甘草酸苷片上市样品 期以来被广泛应用于医药、食品和化妆品等领域，对其临床以及其他 用途的安全性检验已获得ＦＤＡ的认可 ］，国家标准中规定甘草酸单 复方甘草酸昔片（规格：甘草酸单铵２５ｍｇ、甘氨酸２５ｍｇ、蛋氨酸 ２５ｍｇｉ进口药品注册证号：Ｈ２００３０１８４；生产批号：２００４０１８ｆ生产单位： 铵盐的含量为７３．０％。为保证本制剂批间质量的一致性和安全性，进 行质量标准考察实验。 日本美能发源制药公司（Ｍｉｎｏｐｈａｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）。 ２含量测定 ２．１甘草酸苷 ２．１．１色谱条件 １仪器与试药 １．１仪器 岛津（泵ＬＣ一１０ＡＴ；检测器ＳＰＤ．ＩＯＡ）ＨＰＬＣ，浙大Ｎ．２０００色谱工 色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ １００Ａ Ｃｌ８柱，规格２５０ｍｍ×４．６ｍｍ（Ｄｉｋｍａ公司 生产）；以２％的醋酸一乙腈＝６５：３５为流动相；检测波长为２５４ｎｍ；流 速：１．ＯｍＬ／ｍｉｎ；进样量２０ Ｌ【］’ 。 １江西天施康中药股份有限公司（３５５０００） ２安徽新华学院药学院安徽合肥（２５００８８） 作站；色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ １００Ａ Ｃｌ８柱，规格２５０ｍｍ×４．６ｍｍ（Ｄｉｋｍａ公 司生产）；ＺＲＳ一８Ｇ智能溶出试验议（天津大学无线电厂）。 １．２供试样品 复方甘草酸苷片（规格：甘草酸单铵２５ｍｇ，甘氨酸２５ｍｇ、蛋氨 酸２５ｍｇ；批号：２００４１２１５、２００４１２１９、２００４１２２３）。 ４６ ｌ实验研究 中国医药指南２０１０年２月第８卷第６期Ｇｕｉｄｅ ｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１０，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．６ ∞Ｏ 。 童 。 ＿１Ｏ０ ∞ ：： ¨ ㈠ ¨¨’ “ ：ｏ： 。 。。：… ¨ ¨¨¨”。 。 图ｌ对照品色谱图（Ａ）、样品（Ｂ）和空白处方（ｃ）；ｌ－甘草酸单铵 ２．１．２测定方法 取本品２Ｏ片，研细，精密称取适量（约相当于甘草酸苷２５ｍｇ）， 置５０ｍＬ量瓶中，加水溶解后并稀释至刻度，摇匀，放置３０ｍｉｎ后，滤过， 取续滤液作为供试品溶液；另取经１０５￣Ｃ干燥至恒重的甘草酸单铵对照 品（以甘草酸苷计）适量，精密称定，同法制成每ｌｍＬ中约含５００ｕｇ 的溶液作为对照品溶液，精密量取上述两种溶液各２Ｏ ｕ Ｌ，注入液相色 谱仪，记录色谱图及峰面积，按外标法以峰面积计算即得，色谱图见图１。 ２．１－３标准曲线 取甘草酸单铵对照品以甘草酸苷计适量，用水制成每ｌｍＬ中各 含８０、１６０、３２０、４８０、８００１．１ｇ的溶液，分别量取２Ｏ Ｌ，注入液相 色谱仪，记录色谱图，以进样浓度（Ｃ）为横坐标，甘草酸单铵峰峰 面积（ｓ）为纵坐标，计算直线回归方程，绘制标准曲线 结果表明， 在７６．８￣７９６－２“ｅｇｍＬ范围内，线性关系符合要求。 ２．１．４溶液稳定性试验 照含量测定项下方法配制供试品溶液，于室温下自然放置，分别 于０、２、４、８、１２ｈ进样，测定甘草酸昔峰面积，计算日内溶液的稳 定性。ＲＳＤ为０．９％，供试品溶液在１２ｈ内基本稳定。 ２．１．５重现性试验 取同一批号样品，分别称取适量（约相当于甘草酸苷２５ｍｇ）５ 份，精密称定，置５０ｍＬ量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤 过，续滤液作为供试品溶液，照含量测定项下的方法测定。ＲＳＤ为 ２．３０％，本法的重现性符合要求。 ２．１．