课程设计成绩评定表

课程设计成绩评定表

评定项目 内 容 学习认真，态度端正，遵守纪律。 认真查阅资料，勤学好问，提出的问题有一定的深度，分析解决问题的能力较强。 设计方案正确、表达清楚；设计思路、实验（论证）方法科学合理；达到课程设计任务书规定的要求；图、表、文字表达准确规范，上交及时。 回答问题准确，基本概念清楚，有理有据，有一定深度。 采用五级分制：优、良、中、及格、不及格 满分 10 评分 总分 学习态度 答疑和设计情况 40 40 说明书质量 回答问题情况 总成绩 10 指导教师评语： 签名： 日期： 食品分析检验实习报告

前言

常言道：民以食为天，食以安为先。食品是人类生命活动赖以生存的物质，食品的质量与人民健康关系也极为密切。现在食品在满足数量需求的同时，消费者对食品的质量要求也越来越高。随着全球经济的发展和国际食品贸易的日益扩大，危及人类健康、生命安全的重大食品安全事件屡屡发生。在众多的食品安全事件中，微生物污染所引起的食物中毒成了最大的元凶，可见对食品中微生物的检测控制是保障食品质量关键的一步。本次食品分析检验实习是在课程理论知识和初步试验的基础上所进行的微生物检验技术的掌握和巩固的环节，通过对具体实验的全程操作的实习，让我们更深刻的理解并掌握基本的微生物的检验方法。

1.分析检验实习的目的

分析检验实习是高等学校教学过程中的重要环节，是毕业生走向社会和上岗前提高全面素质的必经阶段，是学生深入社会，深入经济建设主战场，了解现实问题，实现理论联系实际的实践教学过程。

通过此次分析检验实习培养学生正确的设计思想，理论联系实际的工作作风，严肃认真、实事求是的科学态度和勇于探索的创新精神；培养学生综合运用所学知识，分析和解决实际问题的能力。通过课程设计实践，训练并提高学生在试验设计、查阅设计资料、运用国家标准及试验完成等方面的能力。

2.分析检验实习的目的

以日记的形式，记录当天的分析检验实习内容，包括分析检验流程、设备型号、工艺参数。要求了解产品的主要检验的项目，包括感官检验项目、理化指标、微生物指标等。

根据国家标准中对各个菌落指标的测定方法设计出本次试验对各个指标的测定方法。

按试验设计方法步骤得出各项实验结果，并对试验结果中的各项理化指标加以分析，给予合格与否的评价。

完成本次试验设计说明书，其格式遵守学校今年的新规定。主要内容包括：试验设计，过程实现，结果分析等。

3.实习要求

两人为一小组，八人为一大组，每一大组选一个组长，具体实验内容由组长及组员协商分配。每一大组要完成所有检验项目，写报告时每人都要写所有项目的实验结果。

取样时大组统一取样。

实验报告要写明取样及操作步骤，记录实验原始数据，并做数据分析和讨论（是否符合相关标准）。所有实验操作方法参照相关国标或行业标准，并把所有的标准和操作方法附在实验报告后面。实习报告的格式参照学校的要求。 用品和实验方案由各大组自己准备。老师只负责提供实验原料、原始试剂和用品，原则上老师也不提供涉及具体实验方面的帮助，全由学生自己独立操作。老师巡视时，发现明显的错误操作，将对该小组进行扣分；不交实验报告的个人，将不给予成绩。

实验时间：上午8：00-12：00，下午2：30-6：00。实验需要，晚上也可以做实验，但要注意安全。实验室每天由一名组长负责实验室的安全。

实验完成后清理所有的用品，清洗干净，交给实验室老师，登记。不清理的按未完成实验处理，给予不及格成绩。放假前交完整的报告，检验报告雷同的给予低分或不及格处理。

4.实习地点选择及时间分配

实习地点：郑州轻工业学院东四楼207 时间分配： 序号 内容 1 2 3 实习动员、分析检验教育、工艺介绍、产品检验介绍 散装牛奶分析检验 巴氏消毒奶分析检验 学时 1天 5天 5天（同步） 5天（同步） 5天（同步） 5天 2周 4 热鲜肉分析检验 5 6 冷却肉分析检验 总结编写实习报告 合 计

