粪大肠菌群操作细则

粪大肠菌群操作细则

粪大肠菌群 多管发酵法

1、培养基、试剂与仪器

本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新制备的去离子水。

单倍乳糖蛋白胨培养液：

称取23.0g乳糖蛋白胨营养液于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，每试管约8ml（先用移液管吸取7ml至试管中，再用滴管吸取营养液放至小玻璃管中，直至营养液溢出。注意小玻璃管中不能有气泡，若出现气泡，应将气泡排出后再注入营养液。），于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。

EC 培养液：

称取37.0gEC肉汤于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，每管8ml（操作方法同单倍乳糖蛋白胨营养液），于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。

培养基的存放

在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。

验所需仪器

超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、冰箱、酒精灯、天平、电炉、500ml广口瓶、烧杯、玻璃棒、玻璃发酵管、试管架、移液管、移液枪、接种环

2步骤 前期准备

器皿灭菌（高压蒸汽灭菌）：所用采集水样的广口瓶、玻璃试管、移液管、玻璃棒、接种环、移液枪枪头等器皿均需放入高压锅灭菌。

广口瓶：将清洗干净的采样瓶盖好瓶盖，用牛皮纸、报纸等防潮纸将瓶盖、瓶顶和瓶颈处包裹好，用绳子绑好，置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。

置试管口于酒精火焰附近。

将接种工具垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰3次，然后再放入有菌试管内，在管壁上停留片刻待其冷却。

取少许菌种置于另一支试管中，按一定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。（此操作要迅速，以免棉塞着火）

重新塞上棉塞。烧死接种工具上的残余菌，把试管和接种工具放回原处。

表2 粪大肠菌群检数表

（接种水样100mL2 份、10mL10 份、总量300m）

表3 最可能数（MPN）表

（接种5 份10mL 水样、5 份1mL 水样、5 份0.1mL 水样时，不同阳性及阴性情

况下100mL 水样中细菌数的最可能数和95％可信限值）