６加样回收率 按处方量的８０％、１００％、ｌ２０％称取甘草酸单铵（以甘草酸苷 计）对照品各两份，精密称定，分置１００ｍＬ量瓶中，并同时称取处方 量的空白辅料分置量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取 续滤液作为供试品。另精密称取甘草酸单铵对照品（以甘草酸苷计） 适量，同法溶解并稀释成每ｌｍＬ中约含５００“ｇ的溶液作为对照品溶 液。照含量测定方法测定，按外标法以峰面积计算回收率【５】。结果平 均回收率为９８．７４％，ＲＳＤ为０．９％，符合要求。 ２．１．７三批样品及上市样品含量测定 取本品及上市样品各２０片，除去包衣后，精密称定，研细，精 密称取适量（约相当于甘草酸苷２５ｒａｇ），置１００ｍＬ量瓶中，加水适 量，振摇使溶解，并加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供 试品溶液；另取经１０５℃干燥至恒重的甘草酸单铵对照品（以甘草酸 苷计）适量，精密称定，同法制成每ｌｍＬＯ约含５００“ｇ的溶液作为对 照品溶液，分别量取供试品溶液与对照品溶液各２０ Ｌ注入液相色谱 仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得 Ｊ。本品３批复方甘草 酸苷片及市售复方甘草酸苷片的含量测定，结果见表１。 表１含量测定结果 参照以上结果，将复方甘草酸苷片的含量限度订为”本品含甘草 酸苷（Ｃ４２Ｈ６ Ｏ， ）应为标示量的９０．０％－１ １０．０％”。 ２．２蛋氨酸 ２．２．１测定法 取本品２０片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于蛋氨 酸２５ｍｇ），置２５０ｍＬ碘瓶中，加水２５ｍＬ使溶解，再加碘化钾４ｇ，磷 酸盐缓冲液（磷酸氢二钾６１ｇ，磷酸二氢钾２０．４ｇ，加水溶解并稀释 至５００ｍＬ，ｐＨ＝７．０）５ｍＬ，精密加入碘滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）５ｍＬ，密 塞，摇匀，在暗处放置３０ｒａｉｎ，用硫代硫酸钠滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）滴 定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定液 的结果用空白试验校正。每ｌｍＬ的硫代硫酸钠滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）相 当于７．４６１ｍｇ的Ｃ５Ｈ。 ＮＯ２Ｓ。 ２．２．２重现性试验 精密称取本品适量（约相当于蛋氨酸２５ｍｇ）６份，分别置１００ｍＬ量 瓶中，照含量测定方法测定含量。ＲＳＤ为０．５０％，重现性符合要求。 ２．２．３回收率 取蛋氨酸约２０、２５、３０ｍｇ各两份，精密称定，同时称取处方量除 蛋氨酸外其他成分，分置１００ｍＬ量瓶中，照含量测定方法测定，计算 回收率。平均回收率为９９．７８％，ＲＳＤ为０．７５％，回收率符合要求。 ２ｌ２．４三批样品及上市样品的含量测定 取样品及上市样品，照含量测定方法测定含量，结果见表２。 表２含量测定结果 参照以上结果，将本品的蛋氨酸含量限度订为：“含蛋氨酸 （Ｃ Ｈ。。ＮＯ２Ｓ）应为标示量的９０．０％－１１０．０％。” ２ｌ３甘氨酸 ２＿３．１测定方法 精密称取本品适量（约相当于甘氨酸２５ｍｇ），置１００ｍＬ量瓶中， 加入ｌｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液５ｍＬ，放置１５ｍｉｎ，加水至刻度，摇匀，滤过， 精密量取１０ｍＬ，加甲基红指示液Ｉ滴，用氢氧化钠滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ） 滴定至黄色，再加中性甲醛溶液（对酚酞指示液显中性）１０ｍＬ，振 摇，放置ｌＯ分钟，用氢氧化钠滴定液（Ｏ．