・论著・骨质疏松性骨折与ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬ系统基因多态性的关联分析
李天清 王金堂 马真胜 雷伟 王林 李萌
１．第四军医大学第一附属医院脊柱二科，西安 ７１００３２２．西安交通大学第一附属医院骨科，西安 ７１００６１
中图分类号：Ｒ６８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６－７１０８（２０１４）０３－０２４７－０９
摘要：目的 从基因水平分析ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬ系统基因多态性与髋部骨质疏松性骨折的复杂关联关系。方法 采用关联分析，以ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬ基因为候选基因，以７００个无关汉族个体为研究对象，对候选基因的７５个ＳＮＰ进行了分型实Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ分析识别出了ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬ基因每个单体域的单体型，并挑选出标签ＳＮＰ。结论 关联分析的结果表明，位于ＯＰＧ基因的ＳＮＰ位点ｒｓ２４６０９８５、位于ＲＡＮＫ基因的ｒｓ１８０５０３４、位于ＲＡＮＫＬ基因的ｒｓ９５２５６２５与髋部骨折之间存在相关性（ｒｓ２４６０９８５，Ｐ＝０畅０２９９；ｒｓ１８０５０３４，Ｐ＝０畅０２３４；ｒｓ９５２５６２５，Ｐ＝０畅０１４４），这证明ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬ系统在调节骨代谢方面起了重要的作用。利用ｈａｐｌｏｖｉｅｗ进行的单体型关联分析结果发现，ＯＰＧ单体域１内ＣＡＣＣ，ＲＡＮＫ单体域１内ＡＡＡＡＡ，ＲＡＮＫＬ单体域１内ＣＡＡＡＣＣ和单体域３内ＡＡＡＣＡＣＡＡ都与骨折存在关联，在病例组和对照组中的差异具有统计学意义（Ｐ＜０畅０５）。关键词：骨质疏松症；ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬ；单核苷酸多态性；单体型
验。根据分型结果，利用Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ进行了单体型识别，并对单体型识别的结果与髋部骨折表型进行关联分析。结果
１
２倡
１
１
１
２
ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｏｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃｆｒａｃｔｕｒｅａｎｄＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ
ＬＩＴｉａｎｑｉｎｇ，ＷＡＮＧＪｉｎｔａｎｇ，ＭＡＺｈｅｎｓｈｅｎｇ，ＬＥＩＷｅｉ，ＷＡＮＧＬｉｎ，ＬＩＭｅｎｇ
１
２
１
１
１
２
１．ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＳｐｉｎａｌＳｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆｔｈｅＦｏｕｒｔｈＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ７１００３２２．ＤｅｐａｒｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｉ’ａｎＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ７１００６１，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＷＡＮＧＪｉｎｔａｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｍｌｌｔｑ＠１６３．ｃｏｍ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｃｏｍｐｌｅｘｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓａｎｄｔｈｅｈｉｐｏｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃｆｒａｃｔｕｒｅａｔｇｅｎｅｌｅｖｅｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｗａｓａｐｐｌｉｅｄ．ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬｇｅｎｅｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅ．Ｔｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆ７５ｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ（ＳＮＰｓ），ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬｇｅｎｅｓ，ｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎ７００ｕｎｒｅｌａｔｅｄＨａｎｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ，ｔｈｅｈａｐｌｏｔｙｐｅｓｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｕｓｉｎｇＨａｐｌｏｖｉｅｗ．Ａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｒｅｓｕｌｔｓａｎｄｔｈｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅｏｆｔｈｅｈｉｐｆｒａｃｔｕｒｅｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＥａｃｈｈａｐｌｏｔｙｐｅｏｆＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬｇｅｎｅｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｕｓｉｎｇＨａｐｌｏｖｉｅｗ．ＡｎｄｔｈｅｔａｇＳＮＰｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ３ＳＮＰｓ，ｒｓ２４６０９８５ｌｏｃａｔｉｎｇｉｎＯＰＧｇｅｎｅ，ｒｓ１８０５０３４ｌｏｃａｔｉｎｇｉｎＲＡＮＫｇｅｎｅ，ａｎｄｒｓ９５２５６２５ｌｏｃａｔｉｎｇｉｎＲＡＮＫＬｇｅｎｅ，ｗｅｒｅｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｈｉｐｆｒａｃｔｕｒｅ（ｒｓ２４６０９８５，Ｐ＝０畅０２９９；ｒｓ１８０５０３４，Ｐ＝０畅０２３４；ｒｓ９５２５６２５，Ｐ＝０畅０１４４），ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈａｔＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬｓｙｓｔｅｍｐｌａｙｅｄａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓａｌｓｏｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｈａｐｌｏｔｙｐｅｂｌｏｃｋ１（ＣＡＣＣ）ｉｎＯＰＧｇｅｎｅ，ｈａｐｌｏｔｙｐｅｂｌｏｃｋ１（ＡＡＡＡＡ）ｉｎＲＡＮＫｇｅｎｅ，ａｎｄｈａｐｌｏｔｙｐｅｂｌｏｃｋ１（ＣＡＡＡＣＣ）ａｎｄｈａｐｌｏｔｙｐｅｂｌｏｃｋ３（ＡＡＡＣＡＣＡ）ｉｎＲＡＮＫＬｇｅｎｅｗｅｒｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｆｒａｃｔｕｒｅ．Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｓｔｕｄｙｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０畅０５）．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ；ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬ；Ｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ；Ｈａｐｌｏｔｙｅ
基金项目：国家自然科学基金（３０５７０８７５）倡通讯作者：王金堂，Ｅｍａｉｌ：ｍｌｌｔｑ＠１６３．ｃｏｍ
２４８
ＢＭＣＯＦＯＰ
ＢｏｎｅｍｉｎｅｒａｌｃｏｎｔｅｎｔＢｏｎｅｍｉｎｅｒａｌｄｅｎｓｉｔｙＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓＯｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃＦｒａｃｔｕｒｅ
中国骨质疏松杂志 ２０１４年３月第２０卷第３期 ＣｈｉｎＪＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２０，Ｎｏ．３骨矿含量骨密度
骨质疏松性骨折骨质疏松症
ＢＭＤ
骨质疏松症是一种以骨量减少、骨组织显微结
构受损、骨矿物成分和骨基质等比例地不断减少、骨脆性增加和骨折危险度升高为特征的一种全身骨代谢障碍遗传性疾病，遗传率高达５０％～９０％。骨质疏松症的严重后果是骨折，以髋部骨折最为严重。骨质疏松症和骨质疏松性骨折（Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃｆｒａｃｔｕｒｅ，ＯＦ）是最常见的老年性疾病，它是中老年多发的一种退行性疾病，骨质疏松性骨折是骨质疏松症的最严重后果。
ＯＰＧ／ＲＡＮＫ／ＲＡＮＫＬ系统对骨质疏松的发病机制和治疗有着重要的影响，特别是ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ比率的改变可以直接影响破骨细胞的发育，进而影响到骨代谢。
１ 目的
以ＯＦ作为直接研究表型。用基因组对照关联法和结构关联法这两种无偏的关联统计方法研究候选基因与ＯＦ及其相关基因之间的关系。
２ 方法
征集了４００例大于５５周岁的ＯＦ病例（女性２４６人）和４００例大于５５周岁的健康人群（女性２２１人），其中分型成功的有７００例。所有的研究个体都来自汉族群体，加入研究时都签署了知情同意书，同时经过了严格的排除标准，减少非遗传因素对骨质疏松症的影响。２畅１ ＤＮＡ的提取
ＤＮＡ提取所用的试剂盒由百泰克生物公司生产，主要包括红细胞裂解液、细胞核裂解液、蛋白沉
