党参多糖对鸡IL-2活性和淋巴细胞增殖反应的促进作用
曹 丽,罗崇念,卞庆亚,陈建民
(中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所,北京 100094)
摘 要: 为了筛选有效增强鸡免疫功能的中药单体,采用体外鸡脾淋巴细胞增殖试验和体外诱导白细胞介素2(IL-2)产生试验观察了党参多糖对鸡免疫功能的影响。结果表明党参多糖可明显增强鸡脾淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生。
关键词: 党参多糖;鸡;淋巴细胞增殖;白细胞介素2
中图分类号:S853.74 文献标识码:A 文章编号:1000-6354(2004)01-0003-02 党参(RadixCodonopsis)为桔梗科党参属植物,干燥根入药,可补气养血,增强机体免疫功能,用于阴虚、气弱、气虚等。现代药理学研究证实党参具有抗肿瘤、增强免疫功能及抗氧化等多种生物学活性,其主要活性成分为党参多糖1,为了筛选有效增强鸡免疫功能的中药单体,笔者观察了党参多糖对雏鸡脾淋巴细胞增殖反应及IL-2产生的影响。
1 材料与方法1.1 实验动物
冻存备检。
1.3.3 检测IL-2活性用靶细胞的制备 于细胞培养瓶内
加入含终浓度10μg/mlConA的5×106/ml鸡脾淋巴细胞悬液5ml,5%CO240℃细胞培养箱静止培养48h,取出培养瓶,收集脾细胞并用0105mol/lα-MM于40℃处理15
min以除去剩余的膜结合ConA,再用淋巴细胞分离液进行
密度梯度离心2000r/min,20min,RPMI1640培养液1500
r/min,离心10min洗涤2次。台盼蓝拒染法检测活细胞率>95%,同时进行活细胞记数,最后用RPMI1640完全培养
商品AA肉鸡(1日龄)。
1.2 药品和试剂
液调靶细胞浓度至5×106/ml。
1.3.4 待测样品IL-2活性的检测 于96孔细胞培养板
党参多糖提取方法参照文献2,党参购自北京市药材公司。Percoll细胞分层液为Pharmacia公司产品,RPMI-1640培养基及SDS为Gibco公司产品,刀豆蛋白A(ConA)、MTT、α-甲基-D-甘露糖苷(α-MM)均为Sigma公司产品。
1.3 实验方法
1.3.1 雏鸡脾脏淋巴细胞增殖试验 选择14日龄雏鸡,捕
每孔加入待测IL-2样品(预先已测定样品的最佳稀释度为
1∶8)50μl,再加入5×106/ml靶细胞50μl。每样品设置3个
重复孔,并设RPMI1640完全培养液空白对照。于5%CO2
40℃细胞培养箱静止培养33h,按淋巴细胞增殖试验MTT
方法测每孔590nm处OD值。
2 结果
2.1 党参多糖对鸡脾淋巴细胞增殖的影响
杀致死,无菌取脾脏,用尼龙网(200目)研磨挤压制成单细胞悬液,用比重11063的淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离
(2000r/min,20min)脾脏淋巴细胞,再用RPMI1640完全培
结果见表1。党参多糖剂量为100μg/ml、250μg/ml和
500μg/ml时,对ConA刺激的鸡脾淋巴细胞有明显的促进增
养液离心洗涤(1500r/min,15min)淋巴细胞3次,用台盼蓝拒染法检测活性细胞率>95%,同时进行细胞记数。将淋巴细胞用RPMI1640完全培养液调细胞终浓度至5×106/ml,加入96孔细胞培养板,50μl/孔,然后加入50μl待测药物以及25μg/mlConA,于5%CO240℃细胞培养箱静止培养44h,加入5mg/mlMTT,10μl/孔,继续培养4h后,加入细胞裂解液90μl,培养24h后用酶标仪测每孔590nm处OD值。
1.3.2 雏鸡脾脏T淋巴细胞IL-2的体外诱生试验 鸡脾
殖作用,并随剂量增加,促增殖作用愈强。而党参多糖剂量为250μg/ml和500μg/ml时,对未经ConA刺激的淋巴细胞也有明显的促进增殖作用。
表1 党参多糖对鸡脾淋巴细胞增殖的影响
剂量/μg・ml-1
025100250500
OD值
细胞的制备见淋巴细胞增殖试验方法。于24孔培养板依次加入鸡脾脏淋巴细胞和不同浓度的党参多糖溶液,以及10μg/mlConA(终浓度),使细胞终浓度为5×10/ml,于5%
CO240℃细胞培养箱静止培养24h,取出培养板,将培养液
6
未加ConA
0.169±0.0050.188±0.0090.167±0.013
0.254±0.01130.312±0.0073
33
加ConA
0.357±0.0140.378±0.012
0.424±0.00730.456±0.00930.499±0.0103
33
移入离心管内,2000r/min离心20min,收取上清液,-20℃
收稿日期:2003-07-29
作者简介:曹 丽(1966-),女,博士,研究方向:免疫药理学。
注:3与对照相比P<0105,33与对照相比P<0101。
2.2 党参多糖对鸡脾淋巴细胞产生IL-2活性的影响
结果见表2。党参多糖剂量为100μg/ml、250μg/ml和
500μg/ml时,可明显促进鸡脾淋巴细胞分泌IL-2。
4中兽医医药杂志 2004年第1期 JTCVM
纯中药饲料添加剂对肉仔鸡消化、吸收功能的调节
霍书英,李玉荣,李呈敏
