JournalofNorthwestA&FUniversity(Nat.Sci.Ed.)
Vol.39No.5May2011
复方中药的健脾及减肥降脂作用研究
傅晨,欧阳五庆,尚朋朋,王璟
(西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100)
*
[摘要]目的研究自制复方中药对肥胖模型小鼠的减肥、降脂和健脾作用。方法构建小鼠肥胖模型,成功后将其分为模型对照组(灌胃蒸馏水0.2mL/(只d))、阳性对照组(灌胃6.5mg/mL西布曲名溶液0.2mL/(只d))和药物组(灌胃复方中药浸膏0.3mL/(只d)),同时设立普通对照组(处理方法同模型对照组),20d后检测分析其李氏指数、体质量增长率、脂肪系数和血脂水平等指标的变化情况,记录各组小鼠抗疲劳试验的游泳时间及其活力表现,并取肝脏组织提取总RNA,用RTPCR方法检测脂肪酸合酶(FAS)基因的表达量。结果药物组李氏指数、体质量增长率、脂肪系数及血清甘油三酯、总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平与模型对照组相比均显著降低(P<0.05),游泳时间明显长于3个对照组(P<0.05),脂肪酸合酶基因mRNA表达量高于模型对照组而低于普通对照组。结论供试复方中药具有显著的减肥降脂和健脾作用。
[关键词]复方中药;健脾;减肥;降血脂;脂肪酸合酶[中图分类号]R151.1
[文献标识码]A
[文章编号]16719387(2011)05002106
StudyonfunctionsofthecompoundtraditionalChinesemedicinein
invigoratingspleenandinlosingweightandfat
FUChen,OUYANGWuqing,SHANGPengpeng,WANGJing
(CollegeofVeterinaryMedicine,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China)
Abstract:ObjectiveTheresearchwasconductedtostudythefunctionsofahomemadecompoundtraditionalChinesemedicineinreducingweightandfatandcliniceffectininvigoratingspleenofobesitymice.MethodConstructedobesitymodelmiceweredividedintomodelcontrolgroup(perfusedwithdistilledwater,0.2mL/(mouseday)),positivecontrolgroup(perfusedwith6.5mg/mLsibutraminesolution,0.2mL/(mouseday))anddrugtherapygroup(perfusedwiththecompoundtraditionalChinesemedicineextract,0.3mL/(mouseday)).Meanwhile,anormalcontrolgroup(treatmentwasthesameasthatofthemodelcontrolgroup)wasestablished.20dayslater,obesityindicators,suchasLeeindex,growthrateofbodyweight,fatindex,bloodlipidlevelandetc,werecalculated;swimmingtimewasrecordedinfatiguetests,anddynamicperformancewasobserved.Meanwhile,totalRNAwasisolatedfromliverandFASgeneexpressionlevelwasmeasuredbyRTPCR.ResultTheindicatorsofdrugtherapygroup,suchasLeeindex,growthrateofbodyweight,fatindex,bloodlipidlevelandetc,weresignificantlylowerthanthoseofmodeledgroup(P<0.05);Meanwhile,theswimmingtimeofdrugtherapygroupwaslongerthanthatofthethreecontrolgroups(P<0.05).However,FASgeneexpressionlevelofdrugtherapygroupwasbetweenmodeledgroupandcontrolgroup.ConclusionThecompoundtraditionalChinesemedicinepossessescertaineffectinbothreducingweightandfatandinvigoratingspleen.
