实验三园艺植物种质资源调查

第一篇：实验三园艺植物种质资源调查

实验三园艺植物种质资源调查 一、目的和要求

学习园艺植物种质资源调查的方法，了解本地园艺植物种质资源的种类和生境。掌握种质资源调查的内容，认识园艺种质资源调查对栽培（为生产提供有直接栽培价值的材料）、育种和科学研究（为育种及利用作砧木或提供有价值的原始材料）的重要意义。

二、方法步骤

1.准备阶段建立调查小组—拟订调查计划---进行试点调查---收集参考资料(气象和地理等)---设计记载表格。

2.调查阶段（野外还要进行标本采集和制作）。 3.总结阶段。调查总结评价建议。 三、进行资料查阅和调查

通过查找文献、询问、实地考察等途径调查你的家乡都有哪些园艺种质资源？用途、特点和利用情况，并给予评价。（还有哪些需要进一步开发？）

四、作业

写出种质资源调查报告 附： 园艺种质资源调查报告

概况（调查时间、地点、自然条件、生境）

园艺植物种质资源分布情况以及特点：调查地区园艺植物的总体类别（栽培种、野生种；果树、蔬菜、观赏植物）、特点；分类及评价、利用情况；可借鉴的和不足地方等。 第二篇：《园艺植物生物技术》实验教案

实验一 现代生物技术实验室与实验仪器 一、实验目的

实验室和实验仪器是开展现代生物技术研究的基础平台，对实验室布局和仪器配置的掌握程度是学生知识结构完整性的重要体现。通

过现场参观和老师讲解加深同学们对现代分子生物学实验室的规划与布局及常用仪器设备的主要功能的认识，掌握高速冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等关键仪器的使用方法。

二、实验场所选择及实验内容

园艺学院植物分子生物技术实验室与开展现代生物技术研究直接相关的实验室分工与布局和主要相关仪器：如与组织培养有关的超净工作台、高压灭菌锅、接种至、培养室等；与分子生物学有关的高速冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等。

三、实验方法与步骤

1、相关背景知识回顾：对课堂讲述的各种生物技术如分子标记、细胞和组织培养等操作过程进行回顾，重要指出每个环节要用到的必备仪器的作用、性能指标、操作注意事项及仪器选购中应注意的问题等。

2、每班分为两小组简要介绍现代生物技术实验室的布局及功能分区情况；针对每个分区的重要仪器进行讲述，结束时对所有参观内容进行简要总结，并回答同学们的提问。

四、实验注意事项

实验有很多易损仪器或有毒试剂，参观时要求同学们认真记录，不要随意动手，以保证仪器和人身安全。

五、思考题

1、根据参观内容，描述本次参观有了解到的主要仪器的名称、用途及使用中的注意事项。

2、一个现代化生物技术实验室应具备的基本功能的必备仪器有哪些？实验二 质粒DNA的提取、纯化及检测

一、实验目的

质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取时最常用、最基本的实验技术。质粒的提取方法很多，大多包括3个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化。本实验以碱裂解法为例介绍质粒的抽提过程，应掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试

剂的作用。

二、实验原理 在pH 12.0-12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清液中，然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。

三、主要仪器及试材

含有质粒pUC18载体的大肠杆菌菌液及离心机、移液枪、离心管及质粒DNA提取有关试剂。

液氮、及DNA提取有关试剂。 四、实验方法与步骤 （一）试剂配制:

1、LB培养基:NaCl 10g，酵母提取物（Yeast extract）5g，蛋白胨（Peptone）10g，琼脂粉15g，加ddH2O至1000ml。分装至500ml三角瓶（250ml/瓶）。高压灭菌15min，室温贮存。

2、X-gal（20mg/ml）:20mg X-gal溶于1ml二甲基甲酰胺中，-20℃避光保存。

3、IPTG（200mg/ml）:1g IPTG溶于4ml去离子双蒸水中，定容至5ml，过滤灭菌后-20℃保存。

4、Amp（100mg/ml）:1g Amp溶于4ml去离子灭菌双蒸水中，定容至5ml，-20℃保存。

5、溶液I: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl（pH 8.0），10mM EDTA（pH 8.0）。配制方法：1M Tris-HCl（pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。高压灭菌15min，贮存于4℃。

6、溶液II:0.2N NaOH，1% SDS。配制方法：2N NaOH 1ml，10% SDS 1ml，加ddH2O至10ml，使用前临时配制。

7、溶液III:醋酸钾（KAc）缓冲液，pH 4.8。配制方法：5M

KAc300ml，冰醋酸57.5ml，加ddH2O至500ml（视冰醋酸情况，也可按6:3:1配制），贮存于4℃。

8、TE:10mM Tris-HCl（pH 8.0），1mM EDTA（pH 8.0）。配制方法：1M Tris-HCl（pH 8.0）1ml，0.5M EDTA（pH 8.0）0.2ml，加ddH2O至100ml。高压灭菌15min，贮存于4℃。

9、苯酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）。

10、乙醇（无水乙醇、70%乙醇）。11、5×TBE:Tris-base 54g，硼酸27.5g，EDTA-Na·2H2O 4.65g，加ddH2O至1000ml。高压灭菌15min，贮存于4℃。

12、溴化乙锭（EB）：10mg/ml

13、Rnase A（RNA酶A）:不含DNA酶（DNase-free）RNase A的10mg/ml，TE配制，沸水加热15min，分装贮存于-20℃。14、6×loading buffer（上样缓冲液）:0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青FF，40%（W/V）蔗糖水溶液。15、1%琼脂糖凝胶:称取1g琼脂糖与三角烧瓶中，加100ml 1×TBE，微波炉加热至完全熔化，冷却至60℃左右，加EB母液（10mg/ml）至终浓度0.5ug/ml（注意：EB为强诱变剂，操作时带手套），轻轻摇匀，缓缓倒入架有梳子的电泳胶板中，勿使有气泡，静置冷却30min以上，轻轻拔出梳子，放入电泳槽中（电泳缓冲液1×TBE），即可上样。

