ＨＥＩＬ０ＮＧＪＩＡＮＧ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＰＨＡＲＭＡＣＹ Ａｐｒ．２０１４，Ｖｏ１．３７ Ｎｏ．２ ・５５・ 茵陈蒿水提液对脑出血大鼠ＴＮＦ—ａ、ＩＬ一１ 表达的研究 李培育，和梅，左寒璐 （佳木斯大学附属第一医院，黑龙江佳未斯１５４００３） 摘要：目的：研究茵陈蒿水提液对脑出血大鼠ＴＮＦ～ａ、ＩＬ一１ｐ表达的影响。方法：选取４周龄雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠５０只，采用 自体血回注法建立脑出血大鼠模型。并留取一组大鼠作为空白对照。用Ｌｏｎｇａ评分法行为学测试判定模型的成功。造模成功 后对模型进行茵陈蒿水提波高、低浓度用药，同时选用依达拉奉作为对照药物进行治疗。用药８周后处死取材。检测脑血肿周 围组织ＩＬ－－１６、ＴＮＦ－－ａ的表达。结果：茵陈蒿水提液不同剂量组均能降低ＩＬ－－１６、ＴＮＦ－－ａ的表达。ＨＥ染色显示茵陈蒿水提 液高、低剂量组脑出血、水肿病理学改变较模型组减轻。茵陈蒿水提液高齐】量组疗效优于低荆量组。结论：①茵陈蒿水提液高 低剂量组均可通过降低ＩＬ一１ｐ、ＴＮＦ—ａ的表达，减轻模型大鼠脑出血损害。②茵陈蒿水提液高荆量组疗效优于低剂量组。 关键词：茵陈蒿ｌＩＬ一１Ｂ｝ＴＮＦ－－ａ 中图分类号：Ｒ２８５．５文献标识码：Ａ文章编号；１Ｏ０８—０１０４（２０１４）０２—００５５—０２ 茵陈蒿 幻为多年生草本艾科植物，目前对其治疗脑出 理，进行方差分析、组间差异性检验用ｇ检验。以均数士标准 血具体机制方面的研究报道很少。肿瘤坏死因子ａ Ｊ（Ｔｕ一 差（ 士ｓ）表示。 ｍｏｔ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ＴＮＦ—ａ）各种病因所致脑水肿均可观察 ２ 结果 到ＴＮＦ—ａ的过度表达。脑出血时局部脑组织释放促凝血酶 ２．１ ＩＬ一１８免疫组化结果 原激酶，激活补体的级联反应，生成Ｃ５ａ。在Ｃ５ａ存在的情况 下，巨噬细胞被激活产生ＴＮＦ—ａ。细胞因子中自细胞介素一 见表１。 １６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－－１６ ＩＬ一１６）是一种重要的炎性细胞因子，ＩＬ 表１ 各组间不同时间点ＩＬ一１ 显色指数（ 士５） 一１ Ｂ［ 可能参与了缺血性脑损伤引起的神经元的死亡，在 缺血性病理损伤中起重要的作用。其可以通过刺激内皮细胞 表达白细胞黏附分子，使白细胞聚集在缺血脑组织，加重脑 组织损害。本文旨在研究茵陈蒿水提液对脑出血模型大鼠脑 出血周围组织ＩＬ一１ｐ、ＴＮＦ—ａ的表达的影响，为茵陈蒿提 注：各组与正常组比’尸＜０．０５。’。Ｐ＜０．０１．与梗型组相比 尸＜０．０５， 取液在临床的应用提供理论基础和技术支持，让其更广泛地 与模型组相比 Ｐ＜０．０１，与低剂量组相比８‘Ｐ＜０．０５ 应用于脑出血患者。 治疗１ｄ后正常对照组比较模型组ＩＬ一１Ｂ免疫组织化学 １ 材料与方法 显色指数明显升高（Ｐ＜０．０１）；高剂量组低剂量组显色指 １．１实验动物 数与模型组相比无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。治疗３ｄ后正常 纯系Ｗｉｓｔａｒ大鼠１００只，雌性５Ｏ只，雄性５Ｏ只，２～３月龄， 对照组比较模型组ＩＬ一１ｐ免疫组织化学显色指数明显升高 体重２００￣２５０ｇ，由佳木斯大学动物实验中心提供。 （Ｐ＜０．０１），治疗高、低剂量组ＩＬ一１Ｂ显色指数明显低于模 １．Ｚ实验中药 型组（Ｐ＜０．０５），高、低剂量组之间无显色指数无差异 茵陈蒿由药店采购，经鉴定符合药典标准。ＲＴ－－ＰＣＲ试 （Ｐ＞０．０５）；治疗７ｄ后正常对照组比较模型组ＩＬ一１ｐ免疫 剂盒（大连宝生物有限公司）；ＴＮＦ—ａ免疫组化试剂盒（武汉 组织化学显色指数明显升高（Ｐ＜０．０１），治疗高、低剂量组 博士德生物工程有限公司）；ＩＬ一１Ｂ免疫组化试剂盒（武汉博 ＩＬ一１Ｂ显色指数明显低于模型组（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）， 士德生物工程有限公司）｝ＳＡＢＣ试剂盒（武汉博士德生物工 高剂量组ＩＬ一１Ｂ显色指数明显低于低剂量组（Ｐ＜０．