*
[收稿日期][基金项目][作者简介][通信作者]
20101012
陕西省重大科技创新专项(K332020916)
傅晨(1986-),女,陕西杨凌人,在读硕士,主要从事消化与生理学研究。Email:fudayday@163.com欧阳五庆(1960-),男,陕西凤翔人,教授,博士生导师,主要从事生理学和细胞生物学研究。Email:oywq506@sina.com22西北农林科技大学学报(自然科学版)第39卷
Keywords:compoundtraditionalChinesemedicine;invigoratingspleen;weightloss;fatreducing;FAS中医是我国的传统医学,其基础理论可概括为整体观念,辨证论治,即认为人体是一个有机的整体,通过辨清外显的证而实现从根本上治疗疾病。历代医家认为,肥胖病与气虚、痰、湿、淤有关。引起肥胖的原因有外感(湿邪)、食伤(过食肥甘)和正虚(脾虚)等因素。主要是脾胃受损、脾不散精,或脾肾不足,水道不利,变生膏脂痰湿,郁积体内而成肥胖[1]。因此,脾肾功能失调是肥胖病的病理基础。本研究通过高脂饮食构建小鼠营养失衡的肥胖模型,选用可益气健脾且安全无毒副作用的中药材组成复方,研究该复方中药的减肥、降脂及健脾作用,现将结果报道如下。
(组)和药物组(组)。、组小鼠以蒸馏水灌胃,用量0.2mL/(只d);组小鼠以6.5mg/mL
西布曲名溶液灌胃,0.2mL/(只d);组小鼠以复方中药浸膏灌胃,0.3mL/(只d)。灌胃期间,组给予基础饲料,、、组给予等量的高脂饲料(饲料给予量以多数动物吃完为原则)。试验期间小鼠自由饮水,饲养环境温度为室温。试验共进行20d,第21天进行小鼠抗疲劳试验,结束后摘眼球采血并处死小鼠,取各组小鼠体脂及、、组肝脏备用。
1.3复方中药的药效试验
1.3.1减肥作用给药前,测量各组小鼠体质量(始质量)和体长,计算李氏指数以反映小鼠的肥胖程度;给药期间,每天观察小鼠的活动情况、体毛色泽、饮食、饮水及粪便形状等;20d后,测量各组小鼠体质量(终质量)和体长,计算李氏指数和体质量增长率。试验结束后处死小鼠,剖腹取体脂(肠系膜及肾周脂肪垫)并称质量,计算脂肪系数。
李氏指数=[体质量(g)1000]1/3/体长(cm);
体质量增长率=(终质量-始质量)/始质量;脂肪系数=体脂质量/终质量。
1.3.2健脾作用小鼠抗疲劳试验:给药20d后,小鼠禁食16h,、组灌以蒸馏水,、组灌以相应药物,30min后,将小鼠放入水桶中(直径30cm,深40cm,水深20cm,水温28)。当小鼠在水中游泳至过度疲劳不动、鼻孔刚刚淹没于水下时判作溺死,然后捞出。将小鼠入水至溺死所经历的时间作为抗疲劳试验指标。
1.3.3降脂作用小鼠给药20d后,摘眼球采血。血液放入离心管静置2h后,2000r/min离心10min,取上清液得血清,按照生化试剂盒的操作说明书测定血清中TG、TCH和HDLC的浓度。1.4复方中药对小鼠肝脏FAS基因mRNA表达
的影响
1.4.1总RNA的提取采用Trizol试剂盒提取小鼠肝脏组织总RNA,用10g/L琼脂糖凝胶检测RNA的完整性。
1.4.2引物的设计与合成根据GenBank公布的小鼠FAS和actin基因序列,采用Premier5.0软件设计各基因的PCR引物。引物由北京华大基因公司合成,其具体序列、退火温度、循环数及扩增片段长度见表1。1材料与方法
1.1材料
试验动物:35日龄昆明种雌性小鼠50只,购自第四军医大学。
试剂:甘油三酯(TG,酶终点法)、总胆固醇
(TCH,酶终点法)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC,PTAMg2+沉淀法)的测定试剂盒,均购自温州东瓯津玛生物科技有限公司;西布曲名,购自陕西森弗生物技术有限公司;DMSO购自Sigma公司;RNA提取试剂盒TRIZOL和DL2000DNAMarker购自天根生化公司;反转录试剂盒RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit和Taq酶购自Fermentas;MIX购自WOLSEN。其余试剂均为分析纯。
供试药物:3g/mL的复方药物浸膏(荷叶15%、海藻10%、黄芪20%、白术20%、茯苓20%、山楂15%)。
基础饲料:面粉380g/kg,玉米粉200g/kg,麸皮160g/kg,豆粕150g/kg,鱼粉40g/kg,骨粉30g/kg,酵母、食盐、鱼肝油和微量元素添加剂各10g/kg。高脂饲料:在普通日粮的基础上添加200g/kg猪油即得高脂饲料。
1.2试验方法