（二）实验步骤

1、取含有pUC18质粒的大肠杆菌菌液于LB固体培养基上划线37℃过夜培养。

2、用无菌牙签或枪头挑取LB固体培养基上生长的单菌落，接种于20ml含有Amp抗生素的LB液体培养基中，37℃摇床-250r/min过夜培养。

3、吸取1.5ml菌液，12000g离心1min，收集菌体，倒掉菌液；吸取1.5ml菌液，再次收集菌体，尽量将菌液倒干净。

4、加入200ul预冷的溶液I，重新悬浮细胞，震荡混匀（注意：应彻底混匀沉淀或碎块）。

5、加入400ul新配置的溶液II，轻柔颠倒混匀（不可剧烈震荡），

并将离心管置于冰上2-3min，使细胞膜裂解（溶液II为裂解液，故离心管中菌液逐渐变清）。

6、加入300ul预冷的溶液III，温和颠倒混匀，见白色絮状沉淀，置于冰上3-5min，使杂质充分沉淀（溶液III为中和液，此时质粒DNA复性，染色体和蛋白质不可逆变性，形成不可溶复合物，同时K+使SDS-蛋白复合物沉淀）。

7、吸取800ul上清液（注意：不要吸到漂浮的杂质）至另一Eppendorf管中，加入2/3体积的异丙醇或2.5倍体积的预冷无水乙醇，混匀，室温放置5min，4℃离心12000g ×15min。

8、倒尽上清，加75%乙醇浸洗沉淀除盐1-2次，4℃离心 10000g×10min，弃上清，将沉淀在室温或超净工作台上风干。

9、将沉淀溶于40ul 灭菌超纯水或TE（含RNase A 20ug/ml），37℃水浴30min，以降解RAN，-20℃保存备用。

10、取制备的质粒DNA 1-2ul，加适当loading buffer混匀上样，1%琼脂糖凝胶2.5V/cm电泳1h进行检测。

五、实验注意事项

1、实验中的液氮、氯仿、EB等都是有毒物质，操作时应注意防护，尽量减少台面污染。

2、DAN电泳时只能由负极到正极，电泳时要注意电极是否正确。 3、质粒电泳检测一般有三条带，分别为质粒的超螺旋、开环、线型三种构型。

六、思考题

简述质粒DAN提取的步骤。 实验三 PCR技术 一、实验目的

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种体外核酸扩增系统，是分子克隆技术中常用技术之一。PCR具有反应快速、灵敏、操作简便等优点，已广泛应用于分子生物学的各个领域。通过本实验应掌握PCR原理，学习PCR操作过程。

二、实验原理

PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在环境下依赖于DNA聚合酶的酶促反应。PCR技术的特异性取决于引物和模板结合的特异性。反应分为变性、退火、延伸三步，经过一定的循环，介于两个引物之间的特异DNA片段得到大量扩增。

三、主要仪器及试材

含有外源cDNA片段的质粒或转基因苹果、番茄叶片总DNA；外源基因的特异引物及PCR仪与相关试剂。

四、实验方法与步骤 1、调整模板浓度至5ng/ul。

2、按下列体系配制反应混合液，混匀，离心5秒（注意加1滴矿物油覆盖PCR管）。

Template DNA 2ul（20ng）10×buffer 2.0ul MgCl2（25mM） 1.5ul Primer F（10uM） 0.2ul Primer R（10uM） 0.2ul dNTPs（2mM） 2.0ul Taq（5U/ul） 0.2ul Add ddH2O to 20ul

3、PCR反应循环条件设置： 95℃ 3min 1cycle 94℃ 1min 55℃ 1min 72℃ 90s

35cycles 72℃ 10min

1cycle 4℃ forever

4、检测：加2ul溴酚蓝，混匀，短暂离心，取15ul反应产物点样电泳

5、在1%琼脂糖凝胶上点样电泳；EB染色，紫外观察。 五、实验注意事项

1、引物设计应具有特异性，依靠引物设计软件进行引物设计；引物分装成多管，不宜反复冻融多次；

2、PCR反应的各种成分不能遗漏，操作应戴手套，冰上操作； 3、根据引物的Tm值和扩增片段长度以及PCR仪的特性来设定PCR循环条件；

4、注意分析电泳检测PCR产物时出现拖带或非特异性扩增带、无DNA带或DNA带很弱的可能原因。

六、思考题

简述PCR技术的原理和步骤。 第三篇：《园艺植物生物技术》实验教案

《园艺植物生物技术》实验教案 实验一 现代生物技术实验室与实验仪器 一、实验目的

实验室和实验仪器是开展现代生物技术研究的基础平台，对实验室布局和仪器配置的掌握程度是学生知识结构完整性的重要体现。通过现场参观和老师讲解加深同学们对现代分子生物学实验室的规划与布局及常用仪器设备的主要功能的认识，掌握高速冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等关键仪器的使用方法。

二、实验场所选择及实验内容

园艺学院植物分子生物技术实验室与开展现代生物技术研究直接相关的实验室分工与布局和主要相关仪器：如与组织培养有关的超净工作台、高压灭菌锅、接种至、培养室等；与分子生物学有关的高速冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等。

三、实验方法与步骤

1、相关背景知识回顾：对课堂讲述的各种生物技术如分子标记、细胞和组织培养等操作过程进行回顾，重要指出每个环节要用到的必备仪器的作用、性能指标、操作注意事项及仪器选购中应注意的问题等。

2、每班分为两小组简要介绍现代生物技术实验室的布局及功能分区情况；针对每个分区的重要仪器进行讲述，结束时对所有参观内容进行简要总结，并回答同学们的提问。

四、实验注意事项

实验有很多易损仪器或有毒试剂，参观时要求同学们认真记录，不要随意动手，以保证仪器和人身安全。

五、思考题

1、根据参观内容，描述本次参观有了解到的主要仪器的名称、用途及使用中的注意事项。

2、一个现代化生物技术实验室应具备的基本功能的必备仪器有哪些？

实验二 植物组织培养 一、实验目的

植物组织培养是现代生物技术研究的重要技术手段，在原生质体融合、病毒脱除、离体快繁及遗传转化等领域发挥着不可替代的作用。胡萝卜以其培养体系成熟、再生容易而被视为组织培养的理想外植体材料，本实验通过胡萝卜的组织培养使同学们掌握基本培养基的配制、灭菌及培养的基本技能。

二、实验原理

基于1902年德国科学家哈勃兰特（Haberlandt）提出植物细胞的全能性理论，即指已分化的细胞仍然具有分化发育成新个体的潜能。在适宜的培养条件下，植物的细胞、组织或器官都具备再生成完整植物的能力。