０５）。 程有限公司）。 ２．２ ＴＮＦ—ａ免疫组化结果 １．３实验方法 见表２。 将１００只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成４组，即正常对照组、创伤 表２各组间ＴＮＦ—ａ显色指数比较（ 士ｓ，％） 模型组、低剂量组（５０ｍｇ／ｋｇ・ｄ）、高剂量组（１５０ｍｇ／ｋｇ・ｄ），参 照Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ等［８］报道的方法采用注射胶原酶Ⅵ造模。模型 成功判断按Ｂｅｄｅｒｓｏｎ［” 的评定方法分成三级，具体为：Ｉ级： 将大鼠尾巴提起瘫痪侧前肢回收屈曲于腹下，正常侧前肢向 地面伸展；Ｉ级：除Ｉ级体征外向瘫痪侧推大鼠时阻力较对 注：各组与正常组比’Ｐ＜ｏ．０５，。。Ｐ＜ｏ．Ｏｌ。与模型组相比 Ｐ＜ｏ．０５， 侧明显降低；Ｉ级；除以上体征外大鼠有向瘫痪侧旋转的行 与低剂量组相ＩＺ＆Ｐ＜ｏ．０５。 为。茵陈蒿水提液高、低剂量组于造模后立即灌胃给药。高剂 治疗１ｄ后正常对照组比较模型组ＴＮＦ—ａ免疫组织化 量组０．１ｍＬ／ｇ・ｄ，低剂量组０．０５ｍＬ／ｇ・ｄ，均每日分两次灌 学显色指数明显升高（Ｐ＜０．０１）；高剂量组、低剂量组显色 服，用药到相应时间点。ＩＣＨ对照组：造模后立即灌服等体积 指数与模型组相比无统计学意义（尸＞０．０５）。治疗３ｄ后正 生理盐水，与用药组时间相同。于造模成功后１ｄ、３ｄ、７ｄ分时 常对照组比较模型组ＴＮＦ—ａ免疫组织化学显色指数明显 间点处死，取动物出血部位脑组织进行实验检测。 升高（Ｐ＜０．０１），治疗高、低剂量组ＴＮＦ—ａ显色指数明显 １．４检测方法 低于模型组（Ｐ＜０．０５），高、低剂量组之间无显色指数无差 免疫组织化学法检测肝组织ＴＮＦ—ａ、ＩＬ一１６，按试剂 异（Ｐ＞０．０５）。 盒说明书操作。用ｐ—ａｃｔｉｎ作为内参。按照按ＰＣＲ试剂盒说 ２．３ ＲＴ—ＰＣＲ结果 明操作。 ２。３．１ 茵陈蒿水提液对大鼠血肿周围脑组织ＩＬ一１６ ｍＲ— １．５统计学处理 ＮＡ表达的结果，见表３。 采用ＳＰＳＳ １７．ｏＫ计分析软件对实验数据进行统计学处 ・５６・ 表３茵陈篙水提液对大鼠血肿周围 脑组织ＩＬ一１Ｂ ｍＲＮＡ表达的影响（ｎ＝８） 黑龙江医药科学致使神经细胞遭到损害［９，１０］。 ２０１４年４月第３７卷第２期 治疗１ｄ后脑出血模型组大鼠脑血肿周围组织ＩＬ一１Ｂ ｍＲＮＡ表达水平比正常对照组明显增多，茵陈蒿水提液高剂 量组、低剂量组大鼠脑血肿周围组织ＩＬ一１ｐ ｍＲＮＡ表达水 平较模型组无明显差异，结果无著性意义。治疗３ｄ后脑出血 模型组大鼠脑血肿周围组织ＩＬ一１／３ ｍＲＮＡ表达水平比正常 对照组明显增多，茵陈蓠水提液高剂量组、低剂量组大鼠脑 血肿周围组织ＩＬ一１／３ ｍＲＮＡ表达水平较模型组下调，差异 有极显著性意义（Ｐ＜０．０５）。提示茵陈蒿水提液高、低剂量 在治疗３ｄ后可降低大鼠脑血肿周围组织ＩＬ一１６ ｍＲＮＡ表 达。治疗７ｄ后茵陈蒿水提液高剂量组、低剂量组大鼠脑血肿 周围组织ＩＬ—ｌｐ ｕＲＮＡ表达水平较模型组下调，差异有极 ｔ显著性意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。提示茵陈蒿水提液高、 低剂量在治疗７ｄ后可降低大鼠脑血肿周围组织ＩＬ一１６ ｍＲ— ＮＡ表达。 ＴＮＦ—ｆｔ是一种炎症前体细胞因子，在炎症反应中起着 重要作用［】 。它可以促进ＩＬ一１分泌，还能促进白细胞分泌， 同时参与炎症损伤的过程，ＴＮＦ—ａ、ＩＬ—ｌ８也可诱导趋化因 子（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ）表达“趋化因子可直接或间接诱导另一些细 胞的活动，为炎症细胞直接进入损伤组织提供化学梯度”，加 重炎症反应，破坏脑组织。 在本实验中，造模后１ｄ模型组大鼠脑血肿周围组织的 ＴＮＦ—ａ、ＩＬ一１Ｂ免疫组化显色指数均较正常对照组明显上 调（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．Ｏ１）；模型组大鼠脑血肿周围组织 ＴＮＦ—ｎ、ＩＬ一１６的ｍＲＮＡ表达也均较正常组上调 （Ｐ＜０．０５或尸＜０．０１）。 ２．３．２茵陈蒿水提液对大鼠血肿周围脑组织ＴＮＦ—ａ ｍＲ— ＮＡ表达的结果，见表４。 