将50只小鼠随机分成2组,第1组15只,饲喂基础饲料,第2组35只,饲喂高脂饲料,连续饲养2周。2周后若高脂饲料喂养小鼠的体质量超过基础饲料组小鼠的20%,则可作为肥胖模型试验小鼠[3]。从第1组中随机选取10只小鼠,作为普通对照组(组);将第2组中造模成功的30只小鼠随机分成3组,分别为模型对照组(组)、阳性对照组[2]
第5期傅晨,等:复方中药的健脾及减肥降脂作用研究
表1PCR引物的参数Table1PCRparameterofprimers
基因GeneFASactin
序列(53)
Primersequence
F:GGTCTATGCCACGATTCR:GTCCCATGTTGGATTTGF:ACTGCCGCATCCTCTTCCTCR:CTCCTGCTTGCTGATCCACATC
退火温度/
Tm
51.253.8
循环数Cycle3030
23
扩增片段长度/bp
Lengthofamplifiedfragments
246399
1.4.3RTPCR反应体系为:5U/LTaKaRaTaq0.25L,2.5mmol/LdNTPMixture2L,10PCRBuffer2.5L,100ng/LcDNA1L,20mol/LprimerF0.5L,20mol/LprimerR0.5L,加灭菌水至25L。反应条件:95预变性5min;退火30s(温度依引物而定),72延伸30s,30个循环;7210min,4冷却。取PCR产物,进行10g/L琼脂糖凝胶电泳检测。1.5数据统计分析
用Excel2009软件对所测数据进行处理,试验数据以平均值标准差(XSD)表示。数据分析用SPSS13.0统计软件进行,采用t检验,组间比较采用独立样本检验显著性。
2结果与分析
2.1复方中药对小鼠的减肥作用
复方中药对小鼠体质量、李氏指数及体质量增长率的影响见表2。由表2可知,给药后各组小鼠的体质量都有所增加,其中模型对照组增加最为显著(P<0.01);药物组小鼠的体质量虽高于普通对照组而低于模型对照组(P<0.01),且与阳性对照组相差不大(P>0.05),但其体质量增长率却最低,且与3个对照组相比差异显著(P>0.05)。说明在同等饲养条件下,供试复方中药能够降低小鼠体质量的增加。
表2复方中药对小鼠体质量、李氏指数及体质量增长率的影响
Table2EffectsofcompoundtraditionalChinesemedicineonbodyweight,Leeindexandgrowthrateofmouse
组别
Group
普通对照组(组)
Normalcontrol(group)模型对照组(组)
Modelcontrol(group)阳性对照组(组)
Positivecontrol(group)药物组(组)
Drugtherapy(group)
给药前Beforetreatment
体质量/(g只)Initialweight20.232.5726.563.0525.502.4526.321.88
-1
给药后Aftertreatment
体质量/(g只-1)Finalweight25.751.8934.953.7932.862.77*32.562.53*
李氏指数Leeindex3.3180.1713.2350.1363.2190.0853.2050.093
李氏指数Leeindex3.3830.0903.4590.0763.3900.055#3.3550.083#
体质量增长率/%Growthrate27.292.2131.593.2928.862.53▼#23.711.78▼*
▽
注:与普通对照组相比,表示差异极显著(P<0.01),▼表示差异显著(P<0.05);与模型对照组相比,*表示差异极显著(P<0.01),#
表示差异显著(P<0.05);表示差异不显著(P>0.05);与阳性对照组相比,表示差异极显著(P<0.01),▽表示差异显著(P<0.05),表示差异不显著(P>0.05)。下表同。
Note:Inthesamecolumn,comparedwithnormalcontrol,isindicativeofextremelysignificantdifference(P<0.01),▼issignificant
difference(P<0.05);comparedwithModelcontrol,*isindicativeofextremelysignificantdifference(P<0.01),#issignificantdifference(P<0.05),isinsignificantdifference(P>0.05);comparedwithpositivecontrol,isindicativeofextremelysignificantdifference(P<0.01),▽issignificantdifference(P<0.05),isinsignificantdifference(P>0.05).Thesameasbellow.
