(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 110713508 A(43)申请公布日 2020.01.21
(21)申请号 201810769406.4(22)申请日 2018.07.13
(71)申请人 重庆市畜牧科学院
地址 402460 重庆市荣昌区昌龙大道51号(72)发明人 王琪 王敬 齐仁立 黄金秀
邱小宇 孙倩 (74)专利代理机构 重庆弘旭专利代理有限责任
公司 50209
代理人 石欢欢(51)Int.Cl.
C07H 17/07(2006.01)C07H 1/08(2006.01)
权利要求书1页 说明书5页 附图1页
(54)发明名称
从柑橘渣中提取柚皮苷的方法(57)摘要
本发明属于糖衍生物的分离、纯化工艺技术领域，具体涉及一种从柑橘渣中提取柚皮苷的方
粉碎过筛，然后于超声波功法，其将柑橘渣烘干、
率为350-500W、温度为65-80℃条件下提取，再对提取得到的柚皮苷进行纯化。本发明的方法柚皮苷的得率高。
CN 110713508 ACN 110713508 A
权 利 要 求 书
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1.从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，其特征在于，将柑橘渣烘干、粉碎过筛，然后于超声波功率为350-500W、温度为65-80℃条件下提取，再对提取得到的柚皮苷进行纯化。
2.根据权利要求1所述的从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，其特征在于，提取所用溶剂为体积分数为65％-75％的乙醇溶液。
3.根据权利要求1或2所述的从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，其特征在于，提取所用溶剂的用量为柑橘渣粉质量的45-60倍。
4.根据权利要求1、2或3所述的从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，其特征在于，提取时间为60-90min。
5.根据权利要求1、2、3或4所述的从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，其特征在于，所述纯化具体是指用HPD600树脂对提取得到的柚皮苷进行纯化。
6.根据权利要求1、2、3、4或5所述的从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，其特征在于，所述纯化过程中柚皮苷的上样流速为0.5-0.75BV/h。
7.根据权利要求1、2、3、4、5或6所述的从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，其特征在于，所述纯化过程中洗脱剂为浓度为0.05-0.1mol/L的NaOH溶液。
8.根据权利要求1、2、3、4、5、6或7所述的从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，其特征在于，所述纯化过程中样品溶液的pH为6-8。
9.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，其特征在于，所述纯化过程中吸附时间为4-5h。
10.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8或9所述的从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，其特征在于，所述纯化过程中样品溶液的上样浓度为0.9-1.2mg/mL。
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说 明 书
从柑橘渣中提取柚皮苷的方法
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技术领域
[0001]本发明属于糖衍生物的分离、纯化工艺技术领域，具体涉及一种从柑橘渣中提取柚皮苷的方法。
背景技术
[0002]柑橘是世界第一大水果，年产量超过一亿吨，其中40%用于加工（“试论我国柑橘加工业发展方向”，吴厚玖等，食品与发酵工业，2006年第32卷第4期，第85-89页，公开日2006年12月31日）。我国是柑橘生产大国，2010年柑橘产率达2645.24万吨，其中约150万吨用于加工柑橘罐头，约30万吨用于加工橙汁（“我国柑橘产销现状、问题及对策”，沈兆敏，果农之友，2012年第3期，第3-4页，公开日2012年12月31日）。柑橘渣是柑橘果实加工制汁或制罐后的下脚料，主要有皮、种子、橘络和残余果肉等，约占果实的40%-50%（“柑橘渣的综合利用”，王文娟等，中国饲料，2004年第14期，第30-33页，公开日2014年12月31日）。目前，全国每年产生的柑橘渣多达500万吨（“柑橘渣在动物饲料中的应用研究进展”，吴剑波等，中国畜牧杂志，2016年52卷第13期，第95-99页，公开日2016年12月31日）。但长期以来，研究的缺乏及技术的落后使其大部分弃而不用，大部分柑橘渣通过填埋或排入江河等方式处理，造成资源浪费及环境污染。[0003]柚皮苷全称为柚皮素-7-O-新橙皮糖苷（其结构式如下图所示），分子式为C27H32O14，是
