总糖的测定——酸水解法
1. 原理
样品经乙醚除去脂肪,乙醇除去可溶性糖类后,用酸水解淀粉为葡萄糖,按还原糖测定方法测定还原糖含量,再折算为淀粉含量。
2适用范围及特点
此法适用于淀粉含量较高,而半纤维素和多缩戊糖等其他多糖含量较少的样品。对富含半纤维素、多缩戊糖及果胶质的样品,因水解时它们被水解为木糖、阿拉伯糖等还原糖,使测定结果偏高。该法操作简单、应用广泛,但选择性和准确性不及酶法。
3.试剂
①乙醚
②85%乙醇
③6mol/L盐酸溶液
④40%氢氧化钠
⑤10%氢氧化钠
⑥0.2%甲基红乙醇溶液
⑦精密pH试纸
⑧20%中性醋酸铅溶液
⑨10%硫酸钠溶液
4.测定方法
⑴样品处理
①粮食、豆类、糕点、饼干、糕干粉、代乳粉等较干燥、易研细的样品:称取2~5克(含淀粉0.5克左右)磨碎、过40目筛的样品,置于铺有慢速滤纸的 漏斗中,用30ml乙醚分三次洗去样品中的脂肪,再用150ml85%乙醇分数次洗涤残渣以除去可溶性糖类。以100ml水把漏斗中残渣全部转移至250ml锥形瓶中。
②蔬菜、水果、粉皮、凉粉等水分较多,不易研细、分散的样品:先按1:1加水在组织捣碎机中捣成匀浆。称取5~10g(含淀粉0.5克左右)匀浆于250ml锥形瓶中,加30ml乙醚振荡提取脂肪,用滤纸过滤除去乙醚,再用30ml乙醚分二次洗涤滤纸上残渣,以除去可溶性糖类。以100ml水把残渣转移到250ml锥形瓶中。
⑵水解
于上述250ml锥形瓶中加入30ml6mol/L盐酸,装上冷凝管,置沸水浴中回流两个小时。回流完毕,立即用流动水冷却。待样品水解液冷却后,加入两滴甲基红,先用40%氢氧化钠调到黄色,再用6mol/L的盐酸调到刚好变为红色,再用10%氢氧化钠调到红色刚好褪去。若水解液颜色较深,可用精密pH试纸测试,使样品水解液的pH值约为7。然后
加入20%醋酸钠,摇匀后放置十分钟,以沉淀蛋白质、果胶等杂质。再加入20ml10%硫酸钠溶液,以除去过多的 铅。摇匀后用水转移至500ml容量瓶中,加水定容,过滤,弃去初滤液,收集滤液供测定用。
空白试验:取100ml水和30ml6mol/L盐酸于250ml的 锥形瓶中,按上述方法操作,得试剂空白液。
⑶测定
用DNS法测定。
5.结果计算
代入葡萄糖标准曲线即可得出结果。
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