９２ 结核病与胸部肿瘤２０１２年第２期Ｔｕｂｅｒ＆Ｔｈｏｒ Ｔｕｍｏｒ，Ｊｕｎｅ ２０１２，Ｎｏ．２ 结核分枝杆菌ＲＤＩ区编码蛋白ＥＬＩＳＰＯＴ 辅助诊断活动性结核病的应用价值 杜凤娇【摘要】 目的傅瑜吴雪琼李亮 高静韬张宗德 比较Ｅ／ｃ联合Ｒｖ３８７９ｃ蛋白作为抗原的ＥＬＩＳＰＯＴ和Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ试剂盒，探讨其在活动性结核病诊断中的应用价值。 Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ和ＥＬＩＳＰＯＴ在结核病组中的敏感 方法 选取初治结核病患者１０６例作为结核组，４３例肺部其它疾病患者做为疾病对照组和４８例健康者做为健康对照组，应用Ｔ ＳＰＯＴ．ＴＢ 和ＥＬＩＳＰＯＴ检测受试者外周血单个核细胞的斑点形成细胞数量，同时对受试者行ＴＳＴ。结果度分别为９２．５ 和９３．４％。ＴＳＴ阴性对照组中的特异度均为９１．５％，在健康者中的阳性率分别为１８－８％和１６．７％，且两种方法差异无统计学 意义（均Ｐ＞Ｏ．０５）。结论Ｅ，Ｃ联合Ｒｖ３８７９ｃ蛋白作为抗原的ＥＬＩＳＰＯＴ能够诊断活动性结核病，并为结核感染诊断提供一定的依据。 【关键词】 结核分枝杆菌；酶联免疫斑点技术；辅助诊断 Ｔｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ ｂｙ ＲＤＩ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｅｎｃｏｄｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｃｔｉｖｅ Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｄｕ Ｆｅｎｇｊｉａｏ，Ｆｕ Ｙｕ，Ｗｕ Ｘｕｅｑｉｏｎｇ．Ｌｉ Ｌｉａｎｇ，Ｇａｏ Ｊｉｎｇｔａｏ，Ｚｈａｎｇ Ｚｏｎｇｄｅ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｔｕｍｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０１ １４９，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｍｐ￣ｅ Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＰＯＴ）ｕｓｉｎｇ ＥＳＡＴ一６／ＣＦＰ一１０ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎａｓ （Ｅ／Ｃ）ａｎｄ Ｒｖ３８７９ｃ ａｓ ａｎｔｉｇｅｎｓ，ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｕｘｉｌｉａｒｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｏｔａｌｌｙ １０６ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｉｎｉｔｉａｌ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ ４８ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｒｓｏｎ（ｈｅａｌｔｈｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ ４３ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ—ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ （ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ）ｗｅｒｅ ｅｎｒｏｌｌｅｄ．Ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ａｌｌ ｐａｒｔｉｃｉｐａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＰＯＴ ａｎｄ Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ，Ｔｈｅｎ ｅｎｕｍｅｒａｔｅｄｔｈｅ ｓｐｏｔｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ（ＳＦＣｓ）．