淀液和ＤＮＡ溶解液。２畅２ ＳＮＰ分型实验Ｓ
１）ＤＮＡ稀释；２）准备反应预混试剂；３）点样；４）创建绝对定量（ＡＱ）反应板文件；５）执行扩增程序
ＳＮＰ分型时ＰＣＲ扩增需要的引物和探针序列由西安交通大学统计遗传学实验室设计完成，美国应用生物系统（ＡＢＩ）公司合成。２畅３ 读取扩增后荧光信号
Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ是从最初的基因型数据中得出连锁不平衡的计算结果和人群的单体型模式的强有力的工具。Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ在通过计算排除不符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡的ＳＮＰ和分型成功率小于５０％的个体。Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ计算出两两ＳＮＰ之间的Ｄ值，并依据Ｄ与预先所确定的域值范围的关系划分出染色体上单体域。在利用Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ识别单体型之前，需要将分型实验所得到的基因型数据整理成Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ所能识别的文件类型。
（１）ｉｎｆｏ文件
Ｉｎｆｏ文件是Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ识别单体型所需要的文件之一，记载有两列信息，第一列是ＳＮＰ的ｉｄ，第二列是各个ＳＮＰ在染色体上的位置。在记事本内整理好这些信息后将ｔｘｔ后缀修改成ｉｎｆｏ即成为Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ所能识别的ＳＮＰｄａｔａ。
（２）ｐｅｄ文件
Ｐｅｄ文件主要记载样本的基本信息和基因型信息。
（３）单体型识别操作过程
３ 结果
共７００个个体分型成功。
每个ＳＮＰ的分型结果整理后如下表所示（表１、２、３）。
表１ ＯＰＧ基因ＳＮＰ分型结果
Ｔａｂ畅１ ＴｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｏｆＳＮＰｓｉｎＯＰＧｇｅｎｅ
ｒｓ１５２１１５４ｒｓ２５１４６０２ｒｓ１０４５３０６１ｒｓ２４６０９８３ｒｓ２４６０９８５ｒｓ７８４１４８９ｒｓ７０００３１０ｒｓ３１０３９７０ｒｓ３１３４０９３
ＩＤ％Ｇｅｎｏ（１）
９８畅６９５９９畅９９８畅５９０畅９１００９９畅３１００９８畅７
ＭＡＦ（２）０畅４５５０畅１４０畅１８３０畅１４８０畅２７３０畅０６８０畅４６４０畅２８３０畅４６８
（３）
Ｍ．Ａ．ＳＮＰ编号１２３４５６７８９
ＳＮＰ＿Ａ－２０８７４１２ＳＮＰ＿Ａ－２１７７５９３ＳＮＰ＿Ａ－４２５８６４９ＳＮＰ＿Ａ－２１４１１５０ＳＮＰ＿Ａ－４２３５３４８ＳＮＰ＿Ａ－４２２７６５４ＳＮＰ＿Ａ－１８５９７２０ＳＮＰ＿Ａ－１９４６６９０ＳＮＰ＿Ａ－１８０８２６５
ＳＮＰ全称ＡＣ
ＡＡＡＣＣＡＣ
中国骨质疏松杂志 ２０１４年３月第２０卷第３期 ＣｈｉｎＪＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２０，Ｎｏ．３２４９
续表１
ＳＮＰ编号１０１１１２１３１４１５１６１７１８１９
ＳＮＰ＿Ａ－４２１３２０７ＳＮＰ＿Ａ－１９２９１８９ＳＮＰ＿Ａ－２１２９３６９ＳＮＰ＿Ａ－２０６４６７３ＳＮＰ＿Ａ－２０６６９９１ＳＮＰ＿Ａ－２２４１７３６ＳＮＰ＿Ａ－１９９４８４７ＳＮＰ＿Ａ－１９９４８４９ＳＮＰ＿Ａ－１９９４８５２ＳＮＰ＿Ａ－２１２９３２６ＳＮＰ全称ｒｓ３８９０８３２ｒｓ１０９５５９１１ｒｓ３１０２７２４ｒｓ３１０２７２５ｒｓ１１５７３８７０ｒｓ３１３４０６１ｒｓ１１５７３８３８ｒｓ１０５０５３４６ｒｓ１０５０５３４９ｒｓ１３８５４９５
ＩＤ％Ｇｅｎｏ（１）
９５畅９９２畅６９２畅９９４畅６９９畅１９９畅９９３畅６９９畅６９７畅１９８畅１
ＭＡＦ（２）０畅３０９０畅１２９０畅４１３０畅１２９０畅１５３０畅１４９０畅１４１０畅１６４０畅１５８０畅４７９
（３）
Ｍ．Ａ．ＡＣＣＣＣＣＣ
ＡＣＣ
表２ ＲＡＮＫ基因ＳＮＰ分型结果
Ｔａｂｌｅ２ ＴｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｏｆＳＮＰｓｉｎＲＡＮＫｇｅｎｅ
ＳＮＰ编号１２３４５６７８９１０
ＳＮＰ＿Ａ－１９００８５６ＳＮＰ＿Ａ－１９５８６６０ＳＮＰ＿Ａ－１９２１３６４ＳＮＰ＿Ａ－１７８８８５７ＳＮＰ＿Ａ－２２７６３９５ＳＮＰ＿Ａ－１９２１３７３ＳＮＰ＿Ａ－２２７８７０２ＳＮＰ＿Ａ－２００５７２６ＳＮＰ＿Ａ－１９２１３７９ＳＮＰ＿Ａ－２２７７３０２ＳＮＰ全称ｒｓ４９４１１２５ｒｓ８０８６３４０ｒｓ１８０５０３４ｒｓ１７０６９８９５ｒｓ７２３１８８７ｒｓ１７０６９９０４ｒｓ１２９５９３９６ｒｓ３０１７３５９ｒｓ１７６６５４３５ｒｓ１７０６９９５６
ＩＤ％Ｇｅｎｏ（１）
１００１００９７畅７９８１００９９畅７９６９９畅９１００９５畅７
ＭＡＦ（２）０畅３９４０畅３５８０畅３０８０畅１７３０畅１６４０畅１４８０畅１６７０畅３４８０畅０７４０畅０６６
（３）Ｍ．Ａ．Ｃ
ＣＣＣＡＣＣＣＣＡ
表３ ＲＡＮＫＬ基因ＳＮＰ分型结果
Ｔａｂｌｅ３ ＴｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｏｆＳＮＰｓｉｎＲＡＮＫＬｇｅｎｅ