表４茵陈蒿水提液对大鼠血肿周围 脑组织ＴＮＦ—ａ ｍＲＮＡ表达的影响（ｎ＝８） 从以上结果表明，茵陈蒿水提液可以对脑出血的大鼠有 定的治疗作用，其可能的的机制为抑制ＩＬ—ｌＢ、ＴＮＦ—ａ 的表达，从而减轻炎症反应，减小对脑组织的伤害来实现，在 治疗的３ｄ后高剂量组和低剂量组ＩＬ一１Ｂ、ＴＮＦ—ａ ｍＲＮＡ 及蛋白表达无明显差异性（Ｐ＞０．０５）。随着治疗时间的延 长发现，治疗７ｄ后高剂量组ＩＬ一１ 、ＴＮＦ—ａ ｍＲＮＡ及蛋白 表达较模型、正常组、低剂量组明显增高。因此可以说明随着 治疗时间的延长，茵陈蒿水提液高剂量的治疗效果较低剂量 效果要好。 一参考文献： ［１］中华人民共和国药典２０００年版一部．北京：化学工业出版社， ２０００。ｌ９２ ［２］阴健．中药现代研究与临床应用［Ｍ］．北京ｔ学苑出版社，１９９５， ４８４ ［３］Ｋｉｍ ＪＳ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｓｔｒｏｋｅ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｓ— ｅａｓｅｓＥＪ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ，１９９６，１３７（２）：６９—７８ ［４］Ｆｒｉｊｎｓ ＣＪ，Ｋａｐｐｌｌｅ ＬＪ．Ｖａｎ Ｇｉｊｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｓｏｌｕｂｌｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｃｕｌｅｅ Ｒｅｆｆｅｃｔ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ａｅｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｉｓｅｈｅｍｉｅ ｓｔｒｏｋｅ ａｎｄ ｉｎ ｃａｒｏｔｉｄ 注：各组与正常组比 Ｐ＜０．０５， 与模型组相比 ＜０．０１。与模型组相比 Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０．０１，与低剂量组相比＆Ｐ＜０．０５。 ａｔｈｅｒｏｓｅｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ，１９９７，２８（２）：２２１４－２２１８ ［５］Ｋｉｍｅｌｂｅｒｇ ＨＫ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｏｆ ｂｒａｉｎｅｄ ｅｍａ．Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｌａｂｏｒａ— ｔｏｒｙ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｇｒ，２０１１，８３（６）：１０５１－１０５９ ［６］Ｒｏｓｅｎｇａｒ ＴＫ。ＬｅｅＬＰａｔｅｌ ＳＲ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ：ｐｈａｓｅ Ｉ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉｒｅｃｔ ｉｎｔｒａｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ 治疗１ｄ后脑出血模型组大鼠脑血肿周围组织ＴＮＦ—ａ ｍＲＮＡ表达水平比正常对照组明显增多，茵陈蒿水提液高剂 量组、低剂量组大鼠脑血肿周围组织ＴＮＦ—ａ ｍＲＮＡ表达 水平较模型组无明显差异，结果无著性意义。治疗３ｄ后茵陈 蒿水提液高剂量组、低剂量组大鼠脑血肿周围组织ＴＮＦ—ａ ｍＲＮＡ表达水平较模型组下调，结果有著性意义 （Ｐ＜０．０５）。高剂量组与低剂量组ＴＮＦ—ａ ｍＲＮＡ表达无 显著意义。治疗７ｄ后茵陈蒿水提液高剂量组、低剂量组大鼠 脑血肿周围组织ＴＮＦ ａｍＲＮＡ表达水平较模型组下词，差 异有极显著性意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。提示茵陈蒿水 提液高、低剂量在治疗７ｄ后可降低大鼠脑血肿周围组织ＩＬ １ｐ ｍＲＮＡ表达。