由表2还可知,给药前后,普通对照组小鼠的李氏指数增长并不明显,而~组小鼠的李氏指数相对于普通对照组均极显著增加(P<0.01),其中模型对照组的李氏指数又显著高于、组(P<0.05),表明肥胖小鼠模型构建成功;药物组小鼠李氏指数与阳性对照组之间差异不显著(P>0.05),说明供试复方中药能够显著降低小鼠的李氏指数,且降低程度与西布曲名差异不大。
由表3可知,、、组小鼠体脂质量显著高于普通对照组(P<0.05),其中模型对照组体脂质量显著高于其他组(P<0.05);药物组体脂质量显著低于模型对照组和阳性对照组(P<0.05)。各组小鼠腹部体脂沉积情况见图1。
由表3还可知,~组小鼠的脂肪系数均显著高于普通对照组(P<0.05);模型对照组脂肪系数最高,且与阳性对照组之间差异不显著(P>0.05);而药物组脂肪系数显著低于模型对照组和阳性对照组(P<0.05)。说明复方中药能够明显减少小鼠体内的脂肪沉积,从而降低脂肪系数。
24西北农林科技大学学报(自然科学版)
表3复方中药对小鼠脂肪系数及游泳时间的影响
Table3EffectsofcompoundtraditionalChinesemedicineonfatcoefficientandswimmingtimeofmouse
第39卷
组别Group
普通对照组(组)Normalcontrol(group)模型对照组(组)Modelcontrol(group)阳性对照组(组)Positivecontrol(group)药物组(组)Drugtherapy(group)
终质量/(g只-1)
Finalweight25.751.8934.953.7932.862.7732.562.53
体脂质量/(g只-1)
Fatweight0.590.17
2.190.50▼1.750.62▼#1.160.38▼#
▽
脂肪系数/%Fatindex2.260.546.200.84▼5.261.57▼3.501.90▼#
▽
游泳时间/minSwimmingtime11.382.757.490.97▼5.753.03▼#15.022.49▼#
图1复方中药对小鼠体脂沉积的影响
A、B、C、D分别为普通对照组、模型对照组、阳性对照组和复方中药组
Fig.1EffectsofcompoundtraditionalChinesemedicineonbodyfatofmouse
A,B,C,Dexpressionrespectivelyinnormalcontrolgroup,modelcontrolgroup,positivecontrolgroupanddrugtherapygroup
由以上结果可知,复方中药可显著降低肥胖小
鼠的体质量、体质量增长率、李氏指数和脂肪系数,说明该复方中药有较好的减肥作用。
2.2复方中药对小鼠的健脾作用
与西医不同,中医认为,脾有运化水谷的功能,即脾既能消化饮食,又能统摄周身血液、调节血液循环[4]。通常所说脾有益气作用的气,就是代表人体机能的动力,而这种动力的产生,则有赖于脾发挥正常的运化能力。脾与四肢、肌肉等有关,若脾的运化功能正常,则四肢活动有力,体力充沛。表3显示,药物组小鼠的游泳时间显著大于模型对照组(P<0.05),极显著大于阳性对照组(P<0.01),说明复方中药能够显著提高小鼠的抗疲劳性,具有益
气健脾作用。
2.3复方中药对小鼠的降脂作用
表4显示,模型对照组的TG、TCH和HDLC水平均显著高于普通对照组(P<0.05),说明小鼠高血脂肥胖模型构建成功。对于TG水平而言,阳性对照组显著低于、组(P<0.05),药物组高于阳性对照组而显著低于、组(P<0.05);对于TCH水平而言,模型对照组显著高于其他组(P<0.05),药物组与阳性对照组差异不显著(P>0.05);对于HDLC水平而言,、组显著低于模型对照组(P<0.05),药物组显著低于阳性对照组(P<0.05)。
表4复方中药对小鼠血脂水平的影响
Table4EffectsofcompoundtraditionalChinesemedicineonbloodlipidlevelofmouse
组别
Group
普通对照组(组)Normalcontrol(group)模型对照组(组)Modelcontrol(group)阳性对照组(组)Positivecontrol(group)药物组(组)drugtherapy(group)