三、主要仪器及试材

仪器：pH计、微波炉、高压灭菌锅、超净工作台、培养室、三角瓶、封口膜、无菌滤纸、手术刀片、镊子、酒精灯、记号笔等

试材：新鲜胡萝卜，培养基配制所需相关试剂 四、实验方法与步骤

（一）培养基母液的配制（小规模实验应按比例减少，避免造成很大的浪费）：

1、大量元素(10倍液)：称取下列药品分别溶解定容到1升后，加到5升存储瓶中。

KNO

395 g NH4NO3 82.5 g KH2PO 48.5 g MgSO4•7H2O 18.5 g CaCl2•2H2O 22.0 g 注意事项：

（1）配置母液前要仔细清洗存储容器

（2）应按照顺序分别彻底溶解后混合，每加完一种药品，摇动存储瓶使其混合均匀；（3）溶解时最好加热，以便充分溶解，避免沉淀的产生；

（4）夏季要用新制的蒸馏水，并加热，这样可以避免因为水中带菌量过大而产生沉淀，同时可以减缓绿藻的生成；

（5）沉淀的产生一是由于溶解不充分就混合造成的浑浊型沉淀，所以配置时一定不要急；二是由于长菌而产生絮状沉淀，所以要用新制的蒸馏水并加热。

2、微量元素母液的配制(100倍液)：取少量(200-300ml)温水依次加入下列药品，每加一种药品后搅拌溶解，最后定容到1L：

KI

0.083 g H3BO0.62 g ZnSO4*7H2O 0.86 g NaMoO4*2H2O 0.025 g CuSO4*5H2O 0.0025 g CoCl2*6H2O 0.0025 g MnSO4*4H2O

2.23 g(MnSO4*H2O 1.69 g)注意：配好后在室温下放置10 h以上再放入冰箱保存，即刻放入冰箱易产生结晶沉淀。配制过程中产生沉淀的原因有：1.前一个没彻底溶解就加入了后一个药品；2.蒸馏水pH 值过高，可加几滴盐酸校正。

3、甘氨酸和肌醇的配制(100倍液)：

甘氨酸：0.2 g溶解定容到1L；肌醇：10 g溶解定容到1L 4、铁盐的配制（100倍液）：

称取EDTA 3.73 g，FeSO4·7H2O 2.78 g，分别溶解后混合定容到1L，放入棕色细口瓶中，室温放置10 h以上（防止结晶沉淀），然后放入4℃冰箱。

5、维生素B的配制（100倍液）：

VB组分 VB1(盐酸硫氨素)VB6(盐酸吡哆素)VB5(烟 酸)

改良MT 1g 1g 0.5g

MS 10 mg 50 mg 50 mg 分别称取顺序溶解在温热的蒸馏水中，定容到1L。

注: 需要溶解完一个再加另一个；VB5不易溶解，需要搅拌，必要时可以加热。

6、Vc的配制（100倍液）：

称取Vc 0.5g 溶解在蒸馏水中，定容到1L即可。 7、其它溶液配制：

BA，NAA，IBA，GA3等激素类试剂可先用少量1N NaOH彻底溶解，再加水定容。配好后室温放置一段时间，再放入冰箱中冷藏保存。有些试剂在乙醇或盐酸中也可溶解，但比较而言，用碱溶解比较稳定，不易产生沉淀。

注意：母液最好不要配制太多，如果配制的量较大，短时间内用不完，最好分装一部分到小的细口瓶中，在制作培养基时使用。这样不容易产生沉淀。

（二）培养基配制

母液配好后，按以下体种（或质量）量取，最后用蒸馏水定溶到

1L,调节pH至5.8，用塑料烧杯放入微波炉中充分溶解后分装灭菌。

大量元素(10倍液)

ml 微量元素(100倍)ml 甘氨酸和肌醇(100倍) ml 铁盐（100倍）

ml 维生素B（100倍）ml Vc（100倍） ml 蔗糖 g 琼脂 7.5 g

（三）接种与培养

在超净台上接种后，用记号笔做好标签，放置到光照培养室中进行培养。

五、实验注意事项

1、实验中涉及到酒精及砷汞等危险品，注意人身安全的环境安全，废液不要随意乱倒。

2、外植体消毒及接种操作要规范，注意超净台的卫生，养成良好的实验习惯。

六、实验结果处理

一星期后，统计污染率，并对未污染材料的生长状况进行观察，并分析产生污染的可能原因。

七、思考题

影响植物组织培养的因素有哪些？ 主要参考文献

1.张娅，曾君祉，周志勇，陈毓荃，黄华樑。胡萝卜组织培养和高效遗传转化体系的建立。植物学通报,2005，22:37-42。

2.华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室柑橘课题组。实验手册，2002，武汉（课题组内部资料）。实验三 植物DNA的提取、纯化及检测

一、实验目的

DNA 提取是开展分子生物学的重要前提之一，高质量的DNA直接关系到分子标记、基因克隆、图谱构建及功能基因组研究等工作的

成败。通过本实验应了解常用DNA提取方法的原理和技术，掌握改良CTAB法提取植物DNA以及DNA检测技术，为将来从事园艺植物生物技术研究奠定基础。

二、实验原理

植物的遗传物质是DNA，植物细胞内含有丰富的遗传物质。在机械研磨、高温和去污剂的共同作用下，植物细胞破裂，DNA从细胞核释放到提取缓冲液中。经蛋白质强变性剂处理结合离心，除去蛋白质和色素等杂质，再用乙醇沉淀便可获得高纯度的DNA。

DNA电泳是依据DNA带负电荷，而不同浓度的琼脂糖凝胶孔径大小不同，在外加电场的作用下DNA由负极向正极移动，分子量小的移动快而分子量大的移动慢，最终达到不同分子量大小的DNA分离的目的。

三、主要仪器及试材

水浴锅、离心机、移液枪、研钵、离心管、核酸电泳系统等；新鲜健康植物叶片，液氮、及DNA提取有关试剂。

四、实验方法与步骤 1.药品的配制: CTAB提取液：

(1)100 mM Tris-HCl(PH 8.0)，1.5 M NaCl，50 mM EDTA(PH 8.0)(2)1% PVP，2% CTAB(3)取少许(1)加到(2)中，搅拌成糊状,后加(1)至足量，65℃水浴充分溶解备用。使用前要在65℃温浴一会儿，然后加入1-4%巯基乙醇，混均匀。苯酚：氯仿：异戊醇（25∶24∶1）：