茵陈蒿水提液高剂量组ＩＬ一１Ｂ ｍＲＮＡ表 达较低剂量下调，差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）。 一ｖｅｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＶＥＧＦ １２１ ｃＤＮＡ ｔｏ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｓｅｖｅｒｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１９９９，１００ ｌ ４６８— ４７４ ［７］Ｗａｎｇ Ｒｑ，Ｚｈｕ ＸＺ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｃａ－ ｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｍｉｃｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ ａｆｔｅｒ ｐｅｒｍａｎｅｎｔ ｆｏｃａｌ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａｌ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｅｏｌ Ｓｉｎ，２００２，２３（５１）ｌ４０５－４１１ ［８３ Ｄｄａｒｄ——Ｆｉｎｅｇｌｏｄ．Ｍｏｄｅｒａｔｅ Ｈｙｐｅｒｌｇｃｅｒｎｉａ ｗｏｒｓｅｎｅ ＡｃｕｔｅＢｌｏｏｄ Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ａｆｔｅｒ ｆｏｒｅｂｒａｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｉｎ ｒａｔｓＥＪ］．Ｒｅｓ，１９８４， １８（１）：７ ［９］Ｂａｒｏｎｅ ＦＣ，Ｆｅｕｅｒｓｔｅｉｎ ＧＺ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ａｎｄ ｓｔｒｏｋｅ： ｎｅｗ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ，１９９９，１９ｔ８１９－８３４ ３讨论 ［１０］Ｂｅｓｔｕｅ－－Ｃａｒｄｉｅｌ Ｍ，Ｍａｒｔｉｎ—Ｍａｒｔｉｎｅｚ Ｊ，Ｉｔｕ ｒｒｉａｇａ—Ｈｅｒａｓ Ｃ，ｅｔ 在脑出血中，炎症反应是其中的重要环节，在引起脑血 肿占位效应的同时还可以继发破坏周围组织。引起一系列反 应进而加重组织损害。ＩＬ一１Ｂ炎症反应中的关键因子，它是 由脑实质内的炎症细胞激活脑神经小胶质细胞分泌的一种 细胞因子，它可以激活过释放脂源性介质促进脂质过氧化反 应，进而产生氧自由基，用来破坏神经元的细胞膜加重脑组 织坏死，同时ＩＬ一１ 能释放大量毒性产物和破坏性蛋白酶， 基金项目：黑龙江省卫生厅研究项目，编号：２Ｏ１２—２１９。 ａ１．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｐｒｉｍａｒｙ ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ［Ｊ］．Ｒｅｖ Ｎｅｕ— ｒｏｌ，１９９９，２９ｌ ９６８—９７１ ｉｌ１］Ｇｏｎｇ Ｃ，Ｈｏｆｆ ＪＴ．Ｋｅｅｐ ＲＦ．Ａｃｕｔｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｆｏｌｌｏｗ— ｉｎｇ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｎｔｒａｃｅｒｅｈｒａ［ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ ｉｎ ｒａｔ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ， ２０００，８７１：５７—６５ （收稿日期：２Ｏ１４一Ｏ２—２０） 作者简介：李培育（１９８０￣）男，黑龙江佳木斯人，在读硕士研究生，主治医师。 通讯作者：左寒璐（１９８２～）女，黑龙江佳木斯人，在读硕士研究生。Ｅ—ｍａｉＩ；ｌａｏｂｉａｎ１９７８＠１６３．ｔｏｍ。