ＳＮＰ编号１２３４５６７８９１０１１１２１３１４１５１６１７１８１９２０２１２２２３２４２５
ＳＮＰ＿Ａ－２１５１８５６ＳＮＰ＿Ａ－１８１６２０２ＳＮＰ＿Ａ－２１１８５０８ＳＮＰ＿Ａ－２１３０８９８ＳＮＰ＿Ａ－２１３０８９９ＳＮＰ＿Ａ－２１３０９０１ＳＮＰ＿Ａ－１８０４０６３ＳＮＰ＿Ａ－２２２８０５７ＳＮＰ＿Ａ－１８９４９１７ＳＮＰ＿Ａ－２１８８９１５ＳＮＰ＿Ａ－２０４０８２１ＳＮＰ＿Ａ－２０３３７２７ＳＮＰ＿Ａ－２２２６９８７ＳＮＰ＿Ａ－４２８３６１８ＳＮＰ＿Ａ－２１３０９４０ＳＮＰ＿Ａ－１７８５７６７ＳＮＰ＿Ａ－１９２３１９３ＳＮＰ＿Ａ－２０５７８７５ＳＮＰ＿Ａ－２１３０９５４ＳＮＰ＿Ａ－４１９４８０１ＳＮＰ＿Ａ－４２７３４５９ＳＮＰ＿Ａ－２０２３８３８ＳＮＰ＿Ａ－２１６０８６７ＳＮＰ＿Ａ－１８９１５９８ＳＮＰ＿Ａ－２２１４４４１ＳＮＰ全称Ｒｓ７９９２９７０Ｒｓ９５９４７３８Ｒｓ７９８７２１１Ｒｓ１０５０７５０７Ｒｓ１７５３５６７５Ｒｓ７９９４５３１Ｒｓ１２８７４１４２Ｒｓ７３２６４７２Ｒｓ１２８６４２６５Ｒｓ６５６１０４５Ｒｓ７３１６９５３Ｒｓ１３２４００５Ｒｓ９５２５６２５Ｒｓ７２０８２４Ｒｓ９３１５９１９Ｒｓ１７５３６００２Ｒｓ７３３４３０７Ｒｓ９２７６２３Ｒｓ９１２４２３Ｒｓ９５９４７７０Ｒｓ４９４２１３１Ｒｓ１７５３６０７１Ｒｓ９５２５６３０Ｒｓ９５３３１２８Ｒｓ９３１５９２３
ＩＤ％Ｇｅｎｏ（１）
１００９９畅７１００９４畅７９９畅７９８１００９３９９畅４９７畅１９４畅４９７９９畅６９９畅７９４畅６９９畅４９９畅９９９畅３９９畅７９６畅３９９畅４９５畅１１００９８畅９９８畅４
ＭＡＦ（２）０畅３２９０畅０８４０畅１３１０畅１２５０畅１３６０畅３９７０畅１３６０畅１０８０畅１８４０畅２３３０畅１９８０畅１７０畅１７６０畅１８５０畅２１０畅１８６０畅４３０畅１８７０畅２２０畅１４８０畅１９３０畅１６４０畅１９４０畅０５０畅３７３
（３）Ｍ．Ａ．Ｃ
ＣＣＣＣＣＡＡＣＣＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣ
２５０续表３
ＳＮＰ编号２６２７２８２９３０３１３２３３３４３５３６３７３８３９４０４１４２４３４４４５４６
ＳＮＰ＿Ａ－２０７５７４５ＳＮＰ＿Ａ－１９０６５４４ＳＮＰ＿Ａ－２２１０００７ＳＮＰ＿Ａ－２１４０２３４ＳＮＰ＿Ａ－２１１７４５４ＳＮＰ＿Ａ－４２２６６２８ＳＮＰ＿Ａ－１９２４２９７ＳＮＰ＿Ａ－２２００７６５ＳＮＰ＿Ａ－２１０１６６５ＳＮＰ＿Ａ－２２０２７４９ＳＮＰ＿Ａ－２０４９９１７ＳＮＰ＿Ａ－４２８３６３６ＳＮＰ＿Ａ－１９４５６９１ＳＮＰ＿Ａ－２１３２５８７ＳＮＰ＿Ａ－２１３１１２６ＳＮＰ＿Ａ－１８２１１０１ＳＮＰ＿Ａ－１８３２４３９ＳＮＰ＿Ａ－２２３０４０７ＳＮＰ＿Ａ－１８０８０９３ＳＮＰ＿Ａ－２２６８６５０ＳＮＰ＿Ａ－２１６７０４３ＳＮＰ全称中国骨质疏松杂志 ２０１４年３月第２０卷第３期 ＣｈｉｎＪＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２０，Ｎｏ．３Ｒｓ４９４１４３０Ｒｓ１７４５８０７８Ｒｓ１０３８４３５Ｒｓ１７５９６６８５Ｒｓ９５９４７８０Ｒｓ１６８３１２Ｒｓ９５３３１５６Ｒｓ９５２５６４１Ｒｓ４９４２１４３Ｒｓ２１４８０７３Ｒｓ３４６５９１Ｒｓ１３２５８０３Ｒｓ９５６７０１１Ｒｓ１３２５７９０Ｒｓ１０５０７５１３Ｒｓ９５３３２０８Ｒｓ７９９４４５７Ｒｓ２７６１１４７Ｒｓ６５６１０７２Ｒｓ１７５９７３６６Ｒｓ７９９８９３８
ＩＤ％Ｇｅｎｏ（１）
１００９９９９畅１９９畅３９８畅７９４畅９１００９３畅１１００９４畅７９９９８畅７９６畅７９７畅３９８畅９９９畅９９２畅４１００９７畅９１００９９畅６
ＭＡＦ（２）０畅１８７０畅０６１０畅３１１０畅１４６０畅３１６０畅４９７０畅４７７０畅２７１０畅３０５０畅２８７０畅１３６０畅３４１０畅４１４０畅４１７０畅２６５０畅２７０畅２３６０畅４０６０畅１５１０畅４９４０畅４９６
（３）
Ｍ．Ａ．Ｃ
ＣＣＡＡＡＡＣＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＡ
注：（１）％Ｇｅｎｏ：ＳＮＰ分型成功率；（２）ＭＡＦ：ＭｉｎｏｒＡｌｌｅｌｅＦｒｅｑｕｅｎｃｙ，最小等位基因频率；（３）Ｍ．Ａ．：最小等位基因
本研究中ＳＮＰ均符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡。
根据所选定的阈值，生成的连锁不平衡图谱分
别如下（图１、２、３、４、５、６）所示：
图１ 生成的连锁不平衡图谱（ＯＰＧ）
Ｆｉｇ畅１ Ｔｈｅｇｅｎｅｒａｔｅｄａｔｌａｓｏｆｌｉｎｋａｇｅｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ（ＯＰＧ）
说明：
图内显示了ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ基因的单体型、每个单体型在人群内所占的频率以及单体域之间的关系。单体型上面是ＳＮＰ的序号。
３畅１ ＳＮＰ位点的统计分析结果
本研究主要在７００个汉族人群中对３个基因ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ的７５个ＳＮＰ位点进行分型，统计分型结果，并且对分型结果进行了初步的统计学
中国骨质疏松杂志 ２０１４年３月第２０卷第３期 ＣｈｉｎＪＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２０，Ｎｏ．３２５１
图２ 生成的连锁不平衡图谱（ＲＡＮＫ）
