培养基适用性 SOP

文件名称 文件编码 SOP-QC-1015-03 颁发部门 GMP办公室 修 订 审 核 QA 年 月 日 年 月 日 批 准 培养基适用性检查标准操作规程 页数 共 页 年 月 日 年 月 日 生效日期 年 月 日 分发部门 质管部 起草说明 新增文件，直接升级为03版。

目 的 制定培养基适用性检查标准操作规程。

范 围 本规程适用于微生物培养基适用性测定。 责 任 人 文件起草、审核、签批、使用、归档、保管人员。 执行标准 《中国药典》2010版一部附录ⅩⅢ 培训对象 检验人员、QC主管 内 容

1. 计数培养基的适用性检查 1.1 适用范围

细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性，成品培养基、由脱水培养基或按处方配置的培养基均应检查。 1.2 菌种

试验用菌株的传代数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征。

菌种 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉

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编号 CMCC(B)44102 CMCC(B)26003 CMCC(B)63501 CMCC(F)98001 CMCC(F)98003

1.3 菌液的制备 试验菌株 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 培养物的制备 分别接种新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养上。 接种新鲜培养物白色念珠菌 至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基上。 加入3~5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的接种新鲜培养物黑曲霉 至改良马丁琼脂斜面培养基上。 80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。23~28℃5~7然后，采用滴管吸出孢子菌液至无菌试管天 内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2~8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存期内使用

1.4 适用性检查 被检培养基 试验菌株 大肠埃希菌 制备过程 分别取各试验菌悬液1ml(50~100cfu),分别注入无菌平皿中，立即注入营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个皿，营养琼脂培养基 金黄色葡萄球菌 混匀，凝固。 同时，用对照培养基（营养琼脂培养基）枯草芽孢杆菌 代替被检培养基进行上述试验。 30~35℃ 48小时 培养 23~28℃24~48小时 30~35℃18~24小时 分别取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。 培养 菌悬液的制备 第 2 页 共 7 页

分别取各试验菌悬液1ml(50~100cfu)，分白色念珠菌 玫瑰红钠琼脂培养基 黑曲霉 别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固。 同时，用对照培养基（玫瑰红钠琼脂培养基）代替被检培养基进行上述试验。 取试验菌悬液1ml(50~100cfu)，分别注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2白色念珠菌 个平皿，混匀，凝固。 同时，用对照培养基（酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基）代替被检培养基进行上述试验。

1.5 结果判定

若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。

2 控制菌检查用培养基的适用性检查

2.1 适用范围

控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。 2.2 菌种

试验用菌株的传代数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征。

菌种 第 3 页 共 7 页

编号 23~28℃ 72小时 23~28℃ 72小时

大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单胞菌 生孢梭菌 白色念珠菌

2.3 菌液制备 试验菌株 大肠埃希菌 分别接种新鲜培金黄色葡萄球菌 养物至营养肉汤30~35℃18~24小时 培养物的制备 培养 CMCC(B)44102 CMCC(B)26003 CMCC(B)50094 CMCC(B)10104 CMCC(B)64941 CMCC(F)98001 菌悬液的制备 分别取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成含菌数为50~100cfu/ml的菌悬液。 乙型副伤寒沙门菌 培养基中或营养琼脂培养上。 铜绿假单胞菌 接种新鲜培养物生孢梭菌 至硫乙醇酸盐流体培养基中。 接种新鲜培养物白色念珠菌 至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基上。 23~28℃18~24小时 取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成含菌数为50~100cfu/ml的菌悬液。 取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成含菌数为50~100cfu/ml的菌悬液。 23~28℃24~48小时 菌液制备在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2~8℃，可在24小时内使用。

2.4 适用性检查

控制菌检查用培养基的适用性检查项包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。各培养基的检测项目及所用菌株表1。

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表1 控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力检查

