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复方中药的健脾及减肥降脂作用研究

2023-08-02 来源:客趣旅游网
第39卷󰀁第5期2011年5月西北农林科技大学学报(自然科学版)

JournalofNorthwestA&FUniversity(Nat.Sci.Ed.)

Vol.39No.5May2011

复方中药的健脾及减肥降脂作用研究

傅󰀁晨,欧阳五庆,尚朋朋,王󰀁璟

(西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100)

*

[摘󰀁要]󰀁󰀁目的󰀁研究自制复方中药对肥胖模型小鼠的减肥、降脂和健脾作用。󰀁方法󰀁构建小鼠肥胖模型,成功后将其分为模型对照组(灌胃蒸馏水0.2mL/(只󰀁d))、阳性对照组(灌胃6.5mg/mL西布曲名溶液0.2mL/(只󰀁d))和药物组(灌胃复方中药浸膏0.3mL/(只󰀁d)),同时设立普通对照组(处理方法同模型对照组),20d后检测分析其李氏指数、体质量增长率、脂肪系数和血脂水平等指标的变化情况,记录各组小鼠抗疲劳试验的游泳时间及其活力表现,并取肝脏组织提取总RNA,用RT󰀁PCR方法检测脂肪酸合酶(FAS)基因的表达量。󰀁结果󰀁药物组李氏指数、体质量增长率、脂肪系数及血清甘油三酯、总胆固醇和高密度脂蛋白󰀁胆固醇水平与模型对照组相比均显著降低(P<0.05),游泳时间明显长于3个对照组(P<0.05),脂肪酸合酶基因mRNA表达量高于模型对照组而低于普通对照组。󰀁结论󰀁供试复方中药具有显著的减肥降脂和健脾作用。

[关键词]󰀁复方中药;健脾;减肥;降血脂;脂肪酸合酶[中图分类号]󰀁R151.1

[文献标识码]󰀁A

[文章编号]󰀁1671󰀁9387(2011)05󰀁0021󰀁06

StudyonfunctionsofthecompoundtraditionalChinesemedicinein

invigoratingspleenandinlosingweightandfat

FUChen,OUYANGWu󰀁qing,SHANGPeng󰀁peng,WANGJing

(CollegeofVeterinaryMedicine,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China)

Abstract:󰀁Objective󰀁TheresearchwasconductedtostudythefunctionsofahomemadecompoundtraditionalChinesemedicineinreducingweightandfatandcliniceffectininvigoratingspleenofobesitymice.󰀁Method󰀁Constructedobesitymodelmiceweredividedintomodelcontrolgroup(perfusedwithdis󰀁tilledwater,0.2mL/(mouse󰀁day)),positivecontrolgroup(perfusedwith6.5mg/mLsibutraminesolu󰀁tion,0.2mL/(mouse󰀁day))anddrugtherapygroup(perfusedwiththecompoundtraditionalChinesemedicineextract,0.3mL/(mouse󰀁day)).Meanwhile,anormalcontrolgroup(treatmentwasthesameasthatofthemodelcontrolgroup)wasestablished.20dayslater,obesityindicators,suchasLeeindex,growthrateofbodyweight,fatindex,bloodlipidlevelandetc,werecalculated;swimmingtimewasrecor󰀁dedinfatiguetests,anddynamicperformancewasobserved.Meanwhile,totalRNAwasisolatedfromliverandFASgeneexpressionlevelwasmeasuredbyRT󰀁PCR.󰀁Result󰀁Theindicatorsofdrugtherapygroup,suchasLeeindex,growthrateofbodyweight,fatindex,bloodlipidlevelandetc,weresignificantlylowerthanthoseofmodeledgroup(P<0.05);Meanwhile,theswimmingtimeofdrugtherapygroupwaslongerthanthatofthethreecontrolgroups(P<0.05).However,FASgeneexpressionlevelofdrugtherapygroupwasbetweenmodeledgroupandcontrolgroup.󰀁Conclusion󰀁ThecompoundtraditionalChinesemedicinepossessescertaineffectinbothreducingweightandfatandinvigoratingspleen.

