叶酸代谢酶基因多态性与胚胎停止发育的相关性

2，张晶2,支雪荣2（1乌鲁木齐友爱医院，乌鲁木齐830017 ；2新疆维吾尔自治区妇幼保健院）摘要：目的 探讨叶酸代谢酶基因多态性与胚胎停止发育的相关性停育组）和正常妊娠

125例对照组），采用聚合酶链

（。方法 选取有胚胎停育史114例（胚胎

度多态性

检测两组

四氢统-限制性

叶酸还原酶（MTHFR）、甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR）、还原叶酸载体及蛋氨酸合酶等叶酸代谢酶的基因多态性,

计学差异（P ＜0.05）；胚胎停育组MTHFR C677T TT基因型和MTRR A66G GG基因型占比高于对照组（P均＜ 0.05、。Logistic回归分析显示,MTHFR C677T位点的TT基因型和MTRR A66G位点的GG基因型是发生胚胎停育 的危险因素,其发生风险分别是对照组的4.127和4.528倍（P均＜0.05、。胚胎停育组叶酸利用能力中度风险和 高度风险的分布比例高于对照组（P均＜0. 05、。结论 MTHFR C677T位点和MTRR A66G位点的突变与胚胎停 止发 。关键词:胚胎停止发育;叶酸代谢;基因多态性;聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性doi ： 10. 3969/j. issn. 1002-266X. 2019. 22. 015对 用能力风险 分级评定结果 胚胎 组MTHFRC677T的T等

。因分布与对照组比

中图分类号R714.54

:文献标志码:A 文章编号1002-266X（2019）22-0054-03：近年来，国内临床胚胎停止发育的发生率呈逐

势。该病发机制 杂［1］, 缺（33.426 ±2.741 ）岁，体质量（62. 389 ±2.915）kg,

产次（1.265 ±0. 108）次，孕周（8.425 ± 1.537）周。 两组临床资料比 无统 差异（P均＞0,05）

本

院 员 准实施，入组女性均自和 代谢相

诱导因素⑵。 因缺 胚胎发 的名维生素B9, 体 可少的 物质，因自身无法合成,需通过 外 吸收⑶。 以5- 四氢 的 存在于血浆，并通过合

愿参 1.2

署知情同 。代酶基因多态性检测抽取受试者外，5 000 r/min 4 C吟和胸 参与核酸、蛋白质周血5 mL存于真空抗凝试 心20 min,收

和磷脂的代谢，因为 被直接利用， 通过一系列代谢酶的催化 现其生 性⑷。因此，参白细胞，-20 C保存。米用基因组DNA提取试剂盒获取基因组DNA,经核酸蛋 白分析仪鉴定纯度和 度’ODzm/OD^ 于1.8 ~