１ｍｏｌ／Ｌ）滴定，近终点，加 酚酞指示液ｌｍＬ，继续滴定至溶液呈橘红色，并将滴定液的结果用空 白试验校正。每ｌｍＬ的氢氧化钠滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）相当于７．５０７ｍｇ 的Ｃ２Ｈ５ＮＯ２。 ２－３．２重现性试验 精密称取本品适量（约相当于甘氨酸２５ｒａｇ）６份，分别置ｌ０ＯｍＬ量 瓶中，照含量测定方法测定含量，ＲＳＤ为０．３９％，重现性符合要求。 ２．３．３回收率 取甘氨酸约２Ｏ、２５、３０ｍｇ各两份，精密称定，同时称取处方量除 甘氨酸外其他成分分置１００ｍＬ量瓶中，照含量测定方法测定，计算回 收率为９９．６４％，ＲＳＤ为０．２９，符合要求。 ２．３．４三批样品的含量测定 中国医药指南２０１０年２月第８卷第６期ｃｉｎｅ，ＦｅｂｒｕａＧｕｉｄｅ ｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｒｙ２０ｌ（Ｉ Ｄ’ｌｌ８，—Ｎｏ—．６ 临床研究Ｉ ４７ 取样品及市售复方甘草酸苷片，照含量测定方法测定含量，结果 见表３。 表３含量测定结果 Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｋｕｓｈｅｎｉｎ Ｐｌｕｓ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ［１］ Ｈｅ ＧＸ．Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｔｙｐｅ Ｂ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］． Ｊ Ｃｈｉｎ Ｍａｔｅｒ Ｍｅｄ，２００８，３３（４）：４４３—４４４． Ｑｕ ｚＹ，Ｘｉａｎｇ ＺＢ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒ－ ｒｈｉｚｉｎ［Ｊ］．Ｌｉｓｈ￣ｈｅｎ Ｍｅｄ Ｍａｔｅｒ Ｍｅｄ Ｒｅｓ，２００７，１８（１０）：２５６８． 参照以上结果，将本品的甘氨酸含量限度订为：“含甘氨酸 （Ｃ Ｈ ＮＯ２）应为标示量的９０．０％ ｌ １０．０％。 ３讨论 ａｎＬ，ＧａｏＸＬ。Ｓｔｕｄｙ ｏｎｔｈｅ ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ［３】 Ｔｉｔａｂｌｅｔｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ ＪＭＡＰ，２００９，２６（６）：４７１—４７４． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｇｌｙｅｙｒｒｈｉｚｉｎａｔｅ ｉｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ［４］ Ｆｕ ＹＨ．本试验提供了一个可行的测定及评价复方甘草酸苷片质量标准的 方法，建立了在同一系统使用性条件下对复方甘草酸苷片中３种主成 ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ＨＰＬＣ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｔｒａｄｉｔ Ｐａｔｅｎｔ Ｍｅｄ，２００６， ２８（６）：９１３－９１４． 分进行含量测定，操作简便、准确、重复性好，各组分分离完全，可 有效控制复方甘草酸苷片的质量。三组分含量测定结果表明：实验药 品的处方合理，工艺稳定，含量符合《中国药典》２００５版的要求。 ［５］Ｌｉ ＹＦ，Ｌｉ ＺＨ，Ｚｈｕ ＺＨ．