5.实验所需基本资料

5.1培养基的制备及注意事项

5.1.1培养基的制备

微生物实验室所用培养基可按药典规定检查方法中所列的培养基配方配置，也可使用复合型的干燥培养基，或是使用已配置且分装好的成品培养基。干燥培养基是将新鲜配置的液体培养基用不同的方法使水分去掉；或将培养基内的各种固体成分，经过适当的处理，充分混匀，使其成为干燥的粉末状。用时只需按比例加入一定量的蒸馏水，经过溶解、分装、高压蒸汽灭菌，即可应用。其优点是节省培养基配置时间，携带方便，使用简易，特别适用于一般流动性及设备简单的小型实验室。目前，国内外已有多家生产，其制造方法有下列几种：喷雾法、真空法、烘干发、蒸发法、球磨法。

培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。

琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。

5.1.2培养基制备应注意的事项

5.1.2.1、常用玻璃仪器的准备

制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，晾干后备用。

（1）平皿用纸或布包好，或装在金属盒内，于121℃高压蒸汽菌3min后烘干，备用。

（2）试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好，再用布或报纸包扎好，121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干，备用。

（3）吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽内的气体污染），然后用纸包后或装入金属吸管筒内，于121℃高压蒸汽灭菌

20min后烘干，备用。其他玻璃器皿均应按上法处理，也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后，备用。

5.1.2.2培养基的制备及储存

（1）溶化：一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内。加入蒸馏水，隔水加热以促其溶解，加热时应经常搅拌，防止焦结，待其溶解后补足水分。

在使用干燥培养基时，先将蒸馏水按定量加入容器中，然后称取一定量培养基干粉放入水中，静置10—15min，搅拌，振荡，或延长时间以促进溶解，一般不要热，必要时加热，但时间不宜过长，温度不宜过高，避免某些营养成分被破坏。

（2）校正酸碱度（调节pH）：培养基必须有适当的pH。因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一，测定pH的标准温度为25士2℃。调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液。当调节缓冲液的pH时，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液。灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低，一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右，灭菌后基本合适。因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定，并记下每次pH的测定结果，有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性，从而指导灭菌前pH的调节。干燥培养基一般已校正过pH，用时也必须再验证。测定时，一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化，或用pH计校正，如与所需pH不符，可用以上的酸或碱液加以校正。调整pH后要加热过滤，使培养基澄清。

（3）培养基的分装：大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认。每次使用前后，均要对分配器的管道系统进行冲洗，在分装无菌培养基前，则要采用无菌硅胶管。

固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中，高压灭菌后根据需要分装平皿或试管。

平皿：倾注平皿，应在无菌室中放置3—4h，如用塑料平皿须在35℃培养箱 中倒置30—60min。让水蒸汽自然蒸发。

斜面：制备低层斜面分装于试管，约占容积1/5，灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上，使成斜度，分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基，如沾有培养基应用布抹去，以避免污染。

高层斜面：制备高层斜面分装于试管，约占试管容积的1/3，灭菌后趁热放置成高层短斜面，待其凝固后应用。

分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天（2h内最佳）进行灭菌处理。液体、半固体培养基一般在高压灭前分装，约装试管容积的1/3，在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基，灭菌后再分装于灭菌试管或锥形瓶中。

培养基的灭菌：培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌，各种培养基的灭菌时间和压力，按其成分不同而定。普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌

15min，但容器和装量较大时，应延长至20min。含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min。含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，连续3d，间歇灭菌。血清或组织液，采用低热56—58水浴1h，连续5—6d灭菌，一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等，可用细菌过滤器，过滤除菌。高压灭菌应严格按照操作规程执行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的空气，再逐渐升压保持预定的压力和时间，达到全部杀灭微生物。以上的灭菌时间和温度要经过验证确认，如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好。

5.2灭菌

5.2.1.高压蒸汽灭菌法

高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。

5.2.1.1操作方法和注意事项如下：

加水 ：打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。

装料、加盖 ：灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。

排气 ：打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。

升压、保压和降压 ：当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。 灭菌后的培养基空白培养 ：灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。

5.2.2干热灭菌法

通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。

干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。

5.2.2.1灭菌前的准备

玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，也可用纸条斜着从吸管尖端包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包好的吸管集中灭菌。

5.2.2.2干燥箱灭菌 将包扎好的物品放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60～70℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。

用此法灭菌时，绝不能用油、蜡纸包扎物品。 5.2.2.3火焰灭菌

直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。

5.3革兰氏染色

原理 通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫

与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

步骤 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体

操作方法见附录2。

染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。