重蒸酚65℃水浴溶解，在烧杯中加入80ml温热的蒸馏水，加入少许8-羟基喹啉，溶解后加入100ml重蒸酚，再加入100ml氯仿：异戊醇（24：1），加入20克Tris Base，磁力搅拌器上搅拌1.5 h左右至停止搅拌后很快分层，然后装入棕色瓶中，4℃冰箱中储存备用。2.DNA的粗提

在装有叶片的离心管中加入石英砂少许（约0.07克），用尖头玻棒将材料研细后加入600 ul CTAB提取液，再继续研磨一会儿使其悬浮均匀，然后在65℃水浴锅中温浴60分钟，隔15分钟取出上下轻轻颠倒几次，水浴之后，加入500 ul苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），上下晃动10分钟以上，其间置于37℃水浴锅中温浴一会（冬

季），使之充分混匀，然后10000-12000 rpm离心5-10分钟，吸取上清液转至另一离心管中，加入60 ul 5M NaCl，再加入-20℃冰冻无水乙醇1 ml，轻轻颠倒数次，混合均匀后冰冻30分钟沉淀DNA，然后8000-10000 rpm离心5分钟，弃上清液，加入1 ml 70%酒精浸泡2小时或过夜，8000 rpm离心5分钟,弃酒精之后在工作台上风干DNA，注意不要过干，否则会使以后溶解困难。3.DNA的纯化：

向风干后的DNA中加入500 ul 1×TE，37℃水浴15-30分钟至DNA完全溶解，加5 ul 5 mg/ml Rnase，37℃水浴6小时，然后加入700 µl苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），上下颠倒离心管约10分钟，至充分混匀，10000-12000 rpm离心5分钟，吸取上层液至另一离心管中，加入700 µl氯仿：异戊醇（24：1），颠倒10分钟（方法同上），10000 –12000 rpm离心5分钟，吸取上层液至另一离心管中，加入60 µl 5M NaCl，再加入1 ml冷冻的无水乙醇，轻轻颠倒，然后在-20℃冰箱中置30分钟沉淀DNA，8000-10000 rpm离心2-3分钟，使DNA分散状紧贴在管壁上，弃酒精，加70%酒精1ml浸泡，2小时后换一次，后浸泡过夜，8000 rpm离心3分钟后弃酒精，风干，加50-100 µl TE充分溶解备用。

4、DNA检测

（1）取DNA原液15 µl稀释至3.0 ml，用UV-1601型紫外分光光度计测定230 nm、260 nm及280 nm的吸光值。高质量的DNA要求：A260/A230>2.0； 1.7

（3）向一定量的DNA中加入限制性内切酶EcoR I至4-5 U/µg DNA，37℃消化过夜，用0.5×TBE，0.8%琼脂糖凝胶2.5V/cm电泳3 h进行检测。

五、实验注意事项

1、实验中的液氮、氯仿、苯酚、EB等都是危险或有毒物质，操作时要戴手套，并在专门区域操作。

2、DAN电泳时只能由负极到正极，电泳时要注意电极是否正确。 六、思考题

简述DAN提取的步骤及主要试剂的作用。

主要参考文献

华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室柑橘课题组。实验手册，2002，武汉（课题组内部资料）。实验四 质粒DNA的提取、纯化及检测

一、实验目的

质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取时最常用、最基本的实验技术。质粒的提取方法很多，大多包括3个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化。本实验以碱裂解法为例介绍质粒的抽提过程，应掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。

二、实验原理 在pH 12.0-12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清液中，然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。

三、主要仪器及试材

含有质粒pUC18载体的大肠杆菌菌液及离心机、移液枪、离心管及质粒DNA提取有关试剂。

液氮、及DNA提取有关试剂。 四、实验方法与步骤 （一）试剂配制:

1、LB培养基:NaCl 10g，酵母提取物（Yeast extract）5g，蛋白胨（Peptone）10g，琼脂粉15g，加ddH2O至1000ml。分装至500ml三角瓶（250ml/瓶）。高压灭菌15min，室温贮存。

2、X-gal（20mg/ml）:20mg X-gal溶于1ml二甲基甲酰胺中，-20℃避光保存。

3、IPTG（200mg/ml）:1g IPTG溶于4ml去离子双蒸水中，定

容至5ml，过滤灭菌后-20℃保存。

4、Amp（100mg/ml）:1g Amp溶于4ml去离子灭菌双蒸水中，定容至5ml，-20℃保存。

5、溶液I: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl（pH 8.0），10mM EDTA（pH 8.0）。配制方法：1M Tris-HCl（pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。高压灭菌15min，贮存于4℃。

6、溶液II:0.2N NaOH，1% SDS。配制方法：2N NaOH 1ml，10% SDS 1ml，加ddH2O至10ml，使用前临时配制。

7、溶液III:醋酸钾（KAc）缓冲液，pH 4.8。配制方法：5M KAc300ml，冰醋酸57.5ml，加ddH2O至500ml（视冰醋酸情况，也可按6:3:1配制），贮存于4℃。

8、TE:10mM Tris-HCl（pH 8.0），1mM EDTA（pH 8.0）。配制方法：1M Tris-HCl（pH 8.0）1ml，0.5M EDTA（pH 8.0）0.2ml，加ddH2O至100ml。高压灭菌15min，贮存于4℃。

9、苯酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）。

10、乙醇（无水乙醇、70%乙醇）。11、5×TBE:Tris-base 54g，硼酸27.5g，EDTA-Na·2H2O 4.65g，加ddH2O至1000ml。高压灭菌15min，贮存于4℃。

12、溴化乙锭（EB）：10mg/ml

13、Rnase A（RNA酶A）:不含DNA酶（DNase-free）RNase A的10mg/ml，TE配制，沸水加热15min，分装贮存于-20℃。14、6×loading buffer（上样缓冲液）:0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青FF，40%（W/V）蔗糖水溶液。15、1%琼脂糖凝胶:称取1g琼脂糖与三角烧瓶中，加100ml 1×TBE，微波炉加热至完全熔化，冷却至60℃左右，加EB母液（10mg/ml）至终浓度0.5ug/ml（注意：EB为强诱变剂，操作时带手套），轻轻摇匀，缓缓倒入架有梳子的电泳胶板中，勿使有气泡，静置冷却30min以上，轻轻拔出梳子，放入电泳槽中（电泳缓冲液1×TBE），即可上样。