2.0,保存于-20 C。采用RCP-RFLP法检测MTH­FR C677T、MTRR A66G、RFC-1 A80G 及 MTR A2756G等

与体内

（MTHFR）甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR）、还原

体（RFC-1）及蛋氨酸合酶（MTR）等基因的多

、代谢的酶如 四氢叶酸还原酶态性与胎儿的生长发育紧密相关「5，］。为此，本研 就 代谢酶的基因多态性与胚胎停止发育的关系

了探讨。代谢相关酶等位基因和基因型与胚胎停止发育的相PCR分布频率,分析四个基因 性。选

相应PCR-RFLP扩增引物序列,10 pL,包括1 pL的1资料与方法1.1临床资料 收集2017年3月~2018年6月在 本院就诊经B超确

提取获得的基因组DNA完成纯度鉴定后

扩增,PCR扩增所用体系

胚胎停止发育史的 （胚基因组 DNA 模板（30 ng/pL） , 5 pL 的 2 x Master

Mix,0.5 pL的20 x引物以及3.5 pL纯水。以95 C预变性5 min后,95 C变性30 s,然后59 C 火

胎停育组）114例，年龄（31.256 ±3.918）岁，体质量 （63.417 ±3.729）kg,产次（1.424 ±0.217）次，孕周

（8.731 ±2.246）周。胚胎停止发育诊断标准:头臀 30 s,最后72 C 伸60 s,40个 环结束后,72 C

度M7 mm, 平 =325 mm,无心跳。排除伸5 min。扩增后PCR 物用限制性内切酶酶切后

标准:宫腔畸形或宫腔内环境感染，夫妻双

性遗传疾病,有化学或化工药物接

家族1.3

琼脂糖

，有心、肝、肾泳分析。用 力等级判定 参照Li等⑴研究,

等 54器疾病等。 取同 正常生育叶酸利用能力风险等级的判定是以MTHFR C677T

TT、MTRR A66G、RFC-1 A80G、MTR A2756G 等位点

、无 妊娠史的 125例（对照组），年龄山东医药2019年第59卷第22期GG型的出现频率为指标，分为四个风险等级:突变

berg遗传平衡定律检验,P ＜0-05为差异有统计学纯合型分布频率＜ 10-0%时可认为机体叶酸利用能

力正常，划分为未发现风险等级;突变纯合型的分布

。2结果2-1 两组 MTHFR、MTRR、RFC-1 及 MTR 等位基因

频率为11-0% ~35-0%时为低风险;突变纯合型分 布频率在36- 0% ~ 65- 0%时为中度风险；而M

66 - 0%可判定为高风险。1-4统计学方法 采用SPSS22-0统计软件处理

分布情况 RFC-1 A80G、MTR A2756G、MTRRA66G基因中A和G等位基因频率在胚胎停育组和

对照组间无统计学差异（P均＞0-05）o而胚胎停 育组中MTHFR基因C677T位点T等位基因的频率

分布在胚胎停育组和对照组中有统计学差异（P ＜ 0-05）o 见表 1o数据。计数资料以百分比表示，采用X2检验进行

组间比较丄ogistic回归分析用于判断各位点与胚 胎停止发育的相关性。数据均通过Hardy-Wein-

表1组别MTHFR C677T C48- 25

MTRR A66G

两组等位基因频率分布比较％（）RFC-1 A80G

MTR A2756GGAG16- 6715- 20T51- 7542- 40AGA胚胎停育组对照组光2P58- 7766- 402- 9690- 08541- 2333- 6072- 8172- 000- 0390- 84427- 1928- 0084- 3384- 800- 1920- 66157- 604- 1900- 0412-2 两组 MTHFR、MTRR、RFC-1 及 MTR 的基因型 RFC-1基因A80G位点以及MTR基因A2756G位点 AA、AG和GG型的频率在胚胎停育组和对照组间

频率分布情况 胚胎停育组中MTHFR基因C677T

位点TT突变纯合型、MTRR基因的A66G位点的 GG突变纯合型频率均高于对照组（P均＜0-05 ）o

MTHFR C677T无统计学差异（P均＞0-05）。见表2。2-3叶酸代谢酶基因多态性与胚胎停育的关系表2两组基因型频率分布比较例MTRR A66G［（％）］RFC-1 A80GMTR A2756G组别胚胎停育组nCC

11412517(14.9175(65.7922(19.3026(20.8092(73.6010.8907(5.60对照组P) ) CT

) )

TT))AA

43(37.7247(41.2324(21.0548(38.4072(57.6017.5060.000) ) AG) )GG5(4.00))AA

69(60.5327(23.6818(15.7974(59.2032(25.6019(15.20) ) AG

) ) GG))AA

85(74.5621(18.4294(75.2024(19.200.213) ) AG))GG8(7.017(5.60))0.1280.9420.0040.899Logistic分析结果显示，MTHFR C677T位点的突变 高于对照组14.40%和8-80% （P均＜0- 05）。3 讨论纯合型TT型与胚胎停止发育相关,其胚胎停育的 风险高于CC型和CT型（P均＜0- 05 / , MTHFR

C677T TT基因型是发生胚胎停育的危险因素。

由叶酸代谢酶基因突变引起酶活性降低，可能

导致同型半胱氨酸向甲硫氨酸转化受阻，引起S-腺

昔甲硫氨酸水平降低，抑制dna甲基转移酶活性从 而影响dna甲基化，诱发胚胎停止发育、早产、妊娠 期高血压等产科疾病［,］,叶酸代谢酶基因突变可

MTRR A66G GG基因型与胚胎停止发育的风险同

样高于AA、AG基因型（P均＜0-05/，携带GG基因

型是发生胚胎停育的危险因素。RFC-1 A80G、MTR A2756G 的 突变 与 胚胎

的 险无 。能与胚胎停止发育发生有关。MTHFR、MTRR、RFC-

1和MTR是目前与临床产科诊断相关的叶酸代谢

3。表3基因MTHFR 1- 349叶酸代谢酶基因多态性与胚胎停育的Logistic分析结果标准误Wald光20- 0280- 2340- 3190- 21714- 48OR酶，本研究通过探究这4种基因多态性与胚胎停止