一种二氢黄酮类化合物，为柚皮素和芸香糖结合而成的糖苷。柚皮苷来源丰富，广泛存在于葡萄柚、橙、橘等芸香科植物的果皮和果肉中。大量研究表明，柚皮苷有广泛的生产活性，具有促进胃肠蠕动、解痉挛、抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗动脉粥样硬化、降血脂、镇静、镇痛、调节血糖等药理作用（“柚皮苷的药物代谢动力学研究概况与进展”，朱宏平等，中国临床药理学与治疗学，2013年18卷第11期，第1297-1303页，公开日2013年11月30日），可广泛用于医学、食品和化学等领域。[0004]目前，柚皮苷提取相关研究主要是从柚皮中进行提取，而对于从柑橘渣中提取柚皮苷工艺尚未有相关报道。柚皮苷的提取方法主要有溶剂萃取法、碱提酸沉法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法等。其中，溶剂萃取法可使柚皮苷得到有效提取和分离，对柚皮的其他活性成分无破坏作用，其残渣还可用于果胶家或维生素等生理活性成分的制备，或直接作为人类膳食纤维的来源应用于食品加工，且操作方便和成本低廉（“柚皮苷的提取方法及其应用研究进展”，于宏伟等，湖北农业科学，2011年第50卷第8期，第1516-1518页，公开
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说 明 书
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日2011年04月30日）。超声波提取法具有提取时间短，产率高等优点。目前，从柚皮中提取柚皮苷的方法中溶解萃取法和超声波提取法较为成熟，但柚皮和柑橘渣是完全不同的物质，二者柚皮苷含量差异较大。据报道，柑橘渣中柚皮苷含量仅为柚皮中柚皮苷含量的约九分之一。而普通柚皮中柚皮苷含量在1%左右（干重）（“不同产地不同品种柚皮中总黄酮和柚皮苷的含量比较”，庞瑞等，药学与临床研究，2007年第15卷第3期，第205-207页，公开日2007年12月31日）。显然，柑橘渣中柚皮苷含量较低，若采用与柚皮同样的方法从柑橘渣提取柚皮苷，则有大部分柚皮苷不能提取出来。发明内容
[0005]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，该方法能够将柑橘渣中大部分柚皮苷提取出来。[0006]此外，发明人还发现，现有工艺从柚皮中提取柚皮苷的得率较低。[0007]为实现上述目的，本发明的技术方案为：
从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，将新鲜柑橘渣烘干、粉碎过筛，然后于超声波功率为350-500W、温度为65-80℃条件下提取，再对提取得到的柚皮苷进行纯化。[0008]发明人意外发现，该方法显著提高了柚皮苷的得率。[0009]所述烘干是指于50℃温度下烘干24h。[0010]所述过筛是指过40目筛网。[0011]进一步，提取所用溶剂为体积分数为65%-75%的乙醇溶液。[0012]进一步，提取所用溶剂的用量为柑橘渣粉质量的45-60倍。[0013]进一步，提取时间为60-90min。[0014]进一步，所述纯化具体是指用HPD600大孔吸附树脂对提取得到的柚皮苷进行纯化。
[0015]进一步，所述纯化过程中柚皮苷的上样流速为0.5-0.75BV/h。[0016]进一步，所述纯化过程中柚皮苷的上样流速为0.5BV/h。[0017]进一步，所述纯化过程中洗脱剂为浓度为0.05-0.1mol/L的NaOH溶液。[0018]进一步，所述纯化过程中洗脱剂为浓度为0.05mol/L的NaOH溶液。[0019]进一步，所述纯化过程中样品溶液的pH为6-8。[0020]进一步，所述纯化过程中样品溶液的pH为6。[0021]进一步，所述纯化过程中吸附时间为4-5h。[0022]进一步，所述纯化过程中吸附时间为4h。[0023]进一步，所述纯化过程中样品溶液的上样浓度为0.9-1.2mg/mL。[0024]进一步，所述纯化过程中样品溶液的上样浓度为1.2mg/mL。[0025]进一步，将新鲜柑橘渣烘干、粉碎过40筛，然后置于超声波仪中，用柑橘渣粉质量的60倍的体积分数为65%的乙醇溶液于超声波功率为500W、温度为80℃条件下提取90min，然后用HPD600树脂对提取得到的柚皮苷于上样浓度为1.2mg/mL、样品溶液pH为6、上样流速为0.5BV/h、以浓度为0.05-1mol/L的NaOH溶液为洗脱剂、吸附时间为4h条件下进行纯化。[0026]本发明的有益效果在于：
本发明的方法能够将柑橘渣中大部分柚皮苷提取出来。
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说 明 书
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采用本发明的方法提取柚皮苷，柚皮苷的得率高。本发明的方法工艺简单，成本低，重复性好，便于操作，易于实现工业化生产。
附图说明
[0029]图1为实施例4得到的柚皮苷波长扫描图；
图2为实施例4绘制得到的柚皮苷标准曲线。
具体实施方式
[0030]所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。[0031]实施例1
从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，具体步骤为：A.将新鲜柑橘渣置于50℃烘箱中烘干24h，用粉碎机粉碎后过40目筛，然后置于超声波仪中，用柑橘渣粉质量的60倍的体积分数为65%的乙醇溶液于超声波功率为500W、温度为80℃条件下提取90min；