（二）实验步骤

1、取含有pUC18质粒的大肠杆菌菌液于LB固体培养基上划线37℃过夜培养。

2、用无菌牙签或枪头挑取LB固体培养基上生长的单菌落，接种于20ml含有Amp抗生素的LB液体培养基中，37℃摇床-250r/min过夜培养。

3、吸取1.5ml菌液，12000g离心1min，收集菌体，倒掉菌液；吸取1.5ml菌液，再次收集菌体，尽量将菌液倒干净。

4、加入200ul预冷的溶液I，重新悬浮细胞，震荡混匀（注意：应彻底混匀沉淀或碎块）。

5、加入400ul新配置的溶液II，轻柔颠倒混匀（不可剧烈震荡），并将离心管置于冰上2-3min，使细胞膜裂解（溶液II为裂解液，故离心管中菌液逐渐变清）。

6、加入300ul预冷的溶液III，温和颠倒混匀，见白色絮状沉淀，置于冰上3-5min，使杂质充分沉淀（溶液III为中和液，此时质粒DNA复性，染色体和蛋白质不可逆变性，形成不可溶复合物，同时K+使SDS-蛋白复合物沉淀）。

7、吸取800ul上清液（注意：不要吸到漂浮的杂质）至另一Eppendorf管中，加入2/3体积的异丙醇或2.5倍体积的预冷无水乙醇，混匀，室温放置5min，4℃离心12000g ×15min。

8、倒尽上清，加75%乙醇浸洗沉淀除盐1-2次，4℃离心 10000g×10min，弃上清，将沉淀在室温或超净工作台上风干。

9、将沉淀溶于40ul 灭菌超纯水或TE（含RNase A 20ug/ml），37℃水浴30min，以降解RAN，-20℃保存备用。

10、取制备的质粒DNA 1-2ul，加适当loading buffer混匀上样，1%琼脂糖凝胶2.5V/cm电泳1h进行检测。

五、实验注意事项

1、实验中的液氮、氯仿、EB等都是有毒物质，操作时应注意防护，尽量减少台面污染。

2、DAN电泳时只能由负极到正极，电泳时要注意电极是否正确。 3、质粒电泳检测一般有三条带，分别为质粒的超螺旋、开环、线

型三种构型。

六、思考题

简述质粒DAN提取的步骤。 主要参考文献

华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室柑橘课题组。实验手册，2002，武汉（课题组内部资料）。

实验五 PCR技术 一、实验目的

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种体外核酸扩增系统，是分子克隆技术中常用技术之一。PCR具有反应快速、灵敏、操作简便等优点，已广泛应用于分子生物学的各个领域。通过本实验应掌握PCR原理，学习PCR操作过程。

二、实验原理

PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在环境下依赖于DNA聚合酶的酶促反应。PCR技术的特异性取决于引物和模板结合的特异性。反应分为变性、退火、延伸三步，经过一定的循环，介于两个引物之间的特异DNA片段得到大量扩增。

三、主要仪器及试材

含有外源cDNA片段的质粒或转基因苹果、番茄叶片总DNA；外源基因的特异引物及PCR仪与相关试剂。

四、实验方法与步骤 1、调整模板浓度至5ng/ul。

2、按下列体系配制反应混合液，混匀，离心5秒（注意加1滴矿物油覆盖PCR管）。

Template DNA 2ul（20ng）10×buffer 2.0ul MgCl2（25mM） 1.5ul Primer F（10uM） 0.2ul Primer R（10uM） 0.2ul dNTPs（2mM）

2.0ul Taq（5U/ul） 0.2ul Add ddH2O to 20ul

3、PCR反应循环条件设置： 95℃ 3min 1cycle 94℃ 1min 55℃ 1min 72℃ 90s

35cycles 72℃ 10min 1cycle 4℃ forever

4、检测：加2ul溴酚蓝，混匀，短暂离心，取15ul反应产物点样电泳

5、在1%琼脂糖凝胶上点样电泳；EB染色，紫外观察。 五、实验注意事项

1、引物设计应具有特异性，依靠引物设计软件进行引物设计；引物分装成多管，不宜反复冻融多次；

2、PCR反应的各种成分不能遗漏，操作应戴手套，冰上操作； 3、根据引物的Tm值和扩增片段长度以及PCR仪的特性来设定PCR循环条件；

4、注意分析电泳检测PCR产物时出现拖带或非特异性扩增带、无DNA带或DNA带很弱的可能原因。

六、思考题

简述PCR技术的原理和步骤。 主要参考文献

华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室柑橘课题组。实验手

册，2002，武汉（课题组内部资料

实验六 PCR产物的TA克隆 一、实验目的

采用同源序列法克隆特定基因或DNA片段是果树上常用的分子克隆方法。相对于粘性末端来说，克隆具有平末端的双链PCR产物效率较低。目前，有两种方法可以采用，一种是在特异引物设计时引入酶切位点，另一种是TA克隆。通过本实验应掌握PCR产物TA克隆的原理，学习PCR产物纯化及回收，以及PCR产物与TA克隆载体的连接。

二、实验原理

TA克隆是利用耐热聚合酶，如Taq聚合酶、Tfl、Tth等具有末端转移酶活性，而不具有3’一5’外切酶的校准活性，即在PCR产物的两个3’末端加上未配对的单一A凸出尾，质粒载体提供线性3’末端单一的T凸出尾，使该载体能够直接与PCR产物高效连接。TA克隆技术比其它PCR克隆方法有更高的重组效率。

三、主要仪器及试材

PCR扩增产物、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（Promega公司）、pMD18-T载体（TaKaRa公司）以及感受态大肠杆菌、高速冷冻离心机、移液枪、琼脂糖凝胶电泳等相关仪器及试剂。

四、实验方法与步骤 1、PCR扩增片段纯化回收

将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，割胶，利用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒收集PCR扩增产物，具体操作步骤参考试剂盒说明书进行。

2、连接反应 反应体系组成 pMD18-T

0.5-1.0 ul PCR fragment 1.0-4.5 ul ddH2O

0-3.0 ul Ligation Solution I

5.0 ul 混合后，置于室温下放置数小时或过夜连接。 3、重组子转化（热激法）

1）在含适当浓度的Ampicillin的LB平板上，涂抹4 ul IPTG（200mg/ml）和40 ul x-gal（20mg/ml），然后暗置30 min以上；