95% CIP0- 0000- 0000- 5430- 712发育的相关性，以希望对存在潜在胚胎停止发育患 者的诊断有所帮助。MTHFR基因突变类型有20余种，其中最具临

4- 1271-021 ~11-273MTRR0- 3620- 2470- 13513- 7954- 5281-329 ~10-345RFC-1MTR0- 8940- 7830-218~1-8460- 2531- 0120-459 ~2-187床意义的突变位点是C677T突变。突变表现为三

种基因型，即野生纯合型CC、突变杂合型CT和突

2- 4 两组 用 力比 胚胎 组利用能力在未发现风险、低度风险分布比例分别为3- 51%和14- 91%，低于对照组的31- 20%和 45-60% （P均＜0-05）o而胚胎停育组在中度风险

变纯合型TT型；突变后MTHFR酶活性降低，降低 程度与基因型有关，其中突变杂合型CT型活性降

和高度风险的分布比例分别为49-12%和32- 46% ,

低 30% , 突 变 纯 合 型 TT 型 的 性 低60%以上［0，11］。本研究等位基因频率分布结果显

55山东医药2019年第59卷第22期示,MTHFR C677T位点中T等位基因在胚胎停育组

中的分布与对照组存在差异。而基因型频率分析结

Korean population J. Fertil Steril[ ] ，2009，91 ( 4 Suppl) : 1560­

果显示，在胚胎停育组中MTHFR基因C677T位点 TT突变纯合型频率高于对照组。这提示MTHFR C677T TT型频率增加与胚胎停止发育有关。MTRR

[ 4] Muralidharan R，Babu A，Amreddy N，et al. Folate receptor-tar­

geted nanoparticle delivery of HuR-RNAi suppresses lung cancer cell proliferation and migration J. J Nanobiotechnol1562.[ ] ，2016，14

是同型半胱氨酸再甲基化途径中的重要酶，在甲硫

氨酸代谢途径中起重要作用，作为甲基供体帮助维

持机体蛋氨酸、四氢叶酸水平,减少同型半胱氨酸的 蓄积毒性[12]。MTRR主要突变类型有A66G年175L

[ 5 ] Birhanu TM，Birarra MK，Mekonnen FA，et al. Compliance to i­

ron and folic acid supplementation in pregnancy, Northwest Ethio- pia[J]. BMC Res Notes，2018，11(1):345.[6 ] Ananth CV, Peltier MR, De Marco C, et al. Associations between2 polymorphisms in the methylenetetrahydrofolate reductase gene