(河北农业大学动物科技学院,河北保定 071001)
摘 要: 试验用1日龄北京AA肉仔鸡300只,随机分为5个组,预饲5d后开始在其饲料中添加自拟的中草药添加剂方I和方II,于不同日龄称重、采样检测,试验结果表明:方I和方II可显著提高肉仔鸡的饲料转化率(P<
0101),氮沉积率和干物质消化率(P<0105)。说明纯中药饲料添加剂方I和方II可增强肉仔鸡的消化、吸收功能。
关键词: 肉仔鸡;中草药添加剂;氮沉积率;干物质消化率
中图分类号:S81617 文献标识码:A 文章编号:1000-6354(2004)01-0004-03 在现代化的肉仔鸡养殖业中,耐药性和药物残留问题日
收稿日期:2003-05-20
作者简介:霍书英(1974-),女,硕士研究生,主要从事动物生理学的
教学与中草药饲料添加剂的研究工作。
益突出,严重制约了我国商品肉鸡的出口。中草药是天然绿色植物,兼有营养和药用的两种属性,且具有健脾理气、促进消化吸收、增强机体免疫功能、促进动物生长发育、提高饲料利用率等功能1～4。因此研制开发无残留、无毒副作用的纯中药饲料添加剂成为科研工作者努力的方向。笔者根据中
表2 党参多糖对鸡脾淋巴细胞产生IL-2活性的影响
剂量/μg・ml-1
0
25100250500原或有丝分裂素如ConA等刺激后,开始分泌IL-2,而IL-2又进一步促进T淋巴细胞的增殖分化,IL-2同样对其它
OD值0.457±0.0120.472±0.0080.526±0.00930.537±0.00630.568±0.0113
重要的免疫细胞如B淋巴细胞、单核-巨噬细胞、NK细胞等
3
的功能具有调节作用,因此T淋巴细胞及其所分泌的IL-2在机体特异性免疫应答中起核心作用。本实验结果表明党参多糖正是作用于这个核心环节从而对雏鸡具有促进其特异性的免疫应答的作用,这为党参多糖作为免疫增强剂应用于饲养业提供了理论依据。参考文献:
12
注:3与对照相比P<0105,33与对照相比P<0101。
3讨论
党参为临床常用的传统补益中药,具补中、益气、生津等功用,对脾胃虚弱,气血两亏,体倦无力,口渴久泻,食少,脱肛等症具有明确的疗效
3
张华荣,姜国辉.党参药理与临床研究进展〔J〕.中医药信息,1996(5):17～21.
李兴泰,张家俊,陈文为.补气与理气中药及多糖对鼠骨骼肌细胞能荷值的影响〔J〕.北京中医药大学学报,2000,
23(5):36～38.
。现代药理实验证明党参具有明
4
显的促进免疫功能的作用,尤其是其主要活性成分党参多糖可促进小鼠T淋巴细胞功能及IL-2的产生
,这可能正是
其补中益气等药效作用的主要机制。最近党参被用于饲养业,文献报道将党参等中药作为饲料添加剂,对肉仔鸡有明显的促进生长、增强抗病力以及升高血液中白细胞数和血红蛋白含量的作用5,艾玉萍等也发现党参水煎剂可提高鸡细胞免疫功能6。本实验结果进一步表明一定剂量的党参多糖可以明显促进雏鸡脾淋巴细胞增殖反应以及IL-2的分泌。在未加刺激剂时有促进鸡脾淋巴细胞增殖的效应,表明党参多糖也有丝裂原样的作用。机体中T淋巴细胞是特异免疫系统赖以实现免疫调节的重要细胞,T淋巴细胞受到抗
654
3《中药大词典》编写组.中药大词典(下册)〔M〕.上海:上
海科学技术出版社,1993.
陈玉春,李柏龄.党参对白细胞介素2产生及作用的调控〔J〕.福建医药杂志1992,14(3):33～34.
许会军,潘永全.中药添加剂复方党参散在肉仔鸡日粮中的应用效果〔J〕.中国饲料,1997,(4):17～18.
艾玉萍,周永连.黄芪党参提高鸡细胞免疫的试验〔J〕.中国家禽,1998,20(8):27～28.
PromotiveeffectofCodonopsispilosulapolysaccharideonIL-2inductiveactivityandlymphocyteproliferativereactioninchickens
CAOLi,LUOChong-nian,BIANQing-ya,CHENJian-min
(InstitueofMedicinalPlant,PekingUnionMedicalCollegeandChineseAcademyofMedicalScience,Peking100094,China)Abstract:ImmunologicfunctionofCodonopsispilosulapolysaccharidewasobservedbybothtestoflymphocyteproliferatereactionandIL-2inductiveactivityinvitroforelectingmonomerofChineseherbtopromotiveimmunologicfunctionofchick.TheresultsshowedthatCodonopsispilosulapolysaccharidecouldpromotivelymphocyteproliferatereactionandIL-2productionclearly.
Keywords:lymphocyteproliferatereaction;chick;lymphocyteproliferation;IL-2
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