2）冰上冷冻新灭菌的1.5 ml 离心管； 3）取出感受态大肠杆菌，冰上放置冻融；

4）取新灭菌的1.5 ml 离心管，加入50 ul感受态细胞和10 ul连接反应液，用移液枪轻轻吸打均匀，在冰上放置30 min；

5）热激：将离心管在42 ℃下水浴90秒钟。请勿摇动离心管； 6）冰镇：快速将离心管转移至冰浴，1-2分钟；

7）复苏：每管加400 ul液体LB培养基，在37 ℃摇床温和摇动45 min-60 min； 8）涂皿：取150 ul均匀涂布于“1）”已制备好的LB平板上；

9）培养：在37 ℃下倒置培养12-16 h，即可观察到蓝白相间的菌落。白色菌落为含有外源插入片段的转化子，蓝色是载体自连的转化子。转化子可以在4 ℃下保持1个月；

10）单菌落培养：用灭菌的牙签，挑选白色的单菌落到盛有含50 mg/ml Ampicillin的5 ml液体LB培养基的50 ml离心管中，在37 ℃摇床上培养过夜（12-16 h）。

4、质粒DNA的分离 参考有关文献。 5、检测

采用相同的引物对进行PCR再扩增，或质粒上根据插入片段两端的酶切位点而进行限制性酶切，通过电泳可以检测出片段是否克隆成功。

五、实验注意事项

1、连接温度不宜太高，连接温度过高（>28℃）可使背景增加，使重组克隆菌减少。降低连接温度可以提高白斑率；

2、热激过程注意勿摇动离心管。 六、思考题

简述PCR产物TA克隆的原理和步骤。 主要参考文献

华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室柑橘课题组。实验手

册，2002，武汉（课题组内部资料。 第四篇：《园艺植物组织培养实验》教学大纲

《园艺植物组织培养实验》教学大纲

课程编号：131010418s 适用专业：园艺专业 学时数：9 学分数：0.5 执笔者：董华芳

编写日期：2006年8月 一、课程的性质和目的

《园艺植物组织培养实验》园艺专业的必修课程，本课程任务是教授植物组织培养基本实验技术及基础理论，并培养学生运用所学知识和实验方法进行实验研究的能力，为学生以后从事相关工作或研究打下坚实基础。

二、课程的教学内容要求及学时分配

实验一 玻璃器皿、用具和器械的洗涤和灭菌（1学时） 内容要求：

学会正确洗涤玻璃器皿、用具，使之达到实验的要求；学会正确使用高压灭菌锅，并对玻璃器皿、用具和器械的进行正确的灭菌。

教学要求：

掌握洗涤实验用具和高压灭菌的正确方法。实验报告的要求： 写出洗涤实验用品的步骤和正确使用高压灭菌的方法。 实验二 母液的配制（2学时） 内容要求：

学会使用1/10000精度的分析天平和电子天平。

学会正确配置贮备液，包括药品的溶解、混药的顺序。教学要求： 掌握贮备液的配置方法。实验报告的要求：

写出配置贮备液的正确步骤并说明此实验应该注意的问题 实验三 培养基的配制（2学时） 内容要求： 学会熬制培养基。

学会正确分装培养基及封口培养瓶。 培养基的正确灭菌。教学要求：

通过培养基的正确配置及灭菌，使我们对培养基的成分与性质更加清楚，从而更好的利用它。

实验报告的要求：

（1）写出配置培养基的正确步骤

（2）试比较培养基的灭菌和玻璃器皿的灭菌有什么不同。 实验四 植物茎尖快速繁殖技术（4学时） 内容要求：

要求学生掌握植物快速繁殖的程序和操作方法，包括外植体的消毒、接种、继代培养及污染原因的分析及控制方法。教学要求：

掌握茎尖剥离技术。实验报告的要求： 写出植物快速繁殖的程序和操作方法，包括外植体的消毒、接种、继代培养及污染原因的分析及控制方法。

三、课程成绩的考核办法

实验成绩是由实验指导教师依据学生在实验中的表现，实验完成情况以及撰写实验报告情况等综合评定。每次实验成绩评定等级依次为：A、B、C、D等。

四、参考教材

1.《园艺植物离体培养学》，陈振光主编，中国农业出版社，1996年 2.《园艺植物组织培养实验指导书》，姜玲编, 1992年 第五篇：园艺植物栽培学实验讲义 2

《园艺植物栽培学实验》教案 实验一 蔬菜种子的处理技术 一、实验目的

种子是农业生产的重要生产资料，种子的形态特征及生理特性各异，有些种子具有休眠特性，有些种子具有较硬的种皮或者是种子中含有萌发抑制物等。需要对种子进行一定的处理才能发芽或提高种子发芽率。要求掌握常见的种子处理的原理及方法。

二、实验原理

种子质量是由种子不同特性综合而成的一种概念，农业生产上要求种子具有优良的品种特性和优良的种子特性，包括品种质量和播种

质量两方面，品种质量是指与遗传特性有关的品质，包括种子的真实性及品种纯度。播种质量是指种子播种后与田间出苗有关的质量，包括种子净度、发芽率、千粒重、含水量等内容。

三、实验材料

1、材料 黄瓜种子、丝瓜种子、番茄种子、黒籽南瓜种子、硫酸铜、高锰酸钾、福尔马林。

四、实验内容

采用对黄瓜、番茄、丝瓜、生菜种子、黒籽南瓜进行消毒处理，观察种子的发芽率及发芽势；采用低温处理、冷水浸种、温水浸种、激素处理几种方法处理种子，观察种子的发芽率及发芽势。

五、结果与分析

实验二 蔬菜的播种育苗技术 一、实验目的

根据不同园艺植物种子的形态特征特性、不同的时期及目的，选择相应的播种方法。其中，穴盘育苗是培育优质种苗常用的方法之一，因此要求掌握穴盘育苗技术；掌握播种量的计算方法。首先都要对种子进行播种量的估算，播种量与种子的净度、纯度、发芽率等有关。

