２０１５年第１期（总第２１６ 试验研究 蒙古绵羊ｂｃ ｌ－２、Ｂａｘ基因部分ｅＤＮＡ的克隆与序列分析 郭宏儒 （内蒙古民族大学动物科技学院 内蒙古通辽０２８０４３） 任秀珍’ （内蒙古民族大学农学院内蒙古通辽） 摘要为扩增蒙古绵羊ｂｃ１．２基因和基因，根据ＧｅｎＢａｎｋ．．Ｅ已公布的牛的序列，设计了４条引物。从蒙古绵羊脾中提 ｂｃ１．２￣Ｂａｘ的ｃＤＮＡ，并重组到ｐＢＩｕｅｓｅｌｅｃｔＴ载体，经限制性内切酶谱分析ｆｆｘ，ＤＮＡ序 取总ＲＮＡ，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增列测定， 证实所克Ｉｔ￣ｃＤＮＡ为ｂｃ１．２￣，Ｂａｘ，其ｃＤＮＡ分别包含由１６０ｂｐ￣１３４ｂｐ。 关键词绵羊Ｂｃ１．２基因Ｂａｘ￣］克隆序列分析 文章编号：１００７—１７３３（２０１５）０１．０００７．０２ １．３引物的设计及合成 Ｒ１ ＰＣＲ引物的设计及合成：根据ＧｅｎｅＢａｎｋ反刍动 物Ｂｃ１．２和Ｂａｘ的基因序列，利用计算机软件ＤＮＡＳｔａｒ进行 基因序列的同源比较得出Ｂｃ１．２和Ｂａｘ ｃＤＮＡ序列的保守 区，根据该ｃＤＮＡ保守区和引物设计原则涉及两对ＰＣＲ引 物，Ｂｃ１．２：上游引物（Ｐ１），下游引物（Ｐ２），Ｂａｘ上游引物 中图分类号：￥８２６．８ ２ 文献标￣Ｌ－ｑ－Ａ 细胞凋亡是细胞由基因控制的有序的死亡，又称为 程序性的细胞死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ，ＰＣＤ）。抗凋亡 基因ＢＣＬ２家族的发现开辟了新一类癌基因一凋亡调控基 因的新纪元【】］Ｂｃ１．２家族蛋白包括两类功能相反的蛋白 质，一类是抑制细胞凋亡的蛋白，￣ＺＵＢｃ１．２、Ｂｃ１．ｘＬ、Ｂｃ１． Ｗ等；另一类是促进细胞凋亡的蛋白Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｏｋ等。 Ｂｃ１．２相关蛋白包含不同数量Ｂｃ１．２保守区域（ＢＨ１２ ＢＨ４）ｔ 。 （Ｐ３），下游引物（Ｐ４）引物由上海生物工程公司合成。上游 引物（Ｐ１）：５ ・ＴＴＣＧＣＣＧＡＧＡＴＧＴＣＣＡＧＴＣ ３ ，下游引 物（Ｐ２）：５ －ＡＴＣＣＣＡＧＣＣＴＣＣＧＴＴＧＴＣＣ．３ ，上游引物 （Ｐ３）：５ ＴＣＣＧＡＧＴＧＧＣＧＧＣＴＧＡＡ．３ ，下游引物 （Ｐ４）：５ －ＧＣＡＧ ＡＣＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＴＴＴ－３ 。 １材料与方法 １．１试验动物及组织 蒙古绵羊取自于内蒙古穆斯林屠宰场。取新鲜脾脏 液氮保存备用。 １．２药品与试剂 琼脂糖、溴乙锭、总ＲＮＡ提取试剂盒（Ｃａｔ．ＮＯ．Ｚ５ １ ｌＯ） １．４脾组织总ＲＮＡ的提取 采用Ｐｒｏｍｅｇａ公司的总ＲＮＡ提取试剂盒，按其说明进 行。最后用无ＲＮＡ酶去离子水溶解ＲＮＡ沉淀，．７０￣Ｃ保存 备用。 购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。反转录ＲＴ－ＰＣＲ试剂盒（Ｃａｔ．ＮＯ．ＤＲＲ０１ ９Ａ）、ＰＣＲ产物纯化试剂盒、限制性内切酶Ｈｉｎｄ ＩＩＩ和 １．５利用ＲＴ—ＰＣＲ方法克隆Ｂｃ１．２和Ｂａ）【的中间片断 Ｘｂａ Ｉ、Ｔｄ连接酶、ＴａＫａＲａ ＥｘＴａｑ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、 ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ为ＤＬ２０００（分子量为２０００、１０００、７５０、 １．５．１ ＲＴ－ＰＣＲ反应 Ｂｃ１．２基因ｃＤＮＡ第一条连的合成 如上提取蒙古绵羊脾组织 ￣，ＲＮＡ。反转录反应组分总体 系为１０１１１：总ＲＮＡ ４．５ｕｌ，ｌ０ｘＲＴ ｂｕｆｆｅｒ １ ｒｔｌ，ＭｇＣＩ２ ５００、２５０、１ｏｏ）、ＰＭＤ１８．Ｔ载体；质粒提试剂盒均购自大 连宝生物工程有限公司；Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９感受态细胞为本实 验是保存。 ｝通讯作者 － － － － ＿ ・ ・ ・ ・ －＝・ ・ ｉ ・ － ｉ － － ＿ ・ （２５ｍＭ）２ｐ．１，ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ（１０ ｍＭ）ｌＩｘｌ，ＲＮａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｅｒ （４０Ｕｌ！ａ１）Ｏ．２５ｐｌ，ＡＭＶ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ＸＩ（５Ｕ／￣１） － 参考文献 ［１】中国家禽品种志编写组．中国家禽品种志【Ｍ】．上海：上海科学技 术出版社．１９８９，１．８２． 【６］国家畜禽遗传资源委．中国畜禽遗传资源志一家禽志【Ｍ】．北京： 中国农业出版社．２０１０． ｆ７】李炳元，潘保田，韩嘉福，中国陆地基本地貌类型及其划分指标探 ［２】刘艳丽，杨斌等．不同海拔高度对蛋种鸡生产性能和繁殖性能的 影响ｆＪ１．中国家禽，２０１２，３４（１７）． 【３】唐晓惠．云丹罗布．高海拔地区矮小鸡供氧与不供氧孵化对比试验 【Ｊ】．畜牧兽医科技信息，２００９，３：３６． 【４】裴鑫德．中国地方品种鸡生态性状的典型相关分析［Ｊ］．生态学报． １９９６，１６（４）：３６８—３７４． 讨［Ｊ】．第四纪研究，２００８，２８（４）：５３５—５４３． ［８】常适．气温的等级【Ｊ】．城市公共交通，２００５，１ １，４２． ［９】庄少伟．基于标准化降水蒸发指数的中国区域干旱化特征分析［Ｄ］ 兰州：兰州大学，２０１３． ［１０］张正山．试论环境温度对鸡生产的影响［Ｊ】．湖北畜牧兽医．２００９，７． ［１ １】海力且木．努尔巴哈提，喻昌盛．影响蛋鸡产蛋性能与鸡蛋品质 的因素［Ｊ】．畜牧科技信息，２００６（７）：７９． 【５］冯文华．中国地方鸡品种生态系统多样性及其生产性能的影响【Ｊ】． 家畜生态学报．２０１４，３５（３）：６７—７３． （收稿日期：２０１４－ｌ１—１７） ７