Ｆｉｇ畅２ Ｔｈｅｇｅｎｅｒａｔｅｄａｔｌａｓｏｆｌｉｎｋａｇｅｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ（ＲＡＮＫ）
图３ 生成的连锁不平衡图谱（ＲＡＮＫＬ）
点击ＣｈｅｃｈＭａｒｋｅｒｓ后生成研究对象的最小等位基因的单体型图
Ｆｉｇ畅３ Ｔｈｅｇｅｎｅｒａｔｅｄａｔｌａｓｏｆｌｉｎｋａｇｅｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ（ＲＡＮＫＬ）
分析。首先采用自由度为１的χ检验验证ＳＮＰ位点是否达到ＨＷＥ，结果发现ＳＮＰｒｓ２７６１１４７位点未达到ＨＷＥ。
哈迪－温伯格不平衡（Ｈａｒｄｙ－ＷｅｉｎｂｅｒｇＤｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ，ＨＷＤ）产生的原因主要有近亲交配，群体分层及选择等。ＰＣＲ－引物位点突变或将杂合子错误分型为纯合子也会造成ＨＷＤ。虽然，ＨＷＥ
２
的背离，即ＨＷＥ检验后Ｐ＝１０或１０甚至更小时，也可以是疾病关联的征兆，但是对这种现象的解释还在摸索中。因此，当ＳＮＰ位点的分型结果不满足ＨＷＥ时，该位点通常不纳入后续的关联研究。３畅２ 利用ｈａｐｌｏｖｉｅｗ进行关联分析的结果
利用ｈａｐｌｏｖｉｅｗ进行关联分析的结果表明上面达到ＨＷＥ的ＳＮＰｒｓ２４６０９８５、ｒｓ１８０５０３４、ｒｓ９５２５６２５
－３－４
２５２中国骨质疏松杂志 ２０１４年３月第２０卷第３期 ＣｈｉｎＪＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２０，Ｎｏ．３
位点在２组人群中的差异具有统计学意义（Ｐ＜
０畅０５），ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ基因位点多态性对骨质疏松性骨折有影响（表４、５、６）。
表５ 利用ｈａｐｌｏｖｉｅｗ进行关联分析的结果ＯＰＧ
Ｔａｂｌｅ５ Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ
％Ｇｅｎｏ（１）
９８畅６９８畅７
ｒｓ１５２１１５４ｒｓ２４６０９８３ｒｓ２４６０９８５
ＩＤｕｓｉｎｇＨａｐｌｏｖｉｅｗ（ＯＰＧ）ＭＡＦ（２）０畅４５５０畅１４
（３）
Ｍ．Ａ．Ｐｖａｌｕｅ０畅０６９００畅８８６９０畅８１８３０畅２５８２０畅０２９９０畅５７４９０畅９２８６
图４ ＯＰＧ单体型图Ｆｉｇ畅４ ＨａｐｌｏｔｙｔｅｏｆＯＰＧ
ｒｓ１０４５３０６１ｒｓ７８４１４８９
ｒｓ２５１４６０２
Ａ／ＧＡ／ＣＣ／Ｔ
９９畅９１００１００９０畅９９８畅５
９５
０畅１４８０畅４６４０畅０６８０畅２７３
０畅１８３
Ｇ／ＴＡ／ＧＣ／ＧＣ／ＧＣ／ＴＣ／ＴＣ／Ｔ
ｒｓ１０９５５９１１ｒｓ１１５７３８７０ｒｓ１０５０５３４６ｒｓ１３８５４９５ｒｓ１１５７３８３８ｒｓ３１３４０６１ｒｓ３１０２７２５ｒｓ３１０２７２４
ｒｓ３８９０８３２
ｒｓ３１３４０９３
ｒｓ３１０３９７０
ｒｓ７０００３１０
９９畅３
ｒｓ１０５０５３４９
９８畅１９７畅１
９９畅６
９３畅６
９９畅９
９９畅１
９４畅６
９２畅９
９２畅６
９５畅９
０畅４７９０畅１５８
０畅１６４
０畅１４１
０畅１４９
０畅１５３
０畅１２９
０畅４１３
０畅１２９
０畅３０９
０畅４６８
０畅２８３
Ａ／ＧＣ／ＴＡ／ＧＣ／Ｇ
Ａ／Ｇ
Ａ／Ｇ
Ａ／Ｔ
Ｇ／Ｔ
Ｇ／Ｔ０畅２４２７０畅８５４３
０畅５７７６
０畅７６０２
０畅４２９５
０畅６６３４
０畅６２４９
０畅５１３１
０畅５９０８
０畅７６１２
０畅４７７６
０畅６１０１
图５ ＲＡＮＫ单体型图Ｆｉｇ畅５ ＨａｐｌｏｔｙｔｅｏｆＲＡＮＫ
表６ 利用ｈａｐｌｏｖｉｅｗ进行关联分析的结果ＲＡＮＫＬ
Ｔａｂｌｅ６ Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ
％Ｇｅｎｏ（１）
１００９９畅７
表４ 利用ｈａｐｌｏｖｉｅｗ进行关联分析的结果ＲＡＮＫ
Ｔａｂｌｅ４ Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ
ｕｓｉｎｇＨａｐｌｏｖｉｅｗ（ＲＡＮＫ）ｒｓ４９４１１２５ｒｓ１８０５０３４
ＩＤ％Ｇｅｎｏ１００１００９８
（１）
ｒｓ７９９２９７０ｒｓ７９８７２１１
ＩＤｕｓｉｎｇＨａｐｌｏｖｉｅｗ（ＲＡＮＫＬ）ＭＡＦ（２）０畅３２９０畅０８４
Ａ／ＧＣ／ＴＣ／ＴＣ／Ｔ
（３）
Ｍ．Ａ．Ｐｖａｌｕｅ０畅５４５３０畅３０９４０畅１５２５０畅０５３３
ＭＡＦ（２）
ｒｓ８０８６３４０
０畅３９４０畅３０８
Ｍ．Ａ．Ａ／ＧＣ／ＧＣ／Ｔ
（３）
９７畅７
０畅３５８
０畅４１６８０畅０２３４０畅１１７
Ｐｖａｌｕｅｒｓ９５９４７３８
０畅３７６５
ｒｓ１７５３５６７５ｒｓ１２８７４１４２ｒｓ１２８６４２６５ｒｓ１３２４００５ｒｓ９５２５６２５ｒｓ７２０８２４ｒｓ７３１６９５３ｒｓ６５６１０４５ｒｓ７３２６４７２ｒｓ７９９４５３１
ｒｓ１０５０７５０７
１００９８
９９畅７
９４畅７
ｒｓ１７０６９８９５ｒｓ１７０６９９０４ｒｓ３０１７３５９ｒｓ７２３１８８７
１００９６１００
０畅１７３０畅１４８０畅１６４
ｒｓ１２９５９３９６ｒｓ１７６６５４３５
９９畅７
９９畅９
０畅１６７０畅０７４０畅３４８
Ａ／ＧＡ／ＣＧ／Ｔ
Ａ／Ｇ
Ｃ／Ｔ０畅１００５０畅２８２９
１００９３
０畅２７３４０畅３３７８０畅１６２
ｒｓ１７０６９９５６９５畅７０畅０６６Ａ／ＴＣ／Ｔ０畅７６７９９畅７９９畅６
９７
９４畅４
９７畅１
９９畅４
０畅１８５０畅１７６
０畅１７
０畅１９８