*

[收稿日期][基金项目][作者简介][通信作者]

󰀁󰀁󰀁󰀁

2010󰀁10󰀁12

陕西省重大科技创新专项(K332020916)

傅󰀁晨(1986-),女,陕西杨凌人,在读硕士,主要从事消化与生理学研究。E󰀁mail:fu󰀁󰀁dayday@163.com欧阳五庆(1960-),男,陕西凤翔人,教授,博士生导师,主要从事生理学和细胞生物学研究。E󰀁mail:oywq506@sina.com22西北农林科技大学学报(自然科学版)第39卷

Keywords:compoundtraditionalChinesemedicine;invigoratingspleen;weight󰀁loss;fatreducing;FAS󰀁󰀁中医是我国的传统医学,其基础理论可概括为󰀁整体观念,辨证论治󰀁,即认为人体是一个有机的整体,通过辨清外显的󰀁证󰀁而实现从根本上治疗疾病。历代医家认为,肥胖病与气虚、痰、湿、淤有关。引起肥胖的原因有外感(湿邪)、食伤(过食肥甘)和正虚(脾虚)等因素。主要是脾胃受损、脾不散精,或脾肾不足,水道不利,变生膏脂痰湿,郁积体内而成肥胖[1]。因此,脾肾功能失调是肥胖病的病理基础。本研究通过高脂饮食构建小鼠营养失衡的肥胖模型,选用可益气健脾且安全无毒副作用的中药材组成复方,研究该复方中药的减肥、降脂及健脾作用,现将结果报道如下。

(󰀁组)和药物组(󰀁组)。󰀁、󰀁组小鼠以蒸馏水灌胃,用量0.2mL/(只󰀁d);󰀁组小鼠以6.5mg/mL

西布曲名溶液灌胃,0.2mL/(只󰀁d);󰀁组小鼠以复方中药浸膏灌胃,0.3mL/(只󰀁d)。灌胃期间,󰀁组给予基础饲料,󰀁、󰀁、󰀁组给予等量的高脂饲料(饲料给予量以多数动物吃完为原则)。试验期间小鼠自由饮水,饲养环境温度为室温。试验共进行20d,第21天进行小鼠抗疲劳试验,结束后摘眼球采血并处死小鼠,取各组小鼠体脂及󰀁、󰀁、󰀁组肝脏备用。

1.3󰀁复方中药的药效试验

1.3.1󰀁减肥作用󰀁给药前,测量各组小鼠体质量(始质量)和体长,计算李氏指数以反映小鼠的肥胖程度;给药期间,每天观察小鼠的活动情况、体毛色泽、饮食、饮水及粪便形状等;20d后,测量各组小鼠体质量(终质量)和体长,计算李氏指数和体质量增长率。试验结束后处死小鼠,剖腹取体脂(肠系膜及肾周脂肪垫)并称质量,计算脂肪系数。

李氏指数=[体质量(g)󰀁1000]1/3/体长(cm);

体质量增长率=(终质量-始质量)/始质量;脂肪系数=体脂质量/终质量。

1.3.2󰀁健脾作用󰀁小鼠抗疲劳试验:给药20d后,小鼠禁食16h,󰀁、󰀁组灌以蒸馏水,󰀁、󰀁组灌以相应药物,30min后,将小鼠放入水桶中(直径30cm,深40cm,水深20cm,水温28󰀁)。当小鼠在水中游泳至过度疲劳不动、鼻孔刚刚淹没于水下时判作溺死,然后捞出。将小鼠入水至溺死所经历的时间作为抗疲劳试验指标。

1.3.3󰀁降脂作用󰀁小鼠给药20d后,摘眼球采血。血液放入离心管静置2h后,2000r/min离心10min,取上清液得血清,按照生化试剂盒的操作说明书测定血清中TG、TCH和HDL󰀁C的浓度。1.4󰀁复方中药对小鼠肝脏FAS基因mRNA表达

