丙型肝炎病毒核酸定量测定的临床价值

文章编号:1001-5949(2005)04-0233-02

・论　著・

丙型肝炎病毒核酸定量测定的临床价值

赵　颖,魏　军,王菊英

　　[摘要]　目的　研究丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)载量与抗-HCV含量以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的相关性与符合性。方法　用FQ-PCR法检测128份怀疑HCV感染的血清中的HCV

-RNA,同时检测ALT和抗-HCV。结果　128份样本中HCV-RNA阳性率为53.9%(69/128);抗-HCV阳性率为62.5%(80/128);ALT异常率为51.0%(65/128)。HCV平均载量为8.52×105拷贝/ml血清。抗-HCV滴度和ALT

异常随着HCV-RNA载量升高而增加。结论　用FQ-PCR法检测HCV-RNA可以确定(1)抗HCV与抗-HBs不同,不是中和抗体,(2)高滴度抗-HCV血清具有传染性。(3)抗-HCV滴度与HCV-RNA浓度之间呈正相关性r=

0.952,P<0.001,且有符合性和互补性,(4)对慢性丙型肝炎长期抗-HCV阳性,若出现HCV-RNA阴性或阳性可

以鉴别活动性、复制性程度,(5)是评价丙型肝炎抗病毒治疗效果的重要指标。

[关键词]　丙型肝炎;丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA);丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV);荧光定量聚合酶链反

应(FQ-PCR);丙氨酸氨基转移酶(ALT)

[中图分类号]　R446.1　　[文献标识码]　A

TheclinicalvalueofquantitativedetectsHCV-RNA

ZHAOYing,WEIJun,WANGJu-ying.(TheAffiliatedHosp.ofNingxiaMed.Coll.,Yinchuan750004,China)

Abstract　Objective　TostudythecorrelativityandcommunalitybetweenserumHCV-RNA,HCVantibodyandALTlevels.Methods

HepatitisCvirusRNA(HCV-RNA)wasmeasuredbyFluorescencequantitativePCR(FQ-PCR)in128patients,andcomparedthemwiththeresultsofALTandHCVantibody.Results　Inall128cases,HCV-RNApositiverateare53.9%,about69in128,HCVantibodypositiverateare62.5%,about80in128,andALTabnormalrateare51.9%,about65in128.TheaverageHCV-RNAwas8.52×105copies/ml.Thepos2itiverateofHCVantibodyandabnormalrateofALTareallincreasealongwithHCV-RNArise.Conclusion　ThedetectionofHCV-RNAbyFQ-PCRcanbeusedtomeasuresuchfacts:(1)DifferentwithHBsantibody,HCVantibodyarenotaneutralizeantibody;(2)SerumwithhighlevelHCVantibodyhavehighinfection;(3)HCVantibodyandHCV-RNAhavehighcommunalityandcomplementary;(4)ForsomechroniclehepatitisCpatientswithlongtimeHCVantibodypositive,HCV-RNAcanbeusedtodistinguishdisease;(5)HCV-RNAisanimportantindextoevaluatedtheeffectofHCVpatients’antivirustherapy.

Keywords

　HepatitisC;HepatitisCvirusRNA(HCV-RNA);HCVantibody;FluorescencequantitativePCR(FQ-PCR);ALT

　　HCV主要是经血液和血制品传播。丙肝易演变为慢性或发展为肝硬化或肝癌,其发病机制主要为免疫病理损害1。我国丙肝发病率约为1.57%-17.4%,因此建立一种针对HCV的具有较高灵敏度、

1.1　材料:64份标本来自我院2002年2月-2003

年4月怀疑为丙型肝炎患者,其中4例HBV与HCV同时感染,其余HBsAg均为阴性。64份标本来自宁夏戒毒所强行戒毒者,吸毒时间在1-5年,均有过注射吸毒史。1.2　方法1.2.1　HCV-RNA定量检测采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR),仪器由美国PE公司生产5700荧光定量PCR仪,试剂由中山达安基因股份有限公司提供。HCV-RNA载量的正常值为<80拷贝/ml血清。1.2.2　抗-HCV检测为酶联免疫吸附法(ELISE),试剂由华美生物工程公司生产提供。1.2.3　用美国贝克曼公司生产CX9ALXCE型全自动生化分析仪检测ALT,正常值<40U/L。1.2.4　统计学方法采用EXCEL-2000软件进行处

特异性和稳定性的检测方法,对HCV感染的早期诊断和治疗具有重要意义2。HCV感染的标志物主要有HCV-RNA、抗-HCV和HCV抗原。抗-HCV可

维持10年。丙氨酸氨基转移酶(ALT)由肝细胞制造,它是体现肝细胞损害和坏死的特异性强灵敏度高的指标。本文对128例怀疑丙肝患者血清中的HCV-RNA、抗-HCV和ALT进行检测分析,现报告