０畅２３３
０畅１８４
０畅１０８
０畅１３６
０畅３９７
０畅１３６
０畅１２５
０畅１３１
Ａ／Ｃ
Ａ／ＧＣ／ＧＣ／ＴＣ／Ｔ
Ａ／Ｇ
Ｃ／Ｔ
Ｃ／Ｔ
Ａ／ＴＣ／Ｔ
０畅７７１２０畅０１４４
０畅６２８４
０畅８０３６
０畅５６３８
０畅８７８６
０畅３１７２
０畅５３８
０畅４０７９
０畅３９４４
图６ ＲＡＮＫＬ单体型图Ｆｉｇ畅６ ＨａｐｌｏｔｙｔｅｏｆＲＡＮＫＬ
中国骨质疏松杂志 ２０１４年３月第２０卷第３期 ＣｈｉｎＪＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２０，Ｎｏ．３２５３
续表６
表７ ＯＰＧ单体型关联分析结果
（２）ｒｓ９３１５９１９ＩＤ％Ｇｅｎｏ（１）
．ｒｓ９９畅９４畅４６ＭＡＦ０畅０畅２１Ｍ（３）
ＡＡｒｓ１７５３６００２０畅１８６４３ＡＣ／．／Ｔ／Ｔ
０畅ｐ８１４３ｖａｌｕｅｒｓ７３３４３０７９９畅Ｇ０畅０畅６９２４
ｒｓ９２７６２３９９畅９９１２４２３
９９畅３７０畅０畅２２１８７Ｃ０畅１３６２ｒｓｒｓ９５９４７７０
４９４２１３１９６畅９９畅３
０畅１４８ＡＡ／／ＴＴ
０畅６８６４／Ｇ０畅９９３８０畅２１４１
ｒｓ５０７１ｒｓ１７５３６０７１９５２５６３０１００
９５畅４１０畅０畅１９３Ａ／Ｇｒｓ９５３３１２８
９８畅９
０畅１６４ＣＧ／Ｔ
０畅０畅０５１９４０畅３７３
Ｃ／Ｔ０畅７４９７０畅５１８７
ｒｓ９３１５９２３
ＡＣ／／ＴＴ
０畅１６６６
ｒｓｒｓ１７４５８０７８４９４１４３０１００
９８畅４０畅Ａ／／Ｇ０畅４２７７
ｒｓｒｓ１０３８４３５
９９畅９９６０畅１８７Ａ／ＧＣ
０畅０畅７４８９
４３０８ｒｓ１７５９６６８５９５９４７８０９９畅０畅４９６９９畅１
０畅０６１ｒｓｒｓ１６８３１２０畅３１１０畅１４６ＡＣ／Ｔ０畅４７４６９８畅３０畅９１９９ｒｓ９５３３１５６
９４畅７９０畅３１６４９７
Ａ／ＧＣ／Ｇ０畅７３４８ｒｓ９５２５６４１
Ｃ／／ＴＴ０畅９９２５８２５７
ｒｓ４９４２１４３１００９３畅１０畅４７７
Ａ０畅ｒｓ２１４８０７３３４６５９１
１００
０畅９４畅０畅２７１
Ｃ／０畅８３８２
ｒｓ１３２５８０３
９９７０畅３０５Ａ／ＧＧ０畅５４０５
ｒｓ１３２５７９０９８畅９６畅７
０畅２８７０畅１３６
Ｃ／／ＴＴ
０畅８８１９８９７３ｒｓ９５６７０１１
０畅９７７３
ｒｓ０畅３４１
ＡＧ／０畅ｒｓ１０５０７５１３９７畅７０畅４１４Ａ／ＧＡ／Ｔ０畅７１９９
／Ｔ
Ｔ
０畅４４５５ｒｓ９５３３２０８７９９４４５７
９８畅３９
０畅４１７４０畅２７２６５Ａ／Ｇ０畅５３９５０畅０６９４
ｒｓ０５８６
ｒｓ２７６１１４７
９９畅９
０畅２３６ｒｓ６５６１０７２１００
９２畅ｒｓ１７５９７３６６７９９８９３８１００９７畅９
０畅０畅１５１
４０６ＡＣ／／Ｔ
Ｇ不符合０畅４９４ＡＡ／／Ｇ
０畅ＨＷＧ０畅１４５３０畅７７９２６２８１）Ｐ值小于０畅０５的以黑斜体显示。
（１）ＭＡＦ：ＭｉｎｏｒＡｌｌｅｌｅＦｒｅｑｕｅｎｃｙ，最小等位基因频率；（２）Ｍ．Ａ．：ＭｉｎｏｒＡｌｌｅｌｅ，最小等位基因。
２）ｈａｐｌｏｖｉｅｗ关联分析的结果表明ｒｓ２４６０９８５、３ｒｓ畅１８０５０３４、３ 利用ｒｓｈａｐｌｏｖｉｅｗ９５２５６２５进行的单体型关联分析结果
的多态性对骨折有影响。由于本研究中三个基因的单体域都有两个或者两个以上的ＳＮＰ组成，单个ＳＮＰ与骨折不存在关联不代表不同的单体型对表型没有影响。可能ＳＮＰ之间不同的组合方式会对表型产生影响。所以有必要分析每个单体域不同的单体型与ＯＦ之间的相关性。
利用ｈａｐｌｏｖｉｅｗ进行的单体型关联分析结果如下（表７、８、９）：
Ｔａｂｌｅ７ ＴｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｏｆＯＰＧｈａｐｌｏｔｙｐｅ
ＢｌｏｃｋＢｌｏｃｋＳＮＰｓＣＡＣＣ１１－５１，４，５ｈｔＳＮＰＦｒｅｑ．ＰＶａｌｕｅＡＡＣＣ０畅０畅３６２３０４０畅０畅０２７７ＣＡＡＣＡＣＣＡ０畅１８
０畅０畅０６０８０畅１４３
８９０９
６５１
Ｂｌｏｃｋ２１６，１７，１９，２１，
２２，２３，２５，２６，
１６，１７，２１，２５，
２７，２８，２９
２６，２８
ＣＡＡＡＡＡＡＣＡＣＡＣＡＡＡＡＣＡ０畅０畅２６５
２４６０畅０畅４０５４０畅６８５７ＣＣＣＡＡＡＣＡＣＡＡＡＡＣＡＡＣＡＡＡＡＣＡＣＡＣＡ
０畅１４７０畅１４３１４
０畅０畅０畅６５３３５４７
ＣＡＡＡＣＡＡＣＡＣＡＣＡＡＡＣＡＣ０畅０畅０１２０１２０畅３９２１０畅８５０１５２５２
表８ ＲＡＮＫ单体型关联分析结果
Ｔａｂｌｅ８ ＴｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｏｆＲＡＮＫｈａｐｌｏｔｙｐｅ
ＡＡＣＡＡＢｌｏｃｋＢｌｏｃｋ１ＳＮＰｓ４－９４，５，７，８，９ｈｔＳＮＰＦｒｅｑ．ＰＶａｌｕｅ０畅ＡＡＡＣＣＣＣＣＡＡ０畅５１３０畅０畅１７６０畅５８６８ＣＡＣＡＡ
０畅１４７０畅１３１４３８３１ＡＡＡＡＡ０畅１３３
０１６
０畅ＡＡＣＡＣ１１，１２，１３
１１，１３
０畅０１２０畅０畅６５５４０２２８２４４５
ＢｌｏｃｋＡＡ２ＣＡ０畅０畅５７７０畅ＡＣ０畅３４８０７４０畅０６２９０畅１６１４３３７８表９ ＲＡＮＫＬ单体型关联分析结果Ｔａｂｌｅ９ ＴｈｅＲＡＮＫＬｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｈａｐｌｏｔｙｐｅａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｏｆ
ＢｌｏｃｋＢｌｏｃｋ１ＳＮＰｓ２－９２，５，８，９ｈｔＳＮＰＦｒｅｑ．ＰＶａｌｕｅＡＡＡＡＡＣＡＡＣＣＣＡ０畅ＡＣＡＡＣＣ０畅５９２