Ａｌｌ ｐａｒｔｉｃｉｐａｎｔｓｗｅｒｅ ａｌｓｏｐｅｒｆｏｒｍｅｄＴＳＴ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆＥＬＩＳＰＯＴａｎｄＴ－ＳＰＯＴ． ＴＢ ｗｅｒｅ ９０．６％ａｎｄ ９３．４ ｉｎ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｗｅｒｅ ９１．５％ｉｎ ＴＳＴ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗｅｒｅ １８．８ ａｎｄ １６．７％ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｒｓｏｎ ｂｙ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｐ＞Ｏ．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｅｎｚｙｍｅ— ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＰＯＴ）ｕｓｉｎｇ ＥＳＡＴ一６／ＣＦＰ一１０ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎａｓ（Ｅ／Ｃ）ａｎｄ Ｒｖ３８７９ｃ ａｓ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｃａｎ ｂｅ ａ ａｓｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｃｔｉｖｅ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｉｔ ｏｆｆｅｒｓ ｃｅｒｔａｉｎ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｅｖｉｄｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｌａｔｅｎｔ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；Ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ；Ａｕｘｉｌｉａｒｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ 酶联免疫斑点检测（ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ ａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＰＯＴ）技术是通过检测特异性抗原刺激 ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，ＭＴＢ）复合群基因ＲＤＩ区域（Ｒｖ３８７１一 Ｒｖ３８７９ｃ）中编码的早期分泌抗原靶（ｅａｒｌｙ ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ ｔａｒｇｅｔ ６ ＫＤ，ＥＳＡＴ一６）和培养滤液蛋白 （ｃｕｌｔｕｒｅ ｆｉｌｔｒａｔｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １０ ＫＤ，ＣＦＰ．１０）的肽段库作 为抗原，价格昂贵，限制了其在结核病高流行国家 中的应用。有研究表明，ＥＳＡＴ一６／ＣＦＰ一１０融合蛋 后分泌细胞因子的细胞数量评价细胞免疫功能的方 法，具有灵敏度高、准确性强、结果稳定等特点， 得到广泛研究，目前已经上市的Ｔ．ＳＰＯＴ．ＴＢ Ｍ（Ｔ— Ｓ ＰＯＴ．ＴＢ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ，Ａｂｉｎｇｄｏｎ， ＵＫ）试剂盒以结核分枝杆菌（ＭＹＣｏｂｔｉＣｔｅｒｉｕｍ 白（Ｅ／Ｃ）可能等同于多肽的效果。这种蛋白能够 摹金项目：结核病防治关键技术研究（ｚＯ９Ｏ５０７ｏ０９４０９０４）；国家重大专项（２００８ＺＸ１０００３—００５） 作者单位：１０１１４９北京，北京市结核病胸部肿瘤研究所（杜风娇、傅瑜、李亮、高静韬、张宗德） １０００９１北京，解放军第三０九医院全军结核病研究所（吴雪琼） 结核病与胸部肿瘤２０１２年第２期Ｔｕｂｅｒ＆Ｔｈｏｒ Ｔｕｍｏｒ，Ｊｕｎｅ ２０１２，Ｎｏ．２ 大规模生产且使结核感染检测更加便宜有效…，另 外，Ｒｖ３８７９ｃ也被证实在结核病诊断中具有高特异 性口３】。