ＨＰＬＣ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ Ｃｈｅｎｘｉａｎｇｌｕｂａｉｌｕ ｔａｂｌｅｔｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ａｎａｌ，２００８，２８（２）：３０４—３０５． ［６］Ｃｈｅｎ ＣＹ，Ｓｈａｎ Ｌ，Ｌｉ Ｑ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｔａｂｌｅｔｓ ｂｙ ＨＰＬＣ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ ＪＭＡＰ，２００９，２６（７）：５９８—６０１． 参考文献 临床研究 ｘ射线对食管裂孑Ｌ疝的诊断价值 杜庆山 蔡亮 【摘要】目的探讨ｘ射线检查对食管裂孔疝的诊断价值。方法回顾性分析２０例患者的ｘ射线征象，并根据临床综合判断，及时确诊病情。 结果食管裂孔疝２０例中，可恢复性食管裂孔疝３例、不可恢复性食管裂孔疝１７例。结论ｘ射线对食管裂孔疝的诊断具有其他影像检查 无法取代的全面性和准确性。 【关键词】食管裂孔疝；ｘ射线检查 中图分类号：Ｒ８１６．５ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１－８１９４（２０１０）０６—００４７—０２ 食管裂孔疝是贲门管连同部分胃疝人胸腔的一种疾病，临床表现多 样化，易于误诊或漏诊…。为提高对食管裂孔疝ｘ线征象的认识，探讨 ｘ射线检查对其的诊断价值，现分析报道如下。 １资料和方法 １．１一般资料 ２００６年至２００９年在大连医科大学附属鞍山市铁西医院放射线科接 受ｘ线检查的食管裂孔疝患者１０例，男８例，女２例；年龄４０－５５岁；临 床表现为胸骨后不适、局部烧灼感、嗳气返酸、吞咽障碍等。 １．２检查方法 胃黏膜皱襞相连。 ３讨论 ３．１病因与病理机制 食管裂孔疝的原因可以是先天性，也可以是后天所致，目前认 为，食管裂孔疝的发生主要于下述因素有关 】： ３．１．１食管穿过膈肌处为膈肌的薄弱环节 随着年龄的增长，食管裂孔周围因软组织萎缩，弹性下降，食管 孔环扩大导致食管孔扩大，胃膈韧带松弛，胃和贲门就有可能由此进 入胸腔而形成食管裂孔疝。 ３．１．２食管胃结构异常失食管裂孔疝最主要原因 长期的食管炎、食管溃疡及瘢痕收缩把胃牵拉进入胸腔形成疝。 ３．１＿３胸腹腔压力差增大似食管裂孔疝形成的原因之一 征象明显者一般各种体位不加任何辅助方法即可发现确诊。对一 般患者采取俯卧左后斜位，让患者大口吞服钡剂，仔细观察钡剂通过 食管下端到胃底的情况，观察是否有钡剂反流及疝囊出现；然后进行 多轴位观察，如发现疝囊后需再立卧位反复观察疝囊是否可还纳；同 如腹部暴力打击、严重腹水，肥胖或慢性便秘等。 时观察是否有发流性食管炎、食管溃疡及其他病变。 ２结果 ３－２食管裂孔疝分为三型 ①滑动疝：最多见，是指齿状线上移≥２ｃｍ；②食管旁疝：少 见，齿状线无上移但胃底疝人胸腔者；③混合型：上述二者的结 ２．１食管裂孔疝２Ｏ例中，可恢复性食管裂孔疝３例、不可恢复性食管裂 孔疝１７例。 ２．２食管裂孔疝的ｘ射线直接征象 膈上疝囊征：ｘ射线表现为大小不一的圆形或漏斗形囊状扩大， 双侧囊壁上常有对称性切迹或凹陷。食管胃环征：当胃食管前庭段上 升时，Ｘ射线表现为上皮交界环位于膈上，管腔舒张时表现为管腔边 合。由于胃底疝人膈食管裂孔，胃食管反流出现食管炎、食管源性 胸痛、心脏反射症状，因此食管裂孔疝易出现导致误诊的临床急症 表现，主要为：①急性上腹剧痛：需与心肌梗死、主动脉夹层动脉 瘤等鉴别。②与肺脓肿鉴别 ］。 ３＿３注意问题 大连医科大学附属鞍山市铁西医院放射线科（１ １４０１ １） 缘的膈上切迹。另外，疝囊内出现胃黏膜皱襞，ｘ线表现为疝囊内粗 而迂曲或呈颗粒状的胃黏膜皱襞影，并经增宽的食管裂孔直接与膈下