０畅０畅１８１６
ＣＡＡＡＣＣ
０畅１３５
０畅３９１８０畅１１７３６３４ＡＡＡＡＣＣＡＣＡＡＡＣ
０畅０８５０畅０畅３９３９
０３９
Ｂｌｏｃｋ０畅０５３０１４ＡＡＡ２１１，１２，１３１１，１２
０畅１５７５０畅０畅７７３０畅ＡＣＣＣＣＣ
０畅０３６１８
０畅６２３１３１４－２２１５，１６，２０，２２
０畅２９５３９６１６
ＡＣＡＣＡＡＡＡＢｌｏｃｋＣＣＣＡＣＣＣＣ０畅０畅５７２１８４０畅０畅１５９５８０４６２５４续表６
中国骨质疏松杂志 ２０１４年３月第２０卷第３期 ＣｈｉｎＪＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２０，Ｎｏ．３调节者。正是因为骨在人体中的重要性，需要不断
ＦｒｅｑＡＣＡＣＡＣＡＣ
ＡＡＡＣＡＣＡＡＢｌｏｃｋＳＮＰｓｈｔＳＮＰ０畅０畅１７５．Ｐ０３６
０ＶａｌｕｅＡＣＡＡＡＣＡＡＢｌｏｃｋ２３－２７２３，２６，２７
０畅０３２０畅畅０１５２０畅２８０２
４９０７ＡＡＡＡ４ＡＡＣＡ０畅０畅０畅１６５６３９
０畅０畅７３０２４３７１
ＢｌｏｃｋＡＣＡＣＣＣＡＣ
ＡＡ５２９，３０２９，３０
０畅０３８１５７
０畅０畅３４０７２４１３
ＣＡＣＣ０畅０畅０畅１８８６２５
１８７０畅０畅０畅９９８２５２６８
Ｂｌｏｃｋ６４３０８ＡＡＣＡ
３２，３４３２，３４
０畅７７３７
ＡＣ０畅０畅４４３４９５
０畅３６－４３，４５，３９，４２，０畅０６２０畅９６２２４８７Ｂｌｏｃｋ７４６，５１，５２
４５，５２
ＡＣＡＡＡＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＡＡＡ
０畅４６３２９
０畅７２９７９２８
ＣＡＣＡＡＣＡＡＡＣＣＣＡＡＣＡＡＡＣＡＣＡＡＣＡＡＣ０畅０畅０畅０畅０６６１２３０１６
０畅０畅０畅３７０２９４８５ＣＣＣＣＣＣＡＡＣ０畅０畅４３７６２９５１
Ｂｌｏｃｋ８５５，５７－６０，
５５，５８，６０，
０畅０１３６３
６３
ＡＡＡＡＡＡ０畅３３４
ＣＣＣＡＡＡＣＣＣＣＣＣ２６４
０畅５７８７
０畅０畅０畅０畅０５８３
ＣＡＡＡＡＡＣＣＣＡＡＣ０畅０畅０８３１３７
１７５
０畅０畅７１７８８５６９
２７６１
利用ｈａｐｌｏｖｉｅｗ进行的单体型关联分析结果如
下：单体１ＣＡＣＣ型分析的结果表明，ＯＰＧ单体域１内内ＣＡＡＡＣＣ，ＲＡＮＫ单体域和单体域１内３内ＡＡＡＡＡＡＡＡＣＡＣＡＡ，ＲＡＮＫＬ都与骨折单体域存在关联，在病例组和对照组中的差异具有统计学意义（Ｐ＜０畅０５）。
ＯＦ在骨代谢方面的作用发病率作为表型研究据我们所知，这是第一次在中国人群研究中用ＯＰＧ、ＲＡＮＫＬ。研究结果表明ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬＯＰＧ、ＲＡＮＫ基因、联。ＯＰＧ基因和我们所研究的群体的、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ基因可能对中国汉族人群ＯＦ发病率关髋部ＯＦ发病率的变化起到影响。
４ 讨论
４畅１ ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬ轴与骨重塑
骨是人体至关重要的组织，它为每个组织提供内部的骨骼支持，骨骼形成并构建了人体的整体框架。骨也是造血细胞形成的地方和血液中钙浓度的
补充以维持它的强度和结构完整性。这种补充就是骨重建，是由两种平衡对立的力量所控制的：成骨细胞控制的骨形成和破骨细胞控制的骨吸收。
骨重塑发生在骨表面，骨重塑贯穿生命过程的始终，是骨组织赖以适应外界环境的主要生物调控
机制。根据Ｐａｒｆｉｔｌ［１］
的看法，骨重塑是骨吸收与骨形成的转变。成骨细胞和破骨细胞在一定时间内保持空间和时间上的协调稳定平衡关系，这种稳定的关系为骨形成提供了基础；最新的研究结果进一步揭示：成骨细胞、骨髓基质细胞与破骨细胞间协调稳定的关系是骨吸收与骨形成偶联的前提，在这一过程中ＲＡＮＫＬ－ＲＡＮＫ－ＯＰＧ轴起关键作用。
破骨细胞的成熟激活依赖ＲＡＮＫＬ的剂量性，而成骨细胞骨髓基质细胞可表达ＯＰＧ，ＯＰＧ不仅可以促进破骨细胞凋亡，还可以与ＲＡＮＫＬ竞争性结合ＲＡＮＫＬＲＡＮＫ，抑制破骨细胞生成，终止骨吸收。因此，４保持动态平衡的关键－ＲＡＮＫ－ＯＰＧ轴是骨重塑中骨吸收与骨形成畅２ 遗传因素与骨质疏松和骨质疏松性骨折
。遗传因素在骨量和骨强度的获得上也起着重要作用，虽然激素对骨代谢的调节很重要，钙摄入、运动和环境等对骨量也是不可忽视的因素，但在同一民族，同一地区、同一性别、同一年龄的人，骨量和骨强度也存在个体差异，一种基因的存在就决定一种性状，基因的多态性可使同类基因对同一信号出现不同程度的反应，结果也就引起不同程度性状的差异。有研究发现骨质疏松患者的亲属，无论男女都非常明显地低于对照组。另外一些研究发现，骨质疏松患者的女儿在绝经前骨量就明显低于正常母亲的女儿及绝经前参照人群的平均值，尽管不能完全排除饮食等生活习惯的影响，但仍高度提示骨矿含量有明显遗传相关性。有关双胞胎的研究显示遗传对身体不同部位骨量影响程度不同，影响程度从大到小依次为脊柱、股骨近端及前臂远端，呈向心性分布。随着年龄的增加，遗传影响减弱，而环境影响加强，两者存在相互消长的关系。骨质疏松的严重后果是骨质疏松性骨折，所以遗传因素也影响着骨质疏松性骨折，近年来越来越多的基因受到人们的关注，如维生素Ｄ受体基因、雌激素受体基因、胶原基因、护骨素基因等，在本研究中，利用ｈａｐｌｏｖｉｅｗ进行关联分析后发现ｒｓ２４６０９８５、ｒｓ１８０５０３４、ｒｓ９５２５６２５位点在２组人群中的差异具有统计学意义（Ｐ＜０畅０５），ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ基因位点多态性对骨质