因此，本研究将Ｅ／Ｃ．ＥＬＩＳＰＯＴ与Ｔ ＳＰＯＴ． ＴＢ进行比较，并评估辅加Ｒｖ３８７９ｃ蛋白抗原后的 影响，探讨其在活动性结核病诊断中的价值。 １对象和方法 １．１对象 １．１．１结核组为２００９年９月至２０１０年１０月在首 都医科大学附属北京胸科医院住院的初治结核病患 者１０６例，入选标准：（１）菌阳肺结核：痰抗酸杆菌 涂片连续２次（＋），或１次（＋＋），或１次培养阳性； （２）菌阴肺结核：痰抗酸杆菌３次涂片阴性及１次培 养阴性，具有典型的肺结核临床症状和胸部ｘ线表 现，抗结核治疗有效，临床可排除其他非结核性肺 部疾患；（３）结核性胸膜炎：具有典型的结核病临床 症状，淋巴细胞性胸腔渗液，抗结核治疗有效，排 除其他疾病所引起的胸腔积液。所有患者抗结核治 疗少于２周。 １．１．２对照组（１）健康者：为无临床症状、Ｘ线胸片 无异常表现、无结核病接触史的护士学校学生和体 检新职工；（２）非结核疾病（肺部疾病）患者包括３３ 例肺癌（１９例腺癌，９例小细胞癌，５例鳞癌）患者 均经组织病理学证实，既往无结核病史和结核接触 史、结核菌素皮肤试验（ｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎ ｓｋｉｎ ｔｅｓｔ，ＴＳＴ）均 为阴性，未经放化疗和手术治疗、２例气管扩张和８ 例非分枝杆菌性肺炎患者。 所有入选者均无人免疫缺陷病毒感染、急性病 毒感染、妊娠和应用免疫抑制剂等病史。见表１。 表１受试者基本情况 １．２方法 １．２．１酶联免疫斑点试验（ＥＬＩＳＰＯＴ）在９６孔 ＩＦＮ．Ｙ预包被板孔中分别加入阳性对照植物血凝素 ５０ ｕｌ；Ｅ／Ｃ融合蛋白５０ ｕｌ，Ｒｖ３８７９ｃ蛋白５０ ｕｌ， 阴性对照不加抗原仅加培养基，各检测孔和对照孔 均设置复孔。每孔加入１００ ｕｌ含有２．５ Ｘ １０５个外周 血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ， ＰＢＭＣ）的悬液，５％ＣＯ，培养１８～２４小时。弃细胞 悬液１×ＰＢＳＴ（含０．０５％土温．２０的ＰＢＳ）洗涤６遍 后，加入１００ ｕｌ用ＰＢＳ稀释的生物素标记抗体（１： ２００稀释），置３７℃孵育１小时；弃去液体，用１ Ｘ ＰＢＳＴ洗板６次，加入１００ ｕｌ用ＰＢＳ稀释的酶结合 物（１：２００稀释），置３７℃孵育３０ ｍｉｎ；弃液同上洗 涤后，每孔加入平衡至室温的显色液１００ ｕｌ。置３７ ℃避光显色７～１５ ｍｉｎ至斑点显示出合适大小；加 入双蒸水或去离子水终止反应，将板放在３７℃烘 箱中干燥半小时；应用ＥＬＩＳＰＯＴ自动分析仪计数检 测 。 诊断界值（ｃｕｔ ｏｆｆ）根据受试者工作曲线（ｒｅｃｅｉｖｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｃｕｒｖｅ，ＲＯＣ）确定（本研究选取ＴＳＴ阴 性健康对照２５例和菌阳肺结核４９例做出ＲＯＣ曲 线）：每批实验阴性孔的斑点形成细胞（ｓｐｏｔ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌ，ＳＦＣ）为０～１０个、且阳性对照ＳＦＣ数＞２０个 者作为入选病例。当Ｅ／Ｃ融合蛋白检测孔ＳＦＣｓ 数量一阴性孔ＳＦＣｓ数量 １１个，且各检ＮＴＬ ＳＦＣｓ 数量均为阴性孔２倍时，结果判断为阳性；当 Ｒｖ３８７９ｃ蛋白的检ＮＴＬ ＳＦＣｓ数量一阴性孔ＳＦＣｓ数量 ≥８个，且各检测孔ＳＦＣｓ数量均为阴性孔２倍时， 结果判断为阳性。 １。２．２ Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ检澳０（ＯｘｆｏｒｄＩｍｍｕｎｏｔｅ Ｌｔｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ） 依据试剂盒说明书操作，其中单孔 加入５０ ｕｌ细胞培养基作为空白对照，５０ ｕｌ植物血 凝素作为阳性对照，以５０ ｕｌ结核分枝杆菌特异性 ＥＳＡＴ一６和ＣＦＰ一１０肽段库作为刺激原。 诊断标准：空白对照孔内斑点数＜１０且阳性对 照孔内斑点数＞２０时视为实验有效。当空白对照孔 内斑点数＜６时，任一实验孔斑点数减去空白对照 后 ６，结果判为阳性；当空白对照孔内斑点数＞６ 时，任一实验孔斑点数大于空白对照的２倍，结果 判为阳性。 １－２＿３结核菌素皮肤试验（ＴＳＴ）受试者前臂皮内注 射０．１ ｍｌ的纯化蛋白衍生物，７２ ｈ后由２位医生共 同查验结果及卡痕。 １．３统计学处理 采用ＳＰＳＳ ｌ３．０软件进行统计学分析，应用 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｍ ４软件绘制散点图。