B.树脂预处理：用体积分数为95%的乙醇溶液浸泡HPD600大孔吸附树脂24h。采用湿法装柱，用乙醇洗至流出液不呈白色浑浊现象，用蒸馏水洗去乙醇；用质量分数为2%的NaOH溶液以2BV/h的流速通过树脂柱，蒸馏水洗至中性。再用质量分数为5%的盐酸溶液以2BV/h的流速通过树脂柱，最后用蒸馏水洗至中性。[0032]C.纯化：用HPD600树脂对提取得到的50ml柚皮苷溶液于上样浓度为1.2mg/mL、pH为6、流速为0.5BV/h，吸附时间为4h条件下通过纯化柱，以浓度为0.05mol/L的NaOH溶液进行洗脱，得到约15mL柚皮苷提取液。[0033]实施例2
从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，具体步骤为：A.将新鲜柑橘渣置于50℃烘箱中烘干24h，用粉碎机粉碎后过40目筛，然后置于超声波仪中，用柑橘渣粉质量的45倍的体积分数为70%的乙醇溶液于超声波功率为400W、温度为65℃条件下提取60min；
B.树脂预处理：用体积分数为95%的乙醇溶液浸泡HPD600大孔吸附树脂24h。采用湿法装柱，用乙醇洗至流出液不呈白色浑浊现象，用蒸馏水洗去乙醇；用质量分数为2%的NaOH溶液以2BV/h的流速通过树脂柱，蒸馏水洗至中性。再用质量分数为5%的盐酸溶液以2BV/h的流速通过树脂柱，最后用蒸馏水洗至中性。[0034]C.纯化：用HPD600树脂对提取得到的50ml柚皮苷溶液于上样浓度为1.05mg/mL、pH为8、流速为0.75BV/h，吸附时间为5h条件下通过纯化柱，以浓度为0.1mol/L的NaOH溶液进行洗脱，得到约15mL柚皮苷提取液。[0035]实施例3
从柑橘渣中提取柚皮苷的方法，具体步骤为：A.将新鲜柑橘渣置于50℃烘箱中烘干24h，用粉碎机粉碎后过40目筛，然后置于超声波仪中，用柑橘渣粉质量的50倍的体积分数为75%的乙醇溶液于超声波功率为350W、温度为75
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℃条件下提取90min；
B.树脂预处理：用体积分数为95%的乙醇溶液浸泡HPD600大孔吸附树脂24h。采用湿法装柱，用乙醇洗至流出液不呈白色浑浊现象，用蒸馏水洗去乙醇；用质量分数为2%的NaOH溶液以2BV/h的流速通过树脂柱，蒸馏水洗至中性。再用质量分数为5%的盐酸溶液以2BV/h的流速通过树脂柱，最后用蒸馏水洗至中性。[0036]C.纯化：用HPD600树脂对提取得到的50ml柚皮苷溶液于上样浓度为0.9 mg/mL、pH为7、流速为0.6BV/h，吸附时间为4.5h条件下通过纯化柱，以浓度为0.08mol/L的NaOH溶液进行洗脱，得到约15mL柚皮苷提取液。[0037]实施例4
柚皮苷标准曲线的建立，具体步骤为：准确称取80mg柚皮苷标准品，无水乙醇定容至500ml容量瓶中，得0.16mg/ml柚皮苷标准溶液。分别吸取 0、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8ml 上述溶液于10ml比色管中，依次加入无水乙醇 5ml 和0.1ml NaOH溶液（4mol/L），然后加蒸馏水补充至刻度线，充分摇匀后于40℃恒温水浴锅中水浴10min，迅速冷却后用紫外可见分光光度计在200-500 nm范围内对柚皮苷标准溶液进行吸收波长扫描，以出现最大峰的波长定为柚皮苷的检测波长（图1），得到柚皮苷波长扫描图，其结果如图1所示。[0038]由图1可知，在420nm处出现较强而宽的吸收峰。因此，以420nm为检测波长，在420nm波长处测定不同浓度柚皮苷溶液的吸光度，然后以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标来绘制柚皮苷标准曲线，得到的柚皮苷标准曲线如图2所示。[0039]实施例5
用移液管分别移取2mL实施例1、实施例2和实施例3得到的柚皮苷提取液至10mL比色管中，加入5mL无水乙醇和0.1mL浓度为160mg/mL的NaOH溶液，然后用蒸馏水加至10mL，充分摇匀后于40℃恒温水浴锅中水浴10min，迅速冷却后于420nm处测定各自吸光度，各组设3个平行，取平均值；根据实施例4得到的标准曲线的回归方程y=33.399x-0.0023（浓度为横坐标，吸光度为纵坐标）计算待测液中柚皮苷的浓度，其结果如表1所示。[0040]表1 浓度测试结果组别浓度(mg/ml)实施例12.21实施例21.87实施例31.64
性能测试
根据表1中实施例1-3得到的柚皮苷提取液中柚皮苷的浓度分别计算实施例1-3得到的柚皮苷提取液中柚皮苷的质量（），然后按照公式计算柚皮苷的得率：柚皮苷得率（%）=柚皮苷提取液中柚皮苷的质量÷柑橘渣干样中柚皮苷含量×100%；实施例1-3得到的柑橘渣中柚皮苷含量采用Davis（1947）方法进行测定；结果如表2所示。[0041]表2性能测试结果组别柚皮苷得率/%实施例194.76
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实施例280.01实施例370.45
由表2可知，实施例1-3的柚皮苷的得率为80.01%-94.76%，尤其是实施例1，柚皮苷的得率高达94.76%。由此证明，采用本发明的方法提取柚皮苷，能够显著提高柚皮苷的得率。[0042]此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
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说 明 书 附 图
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