二、实验原理

将精选和处理过的繁殖材料以一定的方式和方法播入或插入土中或其他基质中，称为播种。播种质量关系到成苗数、苗的整齐度及质量，进而影响到产品产量、品质、商品性等性状。提前浸种催芽、可充分满足园艺植物种子萌发所需水分，并在人工控制的温度、水分及空气条件下，促使种子发芽快而整齐。要求掌握播种量的计算及常用的播种方法及技术。

三、实验材料

1、材料 黄瓜种子、丝瓜种子、番茄种子、黒籽南瓜种子、生菜种子、128孔穴盘

四、实验内容 1、播种期的确定

根据园艺植物的种类和品种特性、气候条件播种方式及市场需求

而定。

2、播种量的确定

根据园艺植物种类、种子质量、播种方式和方法、密度、播种季节及自然灾害等条件而确定。

3、播种深度

根据种子大小、土壤质地、土壤湿度、温度及气候条件等综合因素确定播种深度，一般覆土厚度为种子的5-7倍左右，沙质土播种宜深；土壤湿度大，温度适宜时宜浅；气候干燥宜深，湿润季节宜浅。

五、结果与分析 实验三 花卉的扦插繁殖 一、实验目的

扦插繁殖是利用园艺植物器官的再生能力，以植物的根、茎、叶等为繁殖材料，将其插入基质中，给予一定的条件使其再生成完整的独立个体。了解园艺植物扦插育苗的原理，掌握扦插育苗的基本方法。

二、实验材料 1、材料 月季枝条、扶桑 2、用具

修枝剪、河沙、珍珠岩、蛭石、生长调节剂 三、实验内容 1、苗床准备

以河沙、蛭石、珍珠岩按4：3：3比例配置，100倍液的福尔马林进行消毒，处理后密封过夜，摊开晾晒至气味消失即可进行扦插。

2、插穗的选择和修剪

在采穗圃中选择生长健壮、无病虫害、品质优良的植株作母株，于母株上选择谢花后或开花前枝条粗壮、节间短、木质化程度好、叶片发育完整的枝条作插穗。

3、插前生根处理

浸泡法：用2号ABT生根粉30ppm至50ppm液，将插穗以50根至100根绑为1捆，下端2厘米浸入该溶液2小时至4小时，取出

后插入苗床，深3厘米至5厘米。

快蘸法：用50%酒精和萘乙酸或吲哚丁酸配成500 mg/L溶液，将插穗下端2厘米浸入该溶液中2秒至5秒，待药液稍干后，立即扦入苗床。

4、扦插方法

月季扦插多用直插法。扦插深度为插穗长的1/3至1/2，一般深达第二个芽眼处即可。扦插时，首先用与插穗粗细相等的竹签穿孔，再将月季插穗插入压实。扦插密度以叶互不接触为宜。扦插时，长插穗与短插穗要分别扦插，防止长短不一，参差不齐，相互影响光照及生长。同时，品种不要混杂，按品种分段扦插，排列整齐有序，便于管理。插后立即用细眼喷壶喷水，不要喷洒过急，以免泥土污染插穗叶片及冲出插穗。盖上塑料薄膜，保持床内温度和湿度。

5、插后管理

扦插后充分浇水，前10天勤喷水，保持较湿的环境；10天后，控制喷水，见干再喷，保持晾干状态。并适当喷施千分之二的磷酸二氢钾溶液，促进生长。

四、实验结果与分析 实验四 蔬菜的嫁接繁殖 一、实验目的

通过实验学习园艺植物常用的嫁接技术，掌握嫁接成活的关键技术和具体操作。

二、实验原理

接穗嫁接到砧木上后，在砧、穗削面，由死细胞的残留物形成一层褐色隔膜，之后在愈伤组织激素的刺激下，伤口周围细胞核形成层细胞分裂旺盛，并使褐色隔膜破裂，形成愈伤组织，将砧木接穗间的空间填满，向内形成新的木质部，向外形成新的韧皮部，导管和筛管也相互沟通，形成一个新的整体。

三、实验材料与用具 1、材料 黄瓜、黒籽南瓜 2、嫁接针、刀片、嫁接夹

四、实验内容

一、生产点直插法：砧木苗第2片真叶吐芽，接穗苗第1片真叶直径1厘米时，为最佳嫁接期。用刀片切去砧木生长点，再用竹针从切口垂直插入4～５毫米。接穗从子叶节下５毫米处，与下胚轴成30°角切断，呈4～５毫米长的椭园形切面。然后取下竹针，将带子叶的接穗插入针孔内，使接穗与砧木相吻合并用塑料夹固定。喷雾净水后，置于保湿小拱棚内。接后3天内保持95％的湿度，白天温度25～28℃，夜间18～20℃。4天后小通风，8天后可揭膜炼苗。25天左右进入三叶一心期可定植。

二、靠接法：将营养钵内的砧木，在离子叶节5～10毫米处的胚轴上，从上向下斜切6～10毫米的口，在接穗子叶节下20～30毫米自下而上斜切6～8毫米的口，然后将接穗舌形楔插入砧木的切口里，用微型塑料夹固定接口，并用土埋好接穗的根。20天左右切断接穗基部，其他管理基本同直插法。

五、实验结果与分析 实验五 花卉的盆栽技术 一、实验目的

了解园艺植物育苗营养土的组成、配制、应用及床土消毒方法等。掌握花卉盆栽的基本原则及相关技术。

二、实验材料

绿宝、也门铁、散尾葵、金边吊兰、龙血树、园土、腐殖土、尿素、过磷酸钙、多菌灵、花盆。

三、实验内容

1、掌握几种常见基质的类型及特点

土壤、有机肥； 疏松填充物：如腐熟马粪、草炭土、珍珠岩、沙子、炉灰等。速效肥：保证养分的充足供给和快速供给。包括各类化学肥料。营养土的配方较多，但生产上普遍采用田土1／

3、马粪或草炭土或堆肥等腐熟的有机肥2／3，土壤过于黏重时适当加入一些炉灰或沙子，配合混匀之后按每立方米体积床土中加入过磷酸钙或磷酸二铵1-2千克、尿素250-300克、硝酸钾0.5-1千克