非正态分布的 数据用中位数（四分位间距）表示。计数资料采用 连续性校正的Ｐｅａｒｓｏｎ 检验；计量资料两组问比 较采用Ｍａｎｎ—Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ检验，多组问比较采用 Ｋｒｕｓｋａｌ—Ｗａｌｌｉｓ Ｈ检验。 ０．０５为差异有统计学意 义。 ２结果 ２．１各抗原在结核组和对照组斑点形成情况本研 究用Ｅ／Ｃ融合蛋白和Ｒｖ３８７９ｃ蛋白的ＥＬＩＳＰＯＴ 和Ｔ—ＳＰ０Ｔ．ＴＢ试剂盒进行了比较。这四种 结核病与胸部肿瘤２０１２年第２期Ｔｕｂｅｒ＆Ｔｈｏｒ Ｔｕｍｏｒ，Ｊｕｎｅ ２０１２，Ｎｏ．２ 抗原ＥＳＡＴ一６、ＣＦＰ一１０、Ｅ／Ｃ和Ｒｖ３８７９ｃ蛋 白在结核组ＳＦＣ的中位数（四分位间距）分别为 １４８（６４￣２８５）、２０８（７１～４１３）、１５０（７６～３３２）和 １４４（５２～３９６）／１０。ＰＢＭＣ；在疾病对照组分别 为：０（０～１２）、０（０～４）、０（４～６）和０（０～１２）／ １０。ＰＢＭＣ；在健康对照组分别为：０（８～２０）、０ （４～６８）、２４（０～１１２）和８（０￣２６）／１０。ＰＢＭＣ。经 Ｍａｎｎ—Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ检验四抗原在结核组中的ＳＦＣｓ 数量均高于疾病对照组（Ｕ值为２５１．０￣４４０．５，均 Ｐ＜０．０１）和健康对照组（Ｕ值为７５４．０～１０９９．０，均 Ｐ＜０．０１），差异有统计学意义。四种抗原在结核组内 （菌阳、菌阴和胸膜炎）和健康对照组和疾病对照组 的ＳＦＣ数量见表２，经Ｋｒｕｓｋａ１．Ｗａｌｌｉｓ Ｈ检验差异 无统计学意义（均Ｐ＞０．０５）。 ２．２四抗原在结核组和对照组中的敏感度和特异度 比较本研究中的四种抗原ＥＳＡＴ ６、ＣＦＰ一１０、Ｅ／ Ｃ融合和Ｒｖ３８７９ｃ蛋白在结核组中总的敏感度为： ９１．５ （９７／１０６）、９１．５ （９７／１０６）、９０．６％（９６／ １０６１和８Ｏ．２％（８５／１０６），其中Ｒｖ３８７９ｃ蛋白的敏感 度８０．２％（８５／１０６）最低，但经两两比较差异无统 计学意义（Ｐｌ＜０．０５）；我国结核感染率高，因此在ＴＳＴ 阴性对照组中的特异度分别为：９３．２％（５５／５９）、 ９１．５％（５４／５９）、９１．５％（５４／５９）和９３．２％（５５／５９） 均较高，经Ｋｒｕｓｋａ１．Ｗａｌｌｉｓ Ｈ检验差异无统计学意义 （均Ｐ＞０．０５）。 表２四种抗原在结核组和对照组ＳＦＣ数量的比较 注：ＥＳＡＴ一６：早期分泌抗原靶６ＫＤ；ＣＦＰ一１０：培养滤液缮自１０ ＫＤ；Ｅ／Ｃ：ＥＳＡＴ一６／ＣＦＰ一１０融合蛋白；斑点形成细胞为中位数 （四分位间距）；ＥＳＡＴ一６（多肽库）、ＣＦＰ １０（多肽库）、Ｅ／Ｃ（蛋白）、 Ｒｖ３８７９ｃ（蛋白）组内比较ｘ 值为２．０５０～７．５９２，均Ｐ＞０．０５ ２．３ Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ和ＥＬＩＳＰ０Ｔ两种方法的诊断效 果评价在结核组１０６例患者和ＴＳＴ阴性对照组５９ 例中评价Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ和ＥＬＩＳＰＯＴ的诊断效果（表 ３）。两种方法的诊断敏感度和特异度高，且差异无 统计学意义（均尸＞Ｏ．０５），提示ＥＬＩＳＰＯＴ用于辅助 诊断结核感染价值高。另外，本研究采用Ｔ—ＳＰＯＴ． ＴＢ、Ｅ／Ｃ联合Ｒｖ３８７９ｃ蛋白的ＥＬＩＳＰＯＴ方法检测 了４８例健康对照的阳性率分别为１６．７％（８／４８）、 １８．８ （９／４８）和１８．８％（９／４８）且差异无统计学意 义（尸＞０．０５），提示我国结核潜伏感染率显著低于ＴＳＴ 报道的结果 。 表３ Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ和Ｅ／Ｃ联合Ｒｖ３８７９ｃ 蛋白的ＥＬＩＳＰＯＴ方法诊断效果评价 注：Ｔ－ＳＯＰＴ．ＴＢ：以ＥＳＡＴ 和ＣＦＰ－１０的多肽厍作为抗原；ＥＬＩＳＰＯＴ： Ｅｃ融合蛋白联合Ｒｖ３８７９ｃ蛋白作为抗原，括号内是阳性数，例数 ３讨论 １９９９年。Ｂｅｈｒ等［６ 应用比较基因组学将卡介苗 与结核分枝杆菌Ｈ３７Ｒｖ全基因组进行对比发现１６个 丢失区，即ＲＤＩ￣ＲＤＩ６（共含１２９个开放读码框）， 其中ＲＤＩ包含９个开放读码框（Ｒｖ３８７ １￣Ｒｖ３８７９ｃ）， 仅存在于致病性分枝杆菌中，而在ＢＣＧ及多数环 境分枝杆菌中均缺失，因此最具有编码特异性抗原 的潜质。当人体初次感染结核菌后使Ｔ淋巴细胞致 敏转化为记忆Ｔ淋巴细胞，当再次接触结核菌特异 性抗原时，能迅速活化增殖，释放ＩＦＮ．