控制菌检查 培养基 特性 促生长能力 胆盐乳糖培养基 抑制能力 大肠埃希菌 4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基 曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基 促生长能力+指示能力 促生长能力+指示能力 促生长能力 乳糖胆盐发酵培养基 抑制能力 大肠菌群 乳糖发酵培养基 曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基 营养肉汤培养基 促生长能力+指示能力 促生长能力+指示能力 促生长能力 促生长能力 四硫磺酸钠亮绿培养基 抑制能力 沙门菌 胆盐流乳琼脂培养基或沙门、志贺菌属琼脂培养基 曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基 三糖铁琼脂培养基 促生长能力+指示能力 促生长能力+指示能力 指示能力 促生长能力 胆盐乳糖培养基 抑制能力 铜绿假单胞菌 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基 抑制能力 绿脓菌素测定用培养基 促生长能力+指示能力 促生长能力 亚碲酸盐肉汤培养基 抑制能力 金黄色葡萄球菌 促生长能力+指示能力 卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基 抑制能力 梭菌增菌培养基 梭菌 哥伦比亚琼脂培养基 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖液体培养基 白色念珠菌 念珠菌显色培养基 抑制能力 1%聚山梨酯80—玉米琼脂培养基 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌 白色念珠菌 促生长能力 促生长能力 促生长能力+指示能力 促生长能力+指示能力 生孢梭菌 白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 促生长能力 大肠埃希菌 生孢梭菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 促生长能力 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡糖球菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 金黄色葡糖球菌 试验菌株 大肠埃希菌 第 5 页 共 7 页

2.5 液体培养基促生长能力检查

分别接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度（30~35℃）及最短培养时间下培养。增菌培养基多为澄清液体培养基，与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生产良好，表现为液体培养基变浑浊。 2.6 固体培养基促生长能力检查

取试验菌液各0.1ml（含菌数50~100cfu）分别涂布与被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度（30~35℃）及最短培养时间下培养。被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小，形态特征应一致。

2.7 培养基抑制能力检查

接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基平板上，取试验菌0.1ml菌悬液（不大于100cfu）分别涂布于固体被检培养基和对照培养基，在相应的控制菌检查规定的培养温度（30~35℃）及最长时间下培养，试验菌应不得生长。

2.8 固体培养基指示能力检查

取试验菌各0.1ml（含菌数50~100cfu）（表1）分别涂布与被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度（30~35℃）及时间下培养。被检培养基上试验菌生长的菌落大小，形态特征、指示反应情况等应与对照培养基一致。

2.9 液体培养基指示能力检查

分别接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度（30~35℃）及最短培养时间下培养。对培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应对照培养基一致。 2.10 控制菌检查用培养基能力测试列表（表2）

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表2 控制菌检查用培养基适用性检查项目、菌株及判断指标

培养基 测试菌株 大肠埃希菌 胆盐乳糖培养基 铜绿假单胞菌 金黄色葡糖球菌 MUG培养基 大肠埃希菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂 乙型副伤寒沙门菌 大肠埃希菌 乙型副伤寒沙门菌 乳糖胆盐发酵管 大肠埃希菌 金黄色葡糖球菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡糖球菌 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡糖球菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡糖球菌 大肠埃希菌 金黄色葡糖球菌 金黄色葡糖球菌 大肠埃希菌 生孢梭菌 生孢梭菌 白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 大肠埃希菌 白色念珠菌 白色念珠菌 测试特性 促生长能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 测试指标 浑浊 浑浊 未见浑浊 浑浊 366nm有荧光 回收率 回收率 颜色形态同对照 颜色形态同对照 浑浊产气 未见浑浊 浑浊 产气 浑浊 浑浊 上清浑浊 上清未见浑浊 回收率 颜色形态同对照 回收率 不得生长 回收率 颜色形态同对照 浑浊 未见浑浊 回收率 颜色形态同对照 不得生长 浑浊 回收率 浑浊 回收率 颜色形态同对照 回收率 颜色形态同对照 不得生长 回收率 颜色形态同对照 指示能力 促生长能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 抑制能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 指示能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 乳糖发酵培养基 营养肉汤 四硫磺酸钠亮绿培养基 胆盐流乳琼脂或沙门、志贺菌属琼脂 溴化十六烷基三甲铵琼脂 绿脓菌素测定用培养基 亚碲酸盐肉汤培养基 卵黄氯化钠琼脂或 甘露醇氯化钠琼脂 梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基 1%聚山梨酯80—玉米琼脂培养物

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