的影响

1.4.1󰀁总RNA的提取󰀁采用Trizol试剂盒提取小鼠肝脏组织总RNA,用10g/L琼脂糖凝胶检测RNA的完整性。

1.4.2󰀁引物的设计与合成󰀁根据GenBank公布的小鼠FAS和󰀁󰀁actin基因序列,采用Premier5.0软件设计各基因的PCR引物。引物由北京华大基因公司合成,其具体序列、退火温度、循环数及扩增片段长度见表1。1󰀁材料与方法

1.1󰀁材󰀁料

试验动物:35日龄昆明种雌性小鼠50只,购自第四军医大学。

试剂:甘油三酯(TG,酶终点法)、总胆固醇

(TCH,酶终点法)、高密度脂蛋白󰀁胆固醇(HDL󰀁C,PTA󰀁Mg2+沉淀法)的测定试剂盒,均购自温州东瓯津玛生物科技有限公司;西布曲名,购自陕西森弗生物技术有限公司;DMSO购自Sigma公司;RNA提取试剂盒TRIZOL和DL2000DNAMarker购自天根生化公司;反转录试剂盒RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit和Taq酶购自Fermen󰀁tas;MIX购自WOLSEN。其余试剂均为分析纯。

供试药物:3g/mL的复方药物浸膏(荷叶15%、海藻10%、黄芪20%、白术20%、茯苓20%、山楂15%)。

基础饲料:面粉380g/kg,玉米粉200g/kg,麸皮160g/kg,豆粕150g/kg,鱼粉40g/kg,骨粉30g/kg,酵母、食盐、鱼肝油和微量元素添加剂各10g/kg。高脂饲料:在普通日粮的基础上添加200g/kg猪油即得高脂饲料。

1.2󰀁试验方法

将50只小鼠随机分成2组,第1组15只,饲喂基础饲料,第2组35只,饲喂高脂饲料,连续饲养2周。2周后若高脂饲料喂养小鼠的体质量超过基础饲料组小鼠的20%,则可作为肥胖模型试验小鼠[3]。从第1组中随机选取10只小鼠,作为普通对照组(󰀁组);将第2组中造模成功的30只小鼠随机分成3组,分别为模型对照组(󰀁组)、阳性对照组[2]

第5期傅󰀁晨,等:复方中药的健脾及减肥降脂作用研究

表1󰀁PCR引物的参数Table1󰀁PCRparameterofprimers

基因GeneFAS󰀁󰀁actin

序列(5󰀁󰀂3󰀁)

Primersequence

F:GGTCTATGCCACGATTCR:GTCCCATGTTGGATTTGF:ACTGCCGCATCCTCTTCCTCR:CTCCTGCTTGCTGATCCACATC

退火温度/󰀁

Tm

51.253.8

循环数Cycle3030

23

扩增片段长度/bp

Lengthofamplifiedfragments

246399

1.4.3󰀁RT󰀁PCR󰀁反应体系为:5U/󰀁LTaKaRaTaq0.25󰀁L,2.5mmol/LdNTPMixture2󰀁L,10󰀁PCRBuffer2.5󰀁L,100ng/󰀁LcDNA1󰀁L,20󰀁mol/LprimerF0.5󰀁L,20󰀁mol/LprimerR0.5󰀁L,加灭菌水至25󰀁L。反应条件:95󰀁预变性5min;退火30s(温度依引物而定),72󰀁延伸30s,30个循环;72󰀁10min,4󰀁冷却。取PCR产物,进行10g/L琼脂糖凝胶电泳检测。1.5󰀁数据统计分析

用Excel2009软件对所测数据进行处理,试验数据以󰀁平均值󰀁标准差(X󰀁󰀁SD)󰀁表示。数据分析用SPSS13.0统计软件进行,采用t检验,组间比较采用独立样本检验显著性。

2󰀁结果与分析

2.1󰀁复方中药对小鼠的减肥作用

复方中药对小鼠体质量、李氏指数及体质量增长率的影响见表2。由表2可知,给药后各组小鼠的体质量都有所增加,其中模型对照组增加最为显著(P<0.01);药物组小鼠的体质量虽高于普通对照组而低于模型对照组(P<0.01),且与阳性对照组相差不大(P>0.05),但其体质量增长率却最低,且与3个对照组相比差异显著(P>0.05)。说明在同等饲养条件下,供试复方中药能够降低小鼠体质量的增加。