如下。1　材料与方法

　[作者单位]宁夏医学院附属医院,宁夏银川750004　[作者简介]赵颖,女(1958-),河北籍,回族,主管检验师,从事分子

生物学及肝病研究。

・234・宁夏医学杂志2005年4月第27卷第4期　NingxiaMedJ,Apr.2005,Vol27,No.4

理。

2　结果

2.1　HCV-RNA及抗-HCV(+)检测结果(见表1)

表1　128份标本HCV-RNA载量与抗HCV(+)检测结果比较标本数

HCV-RNA

抗-HCV(+)抗-HCV阳拷贝/ml例数性率(%)21072100141061410024105241009104888.9161031275.0410225059

<80

1016.9

　　从表中可看出69份HCV-RNA载量高于100拷贝/ml的病例其抗HCV几乎均为阳性,而低于80拷贝/ml的病例仅有16.9%的抗-HCV阳性,经相关性分析,两者呈正相关性(r=0.952,P<0.001)。

表2　128份标本HCV-RNA载量变化与ALT异常率比较标本数HCV-RNA　　　　ALT异常拷贝/ml血清n　　　　　%　　平均值(U/L)21072100380141061071.417024105

1666.71809104555.69016103425.0684102125.06159<801525.454　　从表中可看出,69份HCV-RNA载量高于80拷贝/ml的病例中有38例ALT异常,其异常率随着HCV-RNA载量的升高而增高,经相关性分析,ALT异常率与HCV-RNA载量亦呈正相关性(r=0.965,P<0.001)。ALT浓度与HCV-RNA载量亦呈正相关关系,(r=0.645,P<0.001)。3　讨论

资料表明,目前全自动PCR-ELISA内表系统(COBASAm-Plicor)是公认的具有良好的准确性和重复性的HCV-RNA定量方法3,但由于设备和配套试剂太昂贵,很难在临床实验室推广应用4,而FQ-PCR则克服了这些不足,更适合临床常规检测。

HCV-RNA载量与抗-HCV的滴度是否有关,本组研究结果答案是肯定的。随着HCV-RNA载量升高抗-HCV滴度也相应增加,两者呈正相关关系,

这与刘元业5等报告一致。HCV-RNA载量在100或低于80拷贝/ml血清,而抗-HCV阳性标本中其抗-HCV的OD值也处于最低临界值。HCV-RNA载量与ALT异常率和浓度也呈正相关性,与王志明6等报告一致,128份标本中HCV-RNA载量高于80拷贝/ml血清的有69份,(69/128)阳性率为53.9%;抗-HCV阳性的有80份,阳性率为62.5%;ALT异常率为51.0%。本文的抗-HCV阳性率高于HCV-RNA阳性率是由于:(1)丙型肝炎患者血清中病毒含量低,且有一定波动性,在未经α干扰素治疗的患者中HCV-RNA可呈间歇性阳性。(2)HCV-RNA十分脆弱,易被白细胞含有的RNA酶降解。(3)HCV-RNA不像HBV-DNA那样不受进食的影响,HCV易与迅速增高的血中脂质及脂蛋白相结合致使

检出率降低。(4)HCV-RNA的PCR包括从RNA到

DNA的转录,第一次PCR及第二次PCR,其中任何的步骤的问题均影响其检出。(5)由于有些病例经过抗病毒治疗,使病毒复制减弱或停止,血清中HCV-RNA载量低于80拷贝/ml血清,抗-HCV在体内存在时间长(1-10年),故抗-HCV阳性率高于HCV-RNA阳性率。检出5例患者HCV-RNA阳性但抗-HCV阴性,可能与下列因素有关(1)患者处于HCV

窗口期”此时仅HCV-RNA阳性,抗-HCV阴性;(2)HCV基因异原性高。目前抗HCV试剂盒主要用基因1型重组抗原制备的,试剂盒对检测基因2型和3型的灵敏度较低;(3)机体免疫功能低下,不能产生相应的免疫应答。

[参考文献]

1

　姚航平,夏大静,张立煌,等.慢性丙型肝炎的细胞凋亡调节蛋白、白细胞分化抗原54和白介素18的水平及意义J.中华检验医学杂志,2002,1(25)49-50.

2　赵秀丽,单祥年,张建琼,等.树状DNA技术在HCV检测中的应用J.临床检验杂志,2003,1(21):27-30.

3

　DidomenicoN,LinkH,KonbelR,etal.COBASAmplicor:fullyauto2

matedRNAandDNAamplificationanddetectionsystemforroutinePCRJ.ClinChem,1996,42:1915-1923.

4　MariaM,JordiG,JuanIE,etal.High-thoughputrealtimereverseran2

scription-PCRquantitationofHCVRNAJ.JClinMicrobiol,1999,37:327-332.

5　刘元业.丙型肝炎的流行病学.见秦绍明.丙型肝炎M.北京,人民军医出版社,1992.106-110.

6

　王志明,谭复明,陈伟华,等.输血后丙型肝炎病毒感染的血清病毒定量研究J.中华传染病杂志,2000,1(18)37-38.

[收稿日期]2004-10-21　　[责任编辑]李　洁

“