TGTriglyceride0.80230.32551.03580.17000.67570.0523▼#0.78360.1338▼#
mmol/L
TCH
Totalcholesterol2.98570.46553.75830.68623.21740.4744#3.34310.3230#
HDLCHighdensity
lipoproteincholesterol1.71580.24352.98470.07872.72130.1865#2.57450.3816#
▽
血清中甘油三酯及胆固醇含量是药物减肥降脂功能常用的评价指标[5]。本研究降脂试验结果表明,给药后,药物组TG、TCH、HDLC指标较模型对照组均显著降低,说明供试复方中药具有降血脂作用。
2.4各组小鼠的生理及精神状态观察
普通对照组小鼠平日精神状态良好,毛色润泽、
洁净,取食饮水正常,粪便正常。模型对照组小鼠精神不佳、嗜睡、不爱运动,毛色略发黄、油腻成簇,食欲逐渐减弱,粪便正常。阳性对照组精神萎靡不振、嗜睡、不好动,毛色发黄、油腻成簇,食欲不振,粪便色浅。药物组精神状态良好,毛色润泽、洁净整齐,取食饮水正常,粪便色深。由此可见,在减肥效果差异不大的情况下,供试复方中药的毒副作用明显小
第5期傅晨,等:复方中药的健脾及减肥降脂作用研究25
于西布曲名。
2.5复方中药对小鼠肝脏FAS基因mRNA表达
的影响
颜新春等[6]研究表明,小鼠饲料中的脂肪酸对FAS基因的表达具有抑制作用,其原因是脂肪酸链中的双键会影响脂肪酸合酶活性,而高脂饲料会导致机体细胞内脂肪酸含量过高,从而使基因的表达量降低。图2中,饲喂基础饲料的普通对照组小鼠摄入体内的脂肪酸含量相对较少,所以FASmRNA表达量高于模型对照组和药物组;药物组的FASmRNA表达量较模型对照组高,表明复方中药能调节机体内过量摄入的脂肪酸,使其含量趋于降低,减少对FAS表达的抑制。
低人体内的胆固醇含量[13];黄芪性微温,味甘,归脾、肺经,具健脾补中、益气固表等功能,可促进机体代谢、抗疲劳、更新血清和肝脏蛋白质,还有降血脂、降血压[14]之功效;白术苦温而善燥湿,含有白术多糖、白术挥发油等化学成分,具有健脾益气、燥湿利水等多种功效;茯苓甘淡而善于渗湿,亦能益气健脾。白术、茯苓合而用之,一燥一渗,健脾除湿,相辅相成[16]。与西布曲名对照相比,本试验供试中药复方通过益气健脾、调节机体营养代谢失衡而发挥减肥功效,且毒副作用小,具有一定的开发前景,但对其作用机理还需进行深入研究。[参考文献]
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图2复方中药对小鼠肝脏组织中FAS基因
mRNA表达的影响
1,2,3.分别为普通对照组、模型对照组和药物组
Fig.2EffectsofcompoundtraditionalChinesemedicineon
FASgeneexpressioninliverofmouse
1,2,3.Expressionrespectivelyinnormalcontrolgroup,
modelcontrolgroupanddrugtherapygroup
3讨论
本研究显示,供试复方中药能够显著降低小鼠的体质量增长率、脂肪系数及血脂水平,提高小鼠的抗疲劳时间,还能降低高脂饮食小鼠机体内脂肪酸的含量,说明中药对由饮食结构变化引起的营养代谢失衡有一定的调节作用。根据上述各结果推测,供试复方中药可能通过补气增强了脾脏运化水谷的能力,使摄入的脂肪酸代谢加快,从而减少了体内
的脂肪酸含量,达到减肥的目的。
目前市场上治疗肥胖的药物主要有西布曲名、芬氟拉明、奥利司他等[7],这些药物有一定的减肥效果,但副作用较强,如西布曲名在使体质量减小的同时会导致口渴、便秘、头晕和失眠等,甚至会影响心血管系统[810]。国际上已制定了不抑制食欲,不引起腹泻,减轻体质量而不降低体力
[11]
的减肥原则。
本研究根据该原则进行组方,采用的复方中药中,荷叶所含主要有效成分为荷叶生物碱[12],为中医常用的药物,本草纲目记载荷叶服之,令人瘦劣,单服可以消阳水浮肿之气;海藻中富含海藻酸,能通过阻碍胆固醇的吸收和促进肝脏内胆固醇的消耗,降26
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