表2󰀁复方中药对小鼠体质量、李氏指数及体质量增长率的影响

Table2󰀁EffectsofcompoundtraditionalChinesemedicineonbodyweight,Leeindexandgrowthrateofmouse

组别

Group

普通对照组(󰀁组)

Normalcontrol(󰀁group)模型对照组(󰀁组)

Modelcontrol(󰀁group)阳性对照组(󰀁组)

Positivecontrol(󰀁group)药物组(󰀁组)

Drugtherapy(󰀁group)

给药前Beforetreatment

体质量/(g󰀁只)Initialweight20.23󰀁2.5726.56󰀁3.0525.50󰀁2.4526.32󰀁1.88

-1

给药后Aftertreatment

体质量/(g󰀁只-1)Finalweight25.75󰀁1.8934.95󰀁3.79󰀁32.86󰀁2.77󰀁*32.56󰀁2.53󰀁*

󰀁

李氏指数Leeindex3.318󰀁0.1713.235󰀁0.1363.219󰀁0.0853.205󰀁0.093

李氏指数Leeindex3.383󰀁0.0903.459󰀁0.076󰀁3.390󰀁0.055󰀁#3.355󰀁0.083󰀁#

󰀁

体质量增长率/%Growthrate27.29󰀁2.2131.59󰀁3.29󰀁28.86󰀁2.53▼#23.71󰀁1.78▼*

󰀁󰀁注:与普通对照组相比,󰀁表示差异极显著(P<0.01),▼表示差异显著(P<0.05);与模型对照组相比,*表示差异极显著(P<0.01),#

表示差异显著(P<0.05);󰀁表示差异不显著(P>0.05);与阳性对照组相比,󰀁表示差异极显著(P<0.01),▽表示差异显著(P<0.05),󰀁表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

Note:Inthesamecolumn,comparedwithnormalcontrol,󰀁isindicativeofextremelysignificantdifference(P<0.01),▼issignificant

difference(P<0.05);comparedwithModelcontrol,*isindicativeofextremelysignificantdifference(P<0.01),#issignificantdifference(P<0.05),󰀁isinsignificantdifference(P>0.05);comparedwithpositivecontrol,󰀁isindicativeofextremelysignificantdifference(P<0.01),▽issignificantdifference(P<0.05),󰀁isinsignificantdifference(P>0.05).Thesameasbellow.

󰀁󰀁由表2还可知,给药前后,普通对照组小鼠的李氏指数增长并不明显,而󰀁~󰀁组小鼠的李氏指数相对于普通对照组均极显著增加(P<0.01),其中模型对照组的李氏指数又显著高于󰀁、󰀁组(P<0.05),表明肥胖小鼠模型构建成功;药物组小鼠李氏指数与阳性对照组之间差异不显著(P>0.05),说明供试复方中药能够显著降低小鼠的李氏指数,且降低程度与西布曲名差异不大。

由表3可知,󰀁、󰀁、󰀁组小鼠体脂质量显著高于普通对照组(P<0.05),其中模型对照组体脂质量显著高于其他组(P<0.05);药物组体脂质量显著低于模型对照组和阳性对照组(P<0.05)。各组小鼠腹部体脂沉积情况见图1。

由表3还可知,󰀁~󰀁组小鼠的脂肪系数均显著高于普通对照组(P<0.05);模型对照组脂肪系数最高,且与阳性对照组之间差异不显著(P>0.05);而药物组脂肪系数显著低于模型对照组和阳性对照组(P<0.05)。说明复方中药能够明显减少小鼠体内的脂肪沉积,从而降低脂肪系数。

24西北农林科技大学学报(自然科学版)

表3󰀁复方中药对小鼠脂肪系数及游泳时间的影响

Table3󰀁EffectsofcompoundtraditionalChinesemedicineonfatcoefficientandswimmingtimeofmouse