草木灰5-10千克，最后过筛去掉颗粒物，即配成营养土。

2、掌握营养土配制的基本原则

①没有病原菌和害虫；② 营养丰富并且各组分比例适当；③pH6.5左右； ④ 结构良好，疏松适度。营养成分全，透气性能好，保水能力强的特点

3、掌握基质的基本消毒方法 ① 物理消毒法

蒸汽消毒、高温发酵、太阳暴晒等 ②化学消毒法 福尔马林、多菌灵、氯化苦、溴甲烷

4、掌握大盆花卉及小盆花卉栽培的技术要领。 四、实验结果与分析

实验六 茄果类、豆类、瓜类蔬菜的开花结果习性观察 一、实验目的

（1）掌握茄果类蔬菜茎的分枝类型及其整枝的方式及开花结果的特点；（2）掌握瓜类的结果习性及分枝状况，以便在栽培上采用相应的技术措施；

（3）掌握不同类型的豆类蔬菜的茎蔓生长习性及其花器官构造，了解其开花结果习性。

二、实验材料 番茄、黄瓜、豇豆 三、实验内容

（1）由指导老师讲述番茄有限生长类型及无限生长类型的分枝特性，并进行常用的整枝法示范，由老师进行摘除腋芽的整形示范。（2）在田间对黄瓜进行分枝及花着生状况调查记录；

（3）豆类蔬菜开花结荚的习性调查，着重调查豇豆的第一花序着生节位、花数、以2～4花序着生相对的节位。

（2）对黄瓜、丝瓜、番茄等进行植株调整。 四、实验结果与分析

实验七 园林植物的整形、修剪 一、实验目的

园林植物修剪，就是按照不同植物种类的自然生长发育特性和园

林生长需要，采用人工控制其长势、调节控制植物开花结果，防治病虫害，保证园林植物枝叶茂盛、繁花似锦，提高植物的观赏性。

二、实验材料 月季、五色梅、三角梅 三、实验内容

（1）月季的修剪 月季是一年多次抽稍，多次开花的花灌木，休眠期短剪或回缩强枝，剪除交叉枝、病虫枝、并生枝、弱枝及内膛过密枝。生长期可多次修剪，可于花后新稍饱满芽处短剪（花梗下方第2芽~第3芽处），剪口芽很快萌发抽稍，形成花蕾，花谢后再剪，如此重复。

（2）三角梅的修剪 对于已开花的植株，一年可进行2次修剪，第一次结合早春换盆，从基部剪去过密枝、纤细枝、病虫枝，同时缩剪徒长枝，对保留的枝条也要进行短截。第二次在花谢后，酌情疏枝、剪去枯枝、弱枝、内堂枝，保留的枝条在30厘米处截去顶梢，同时将所有的侧枝剪短，促使多发新枝，形成更多的花芽。生长衰弱的大龄老株，可行重剪，即每个大枝仅保留基部的2-3个芽，其余全数剪去，促成植株更新复壮。

（3）五色梅耐修剪，要使其成为圆头状优美树冠，需经常进行摘心。当幼苗长到约10厘米高时即摘心，促使其从基部萌发分枝，保留3—5个枝条作为主枝，待主枝长到一定长度再行摘心，使主枝生长均衡。位于上部的主枝先摘心，位于下部的主枝后修剪，上部主枝在摘心时去枝量略多于下部主枝，这样各枝间生长匀称，便形成了圆头状株形。植株成形之后，随着枝条不断生长，以后要经常疏枝和短截。每年春季结合换盆，把过密枝、纤弱枝、交叉枝及病虫枝从基部疏剪掉。保留的枝条，根据生长情况分别留2—4个芽短裁。开花后及时剪除残花，以免消耗养分。

四、实验结果与分析

实验八 园艺植物营养液的配制与管理

一、实验目的（1）了解比例施肥泵的工作原理及使用方法；（2）掌握营养液的配制方法。

二、实验材料

硝酸钙、硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硝酸铵、尿素、硫酸钼等。

三、实验内容

(1)在营养液的许多盐类中，以硝酸钙最容易和其它盐类起化合作用，如硝酸钙与硫酸钾相遇，容易产生硫酸钙沉淀，硝酸钙与磷酸盐相遇，也容易产生磷酸钙沉淀。因此，在配制营养液时，硝酸钙要单独溶解在1个容器里，稀释后才能和其它盐类混合在一起。

(2)硝酸钙以外的其它大量元素和微量元素，可以混合溶解在1个容器中。

(3)在大面积生产中，为了配制方便，以及在水培中自动调整营养液，一般都是先配制浓液（母液），然后再进行稀释。浓液与稀释液的配比为1∶100。

(4)为了调整营养液pH值的范围，需要有一个专门盛酸的容器。酸液一般稀释10%的浓度，其成分为硝酸和磷酸。由于向营养液中投放硝酸和磷酸，营养液中的一部分氮由硝酸供给，营养液中的磷主要由磷酸供给，一般不另外再放磷肥。

(5)用来配制营养液的水有硬水与软水之分，所谓硬水与软水，一般以水中钙的含量多少来划分，目前以含钙90～100ppm以上者称为硬水，不足90ppm者称为软水。软水中除钙的含量少以外，镁及其它盐类的含量也少。正因为如此，硬水地区和软水地区的营养液配方中的各种盐类和酸的用量应有所不同。软水地区配制营养液时，应该增加硝酸钙的用量，使钙的浓度达到120ppm以上，同时软水中碳酸盐的浓度也低，酸的用量也应该相应地减少。

四、实验结果与分析

实验九 园艺植物的病虫害防治 一、实验目的

（1）掌握蔬菜常见的病虫害特征特性；（2）掌握常见病虫害的防治方法。

二、实验材料

番茄、黄瓜、生菜、豇豆 三、实验内容

（1）观察茄果类、瓜类、豆类、绿叶菜类蔬菜病害及虫害特征； （2）对茄果类、瓜类、豆类、绿叶菜类蔬菜出现的病虫害进行防治，观察用药后的变化，总结各种病虫害的防治方法。

四、实验结果与分析

实验十 蔬菜深液流栽培/ 蔬菜、花卉的立体栽培/ 管道无土栽培 一、实验目的

深液流技术(Deep Flow Technique, DFT)指植株大部分根系浸泡在液层较深(5～10㎝)的营养液中，通过营养液循环流动提高营养液溶解氧含量,满足根系呼吸需要的一种水培技术。

二、实验材料 丝瓜、番茄、生菜 三、实验内容

（1）选用丝瓜、生菜、番茄等为材料，学习和掌握蔬菜的蔬菜深液流栽培、、立体栽培、道无土栽培技术。

四、实验结果与分析 管