中国骨质疏松杂志 ２０１４年３月第２０卷第３期 ＣｈｉｎＪＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２０，Ｎｏ．３２５５
疏松性骨折有影响，发现ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ基因和我们所研究的陕西关中汉族群体的ＯＦ发病率关联，说明遗传确实是骨质疏松的一个影响因素。４畅３ ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬ系统基因的意义
绝经后雌激素水平的下降导致骨质疏松，动物和人体研究均显示：雌激素作用于成骨细胞或基质细胞上的雌激素受体Ａ，可引起细胞表达ＯＰＧ，雌激素缺乏时ＯＰＧ表达降低而ＲＡＮＫＬ表达升高；如果补充雌激素可预防这种改变；补充雌激素可抑制
［２］
ＲＡＮＫＬ对破骨细胞前体的影响。在老年性骨质目标。
ＯＰＧ及该系统的其它成员对骨吸收增加的疾病具有治疗作用，这一观点已经被证实“给予成年小鼠ＯＰＧ可使骨量增加；给予卵巢切除小鼠ＯＰＧ可完全阻断骨量丢失”，在绝经后妇女中，使用单剂量ＯＰＧ可以抑制破骨细胞的分化和活化，进而抑制骨吸收；ＯＰＧ在多发性骨髓瘤和乳腺癌骨转移的治疗中也有较好疗效；ＯＰＧ与ＰＴＨ联用治疗ＰＭＯ也取得了较好的疗效，此外，ＲＡＮＫ－Ｆｃ融合蛋白对于抑制小鼠的骨吸收和恶性肿瘤的体液性高血钙具有疏松和药物诱导性骨质疏松中，ＲＡＮＫＬ－ＲＡＮＫ－ＯＰＧ调节轴也起着重要作用。已经有动物和人体实验显示ｍＲＮＡ，在年龄增长的过程中骨组织时表达降低，而ＲＡＮＫＬ、骨细胞的ＯＰＧ４，网状骨量也增加［３、４］
。表达升高；ＯＰＧ增加
４畅 ＯＰＧ－ＲＡＮＫ－ＲＡＮＫＬ系统基因的临床应用
骨质疏松症候选基因研究目前尚未应用于临床，但是其潜在性的应用表现在以下几个方面：
１）临床上对骨质疏松症的治疗目前尚无理想方法，预防性治疗是处理骨质疏松症最可靠的方式。因此，骨质疏松症候选基因的第一个潜在应用就是用来评估骨质疏松性骨折的危险性。如果能够分离并鉴定出ＯＦ高危因素和ＳＮＰ位点基因多态性的关系，我们就可以以此作为工具，筛选高危人群，以便进行有效的预防。
２）不同基因多态性的个体对同一治疗方法有不同的敏感度。候选基因多态性的检测能够提供给患者合适的治疗方法的信息，以决定最佳治疗方法。
３）候选基因研究的深入，那些确定影响ＯＦ发生率和骨代谢作用的基因必将成为新药研发的首选
治疗作用，Ｂｅｋｋｅｒ等２００１年首次报道使用ＯＰＧ－Ｆｃ融合蛋白单次皮下注射（３ｍｇ／ｋｇ）治疗绝经期后妇女的骨质疏松症，有效率达到８０％，而且疗效大于３周［５］
。相信很快，ＯＰＧ及其系统其他组分有成为治疗骨质吸收相关疾病理想药物的巨大潜能。
【
参
考
文
献
】
［１］ ＰａｒｆｉｔｌＡＭ．ＪｃｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍ，１９９４，５５（３）：２７３－２８．
［２］ ＭｉｃｈａｅｌＳｃｈｏｐｐｅｔ，ＫｌａｎｓＴ．Ｐｒｅｉｓｓｎｅｒ，ＬｏｒｅｎｚＣ．ＨｏｆｂａｕｅｒＲａｎｋ
ＬｉｇａｎｄｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄａｎｄｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎＶａｓｃｕｌａｒＰａｒａｃｒｉｎｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｓｏｆＢｏｎｅＭｅ－２００２，２２（４）：５４９－５５３．
Ｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＡｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒＴｈｒｏｍｂＶａｓｃＢｉ－ｏｌ，
［３］ ＦＵＧａｎｇ，ＤＵＪｉｎｇｙｕａｎ，ＹＡＮＧＳｈｕｈｕａ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ
ｄｅｃｌｉｎｅｉｎｖｉｔｒｏ．ｏｆＣｈｉｎｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎＪＥｘｐＳｕｒｇ，２００１，ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ１８（６）ｂｙ：５８３－ａｄｕｌｔ５８４．
ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｃｕｌｔｕｒｅｄ
［４］ ＣａｏＪ，ＶｅｎｔｏｎＬ，ＳａｋａｔａＴ，ｅｔａｌ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＲＡＮＫＬａｎｄ
ＯＰＧｃｏｒｒｅｌａｔｅｓｗｉｔｈａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄｂｏｎｅｌｏｓｓｉｎｍａｌｅＣ５７ＢＬ／６
［５］ Ｂｅｋｋｅｒｍｉｃｅ．ＪＰＪＢｏｎｅ，ＨｏｌｌｏｗａｙＭｉｎｅｒＲｅｓＤ，，Ｎａｋａｎｉｓｈｉ２００３，１８（２）Ａ，ｅｔ：２７０－ａｌ．Ｊ２７２．ＢｏｎｅＭｉｎｅｒＲｅｓ，
２００１；１６：３４８－３６０．
（收稿日期：２０１３－０８－０２）
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