PCR产物加A试剂盒(dA

PCR产物加A试剂盒（dA Tailing Kit ） 货号：M020018

产品及特点：本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP存在的

情况下，在平末端的DNA片段加上一个dA尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。

1. 简单, 2X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。

2. 适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。 3. 产物可以直接用于与T载体的连接。

规格及成分

成份 2 X Tailing Buffer Taq DNA olymerase(5U/uL)

使用手册

50 次包装 1.25 mL 50 uL 1份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。 使用方法

一：反应前纯化处理：用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯仿抽提或Proteinase K处理），否则它们将在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1 ug/uL为宜。

二：加A反应：在干净的0.5 mL或1.5 mL离心管中，分别加入下列成分：

1. 回收的DNA片段(0.2-2 ug) 2. 25 uL 2 X dA Tailing Buffer 3. 1 uL Taq DNA polymerase（5 U/uL） 补水到50 uL; 72℃保温2小时

三：反应后处理：加A反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于T载体的连接反应。

疑难解答

Q：Taq DNA polymerase加尾有特异性吗？

A：在有四种核苷酸存在的反应体系中，Taq DNA polymerase加尾特异性跟DNA的3’末端的核苷酸有关。如果要加T，要加尾的DNA片段最好末位为T。如果要加A，要加尾的DNA片段最好末位为C。其关系具体见下表(--DNA & Cell Biol. 12:763, 1993)：

3’末端核苷酸

A

A,但效率极低

A>C G>A>C T>A 加尾核苷酸

C G T

注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途