第39卷

组别Group

普通对照组(󰀁组)Normalcontrol(󰀁group)模型对照组(󰀁组)Modelcontrol(󰀁group)阳性对照组(󰀁组)Positivecontrol(󰀁group)药物组(󰀁组)Drugtherapy(󰀁group)

终质量/(g󰀁只-1)

Finalweight25.75󰀁1.8934.95󰀁3.7932.86󰀁2.7732.56󰀁2.53

体脂质量/(g󰀁只-1)

Fatweight0.59󰀁0.17

2.19󰀁0.50▼1.75󰀁0.62▼#1.16󰀁0.38▼#

脂肪系数/%Fatindex2.26󰀁0.546.20󰀁0.84▼5.26󰀁1.57▼󰀁3.50󰀁1.90▼#

游泳时间/minSwimmingtime11.38󰀁2.757.49󰀁0.97▼5.75󰀁3.03▼#15.02󰀁2.49▼#

󰀁

图1󰀁复方中药对小鼠体脂沉积的影响

A、B、C、D分别为普通对照组、模型对照组、阳性对照组和复方中药组

Fig.1󰀁EffectsofcompoundtraditionalChinesemedicineonbodyfatofmouse

A,B,C,Dexpressionrespectivelyinnormalcontrolgroup,modelcontrolgroup,positivecontrolgroupanddrugtherapygroup

󰀁󰀁由以上结果可知,复方中药可显著降低肥胖小

鼠的体质量、体质量增长率、李氏指数和脂肪系数,说明该复方中药有较好的减肥作用。

2.2󰀁复方中药对小鼠的健脾作用

与西医不同,中医认为,脾有运化水谷的功能,即脾既能消化饮食,又能统摄周身血液、调节血液循环[4]。通常所说脾有益气作用的󰀁气󰀁,就是代表人体机能的动力,而这种动力的产生,则有赖于脾发挥正常的运化能力。脾与四肢、肌肉等有关,若脾的运化功能正常,则四肢活动有力,体力充沛。表3显示,药物组小鼠的游泳时间显著大于模型对照组(P<0.05),极显著大于阳性对照组(P<0.01),说明复方中药能够显著提高小鼠的抗疲劳性,具有益

气健脾作用。

2.3󰀁复方中药对小鼠的降脂作用

表4显示,模型对照组的TG、TCH和HDL󰀁C水平均显著高于普通对照组(P<0.05),说明小鼠高血脂肥胖模型构建成功。对于TG水平而言,阳性对照组显著低于󰀁、󰀁组(P<0.05),药物组高于阳性对照组而显著低于󰀁、󰀁组(P<0.05);对于TCH水平而言,模型对照组显著高于其他组(P<0.05),药物组与阳性对照组差异不显著(P>0.05);对于HDL󰀁C水平而言,󰀁、󰀁组显著低于模型对照组(P<0.05),药物组显著低于阳性对照组(P<0.05)。

表4󰀁复方中药对小鼠血脂水平的影响

Table4󰀁EffectsofcompoundtraditionalChinesemedicineonbloodlipidlevelofmouse

组别

Group

普通对照组(󰀁组)Normalcontrol(󰀁group)模型对照组(󰀁组)Modelcontrol(󰀁group)阳性对照组(󰀁组)Positivecontrol(󰀁group)药物组(󰀁组)drugtherapy(󰀁group)

TGTriglyceride0.8023󰀁0.32551.0358󰀁0.1700󰀁0.6757󰀁0.0523▼#0.7836󰀁0.1338▼#

󰀁

mmol/L

TCH

Totalcholesterol2.9857󰀁0.46553.7583󰀁0.6862󰀁3.2174󰀁0.4744󰀁#3.3431󰀁0.3230󰀁#

󰀁

HDL󰀁CHigh󰀁density

lipoproteincholesterol1.7158󰀁0.24352.9847󰀁0.0787󰀁2.7213󰀁0.1865󰀁#2.5745󰀁0.3816󰀁#

󰀁󰀁血清中甘油三酯及胆固醇含量是药物减肥降脂功能常用的评价指标[5]。本研究降脂试验结果表明,给药后,药物组TG、TCH、HDL󰀁C指标较模型对照组均显著降低,说明供试复方中药具有降血脂作用。