(1)：47.等，其中A66G突变是目前最主要也是研究最多的

and placental abruption [ J . Am J Obstet Gynecol2007 197

], , 突变。该位点突变后使得蛋氨酸被异亮氨酸代替,

酶活性降低，进而影响同行半胱氨酸代谢。突变所 表现的三种基因型中，MTRR 66AA酶活性最高，其 次是66AG,66GG活性最低[13]。本研究结果显示，

胚胎停育组MTRR A66G位点A、G等位基因所占比

例与对照组相比无差异。但胚胎停育组MTRR基

因A66G位点GG型的频率高于对照组。这提示

MTRR A66G GG型频率的增加与胚胎停止发育有

关。Logistic分析结果显示，携带MTHFR基因TT突

变纯合型.MTRR A66G GG型是胚胎停止发育的危

险因素。RFC-1酶通过协助5-甲基四氢叶酸进入胞 内来帮助核酸、蛋白质和磷脂的合成，所以RFC-1

基因突变的发生通过影响叶酸转运增加胎儿宫内发 育缺陷的风险帥，5]。MTR是同型半胱氨酸蛋白酶

的再甲基化的重要催化酶，该基因的突变通过阻碍

再甲基化导致同型半胱氨酸蓄积，进一步引发胎盘 血栓栓塞，而血栓栓塞的发生极易引发胎盘停止发 育皿。本研究发现RFC-1 A80G位点和MTR

A2756G位点AA型、AG型和GG型频率在胚胎停

育组和对照组分布无统计学差异。即RFC-1基因

的A80G位点和MTR基因的A2756G位点的突变纯 合型基因频率的增加与胚胎停止发育无关，这个结

果也通过进一步的Logistic分析得到确证。综上所述，MTHFR C677T位点和MTRR A66G

位点与胚胎停止发育相关，对有MTHFR C677T位

点和MTRR A66G位点基因突变孕产妇应积极进行 干预,以预防和减少胚胎停止发育情况的发生。 参考文献：[1]

程春秀,魏] 分析[]玉业.早期胚胎停止发育的相关性指标分析及预防

.中国优生与遗传杂志，2018,26(9):108-110.[2Nazki FH, Sameer AS, Ganaie BA. Folate: metabolism, genes, polymorphisms and the associated diseases [ J ].[3 ] ( Gene, 2014,533 1 )11-20.Bae J, Choi DH, Kang MS, et al. Effect of methylenetetrahydrofo­

late reductase and thymidylate synthase enhancer region polymor­

phisms on the risk of idiopathic recurrent spontaneous abortion in a

56[7 ] (4) ：385. e1-7.Li WX, Dai SX, ( Zheng JJ, et al. Homocysteine metabolism gene

polymorphisms MTHFR C677T, MTHFR A1298C, MTR A2756G and MTRR A66G) jointly elevate the risk of folate defi­ ] ciency [ J] .Nutrients, 2015,7(8) ：[86670-6687.Nelen WL, Blom HJ,Thomas CM, et al. Methylenetetrahydrofo­

late reductase polymorphism affects the change in homocysteine and

folate concentrations resulting from low dose folic acid supplementa­tion in women) with unexplained recurrent miscarriages[ J]. J Nutr,

[9 ] 1998,128(8： 1336-1341.Yadav U,Kumar P, Yadav SK, et al. Polymorphisms in folate me­

tabolism genes as maternal[ risk factor for neural tube defects: an updated meta-analysisJ]. Metab Brain Dis, 2015,30(1) ：7-24.[10 ] Dean J, Robertson Z, Reid V,et al. Fetal anticonvulsant syn­

dromes and polymorphisms in MTHFR, MTR, and MTRR [J ]. [ Am J Med GenetA, 2010,143A( 19) ：2303-2311.11 ] Hubacek JA，Rynekrova J，Kasparova D，et al. Association of

MTHFR genetic variants C677 T and A1298[ C ] on predisposition to， spontaneous abortion in Slavonic populationJ. Clin Chim Acta[ 2015，440:104-107.12] Sniezawska A，Dorszewska J，Rozycka A，et al. MTHFR，MTR，and MTHFD1 gene polymorphisms compared to homocysteine and asymmetric dimethylarginine concentrations and their[ metabolites] in， epileptic patients treated with antiepileptic drugs J. [ 2011，20(7) :Seizure533-540.13] Ouyang S，Li Y，Liu Z，et al. Association between MTR A2756G

and MTRR A66G polymorphisms and maternal risk for neural tube

defects: A meta-analysis [ J] . Gene，2013，515(2):308-312.[14] Qin X, LiJ,CuiY, et al. MTHFR C677T and MTR A2756G pol­

ymorphisms and the homocysteine lowering efficacy of different do­ses (of): folic acid in hypertensive Chinese adults[ J]. Nutr J, 2012,

1112-11.[15 ] Fong CS, Shyu HY, Shieh JC, et al. Association of MTHFR, , MTRand MTRR polymorphisms with Parkinson's disease among ethnic Chinese in Taiwan[ J]. Clin Chim Acta, 2011 ,412(3-4):

[16 ] 332-338.Manche S K, Jangala M, Dudekula D,

et al. Polymorphisms in fo­

late metabolism genes are associated with susceptibility to presbycu-

sis[J]. Life Sci,

2018,196(5)：77-83.(收稿日期：2019-03-03)