Ｙ 。综合 以上原理，英国学者Ｌａｌｖａｎｉ 开发出了以ＥＳＡＴ一 ６（Ｒｖ３８７５）和ＣＦＰ一１０（Ｒｖ３８７４）肽段库为刺激原，检 测外周血中释放ＩＦＮ．Ｙ特异性Ｔ淋巴细胞，从而诊 断结核感染的Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ Ｍ试剂盒。 本研究中４种抗原ＥＳＡＴ一６多肽库、ＣＦＰ一１０多 肽库、Ｅ／Ｃ融合蛋白和Ｒｖ３８７９ｃ蛋白在结核组中 总的ＳＦＣ数量高于疾病对照组和健康对照组，表明 这４种抗原可以使机体产生高水平的ＩＦＮ—Ｙ，能够 判断机体是否受到ＭＴＢ感染。ＥＳＡＴ一６是由ＲＤ１区 域ｒｖ３８７５编码的一个包含约９６个氨基酸的小分子 量蛋白；ＣＦＰ．１０是由ＲＤＩ区域ｒｖ３８７４编码的一个 包含约１００个氨基酸的小分子量蛋白，它们均是Ｔ 淋巴细胞最主要的靶抗原之一。Ｅ／Ｃ因存在更多的 抗原表位，理论上也能获得更强烈的免疫反应 ； ｒｖ３８７９ｃ基因编码的Ｒｖ３８７９ｃ蛋白已被证实在细菌 毒力、新疫苗的构建及开发新型诊断试剂方面均有 重要作用，联合Ｅ／Ｃ蛋白作为抗原的ＥＬＩＳＰＯＴ在 本研究中的敏感度提高到９２．５％，提示其是结核 菌感染检测潜在新抗原；但较Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ敏感度 ９３．４％低，且差异无统计学意义，可能由于多肽库 抗原表位聚集程度较蛋白高 ］。 菌阴肺结核和结核性胸膜炎因找不到细菌学确 结核病与胸部肿瘤２０１２年第２期Ｔｕｂｅｒ＆Ｔｈｏｒ Ｔｕｍｏｒ，Ｊｕｎｅ ２０１２，Ｎｏ．２ ９５ 诊依据而成为临床诊断的难点，但就细菌学而言， ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｅｘ ｖｉｖｏ ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ ａｓｓａｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｇａｎ］ｂｉａ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２ｏ０５，４３：２０７Ｏ一２（】７４． 真正的“菌阴肺结核”是不存在的，无结核分枝杆 菌的侵入，感染和发病也就无从谈起［１们。目前所指 的菌阴肺结核患者体内同样存在结核分枝杆菌，只 是采用常规的方法未能从痰标本中检测阳性结果而 已。本研究显示四种抗原在结核组内（菌阴、菌阳和 胸膜炎）的ＳＦＣ数量均较高且差异无统计学意义， ２．Ｌｉｕ ＸＱ，Ｄｏｓａｎｊｈ Ｄ，Ｖａｒｉａ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ—ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｎｏｖｅｌ ＲＤＩ—ａｎｄ ＲＤ２一ｅｎｃｏｄｅｄ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆ０ｒ ｓｐｅｃｉｉｃ ｄｅｔｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ， ２００４，７２：２５７４．２５８１． ３．Ｄｏｓａｎｉｈ ＤＰ，ＨｉｎｋｓＴＳ，Ｉｎｎｅｓ ＪＡ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ａｎｎ Ｉｎｔｅｍ Ｍｅｄ，２００８，１４８：３２５ ３３６． ４．李峤珂，吴雪琼，阳幼荣，等．ＣＦＰＩＯ／ＥＳＡＴ６融合蛋白一ＥＬＬＳＰＯＴ 提示其不依赖于痰中结核分枝杆菌的数量，只要机 体已感染结核分枝杆菌，就可通过检测机体的细胞 免疫功能判断结核感染情况。 ＴＳＴ是目前诊断结核潜伏感染的唯一方法，它 建立在机体对结核菌素纯蛋白衍生物（ｐｕｒｉｉｆｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，ＰＰＤ）迟发型超敏反应基础上。ＰＰＤ是 ２００多种蛋白的混合物，其中很多是非结核分枝杆 菌及卡介苗（Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ—Ｇｕｅｒｉｎ，ＢＣＧ）的共同 抗原成分，在普遍接种ＢＣＧ的地区造成非常高的 “假阳性”率；在免疫抑制人群、近期感染者、年 幼儿童及营养不良者中又缺乏足够的灵敏度。而 ＩＮＦ—Ｙ释放试验因使用结核菌特异性抗原呈现出巨 大的优势并被推荐为替代ＴＳＴ的检测方法 】，但 价格昂贵。