2.4󰀁各组小鼠的生理及精神状态观察

普通对照组小鼠平日精神状态良好,毛色润泽、

洁净,取食饮水正常,粪便正常。模型对照组小鼠精神不佳、嗜睡、不爱运动,毛色略发黄、油腻成簇,食欲逐渐减弱,粪便正常。阳性对照组精神萎靡不振、嗜睡、不好动,毛色发黄、油腻成簇,食欲不振,粪便色浅。药物组精神状态良好,毛色润泽、洁净整齐,取食饮水正常,粪便色深。由此可见,在减肥效果差异不大的情况下,供试复方中药的毒副作用明显小

第5期傅󰀁晨,等:复方中药的健脾及减肥降脂作用研究25

于西布曲名。

2.5󰀁复方中药对小鼠肝脏FAS基因mRNA表达

的影响

颜新春等[6]研究表明,小鼠饲料中的脂肪酸对FAS基因的表达具有抑制作用,其原因是脂肪酸链中的双键会影响脂肪酸合酶活性,而高脂饲料会导致机体细胞内脂肪酸含量过高,从而使基因的表达量降低。图2中,饲喂基础饲料的普通对照组小鼠摄入体内的脂肪酸含量相对较少,所以FASmRNA表达量高于模型对照组和药物组;药物组的FASmRNA表达量较模型对照组高,表明复方中药能调节机体内过量摄入的脂肪酸,使其含量趋于降低,减少对FAS表达的抑制。

低人体内的胆固醇含量[13];黄芪性微温,味甘,归脾、肺经,具健脾补中、益气固表等功能,可促进机体代谢、抗疲劳、更新血清和肝脏蛋白质,还有降血脂、降血压[14]之功效;白术苦温而善燥湿,含有白术多糖、白术挥发油等化学成分,具有健脾益气、燥湿利水等多种功效;茯苓甘淡而善于渗湿,亦能益气健脾。白术、茯苓合而用之,一燥一渗,健脾除湿,相辅相成[16]。与西布曲名对照相比,本试验供试中药复方通过益气健脾、调节机体营养代谢失衡而发挥减肥功效,且毒副作用小,具有一定的开发前景,但对其作用机理还需进行深入研究。[参考文献]

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图2󰀁复方中药对小鼠肝脏组织中FAS基因

mRNA表达的影响

1,2,3.分别为普通对照组、模型对照组和药物组

Fig.2󰀁EffectsofcompoundtraditionalChinesemedicineon

FASgeneexpressioninliverofmouse

1,2,3.Expressionrespectivelyinnormalcontrolgroup,

modelcontrolgroupanddrugtherapygroup

3󰀁讨󰀁论

本研究显示,供试复方中药能够显著降低小鼠的体质量增长率、脂肪系数及血脂水平,提高小鼠的抗疲劳时间,还能降低高脂饮食小鼠机体内脂肪酸的含量,说明中药对由饮食结构变化引起的营养代谢失衡有一定的调节作用。根据上述各结果推测,供试复方中药可能通过补󰀁气󰀁增强了脾脏运化水谷的能力,使摄入的脂肪酸代谢加快,从而减少了体内

的脂肪酸含量,达到减肥的目的。

目前市场上治疗肥胖的药物主要有西布曲名、芬氟拉明、奥利司他等[7],这些药物有一定的减肥效果,但副作用较强,如西布曲名在使体质量减小的同时会导致口渴、便秘、头晕和失眠等,甚至会影响心血管系统[8󰀁10]。国际上已制定了󰀁不抑制食欲,不引起腹泻,减轻体质量而不降低体力

[11]

󰀁的减肥原则。

本研究根据该原则进行组方,采用的复方中药中,荷叶所含主要有效成分为荷叶生物碱[12],为中医常用的药物,󰀁本草纲目󰀁记载󰀁荷叶服之,令人瘦劣,单服可以消阳水浮肿之气󰀁;海藻中富含海藻酸,能通过阻碍胆固醇的吸收和促进肝脏内胆固醇的消耗,降26

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