本研究中Ｅ／Ｃ联合Ｒｖ３８７９ｃ蛋白作为 抗原的ＥＬＩＳＰＯＴ和Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ在健康对照组中的 阳性率为１８．８％和１６．７ ，提示我国结核潜伏感染 率并没有ＴＳＴ检测的那样高，如能开发较廉价国产 试剂盒用于健康人筛查，能为ＬＴＢＩ诊断提供一定 的依据，并对结核感染控制有一定的意义。 参考文献 １．Ｈｉｌ１ ＰＣ，Ｊａｃｋｓｏｎ—Ｓｉｌｌａｈ Ｄ，Ｆｏｘ Ａ．ｅｔ ａ１．ＥＳＡＴ一６／ＣＦＰ．１０ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｏｐｔｉｍａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ 方法的建立及其在结核分枝杆菌感染诊断中的应用价值．中国人兽共 患病学报，２０１０，２６（６）：５５１－５５４． ５．中华人民共和国卫生部．２０００年全国结核病流行病学抽样调查报告．中 国防痨杂志，２００２，２４：６５．１０８． ６．Ｍａｈａｉｒａｓ ＧＧ，Ｓａｂｏ ＰＪ，Ｈｉｃｋｅｙ ＭＪ．ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ ＢＣＧ ａｎｄ ｖｉｕｒｌｅｎｔ Ｍ．ｂｏｖｉｓ． Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，１９９６，１７８（５）：１２７４－ｌ２８２． ７．Ｙｏｕｎｇ ＤＢ，Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ＢＤ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｉｅｓ ｏｆ ＢＣＧ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｂｙ ｗｈｏｌｅ．ｇｅｎｏｍｅ ＤＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，２８４：１５２０．１５２３． ８．Ｌａｌｖａｎｉ Ａ．Ｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ２１ｓｔ ｃｅｎｔｕｒｙ：ｎｅｗ ｔｏｏｌｓ ｔｏ ｔａｃｋｌｅ ａｎ ｏｌｄ ｅｎｅｍｙ．Ｃｈｅｓｔ，２００７，１３１：１８９８—１９０６． ９．Ｈｏｕｇｈｔｏｎ ＲＬ，Ｌｏｄｅｓ ＭＪ，Ｄ．１ｌｏｎ ＤＣ，ｅｔ ａ１．Ｕｓｅ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｏｌｙｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｓｅｒｅｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２．９：８８３．８９１． １０．Ｍｕｎｋ ＭＥ，Ａｒｅｎｄ ＳＭ．Ｂｒｏｃｋ Ｉ，ｅｔ ａ１．Ｕｓｅ ｏｆ ＥＳＡＴ．６ ａｎｄ ＣＦＰ．１０ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ， ２００１，１８３：１７５２．１７６１． １１．Ｍａｚｕｒｅｋ ＧＨ，Ｊｅｒｅｂ Ｊ，Ｌｏｂｕｅ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｏｆｒ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｑｕａｎｔｉ ＦＥＲＯＮ—ＴＢ Ｇｏｌｄ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓｌ ＭＭＷＲ Ｒｅｃｏｍｍ ＲｅＤ．２００５，５４：４９—５５． １２．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｘｃｅｌｌｅｎｃｅ．Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ：ｎａｔｉｏｎａｌ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏ１． Ｌｏｎｄｏｎ：Ｒｏｙａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ．２００６，Ａｃｃｅｓｓｅｄ ａｔ ｗｗｗ．ｎｉｃｅ． ｏｒｇ．ｕｋ． （收稿日期：２０１２—０６—１ ３） （本文编辑：朱晓丽）