总RNA的提取

1、每50mg组织中加入1ml TRIzol液，在匀浆器中将组织迅速充分研磨。 2、将匀浆液移入1.5ml EP管中，15-30℃ 孵育5分钟。

3、加入0.2ml氯仿/1ml TRIzol，剧烈震荡15秒钟，15-30℃孵育2-3分钟。

4、4℃离心15分钟（10800转/分钟），移上清至另一1.5ml EP管中，缓慢加入等体积异丙醇，混匀，15-30℃孵育10分钟。

5、4℃离心10分钟（10800转/分钟），弃上清，用75%乙醇（1ml/1ml TRIzol）洗RNA一次，混匀后4℃离心5分钟（8550转/分钟）。

6、弃上清，自然干燥15分钟，加入双蒸水20μl，混匀，55℃水浴5分钟使RNA充分溶解，既为提取的总RNA。 7、 RNA的鉴定和定量

8、鉴定完整性：提取的总RNA与样品缓冲液混合，在2%琼脂糖凝胶（含0.5μg/ml溴乙锭）中电泳，恒压80V，电泳缓冲液为1×TBE，待样品缓冲液中的溴酚蓝迁移约4cm停止电泳，将凝胶移至紫外透射仪下进行观察，完整的RNA电泳带28s、18s应清晰无降解，其中28s在宽度和亮度上是18s的2倍。

9、鉴定纯度：用五蒸水将提取的总RNA溶解液稀释1000倍，在紫外分光光度计上测260nm和280nm两个波长的吸光度（OD260和OD280），OD260/ OD280应在1.7-1.8以上，说明蛋白质污染少。

10、利用OD260值按如下公式进行RNA定量 RNA含量（µg/ml）= OD260×40×1000（稀释倍数）

可用TRIZOL试剂盒提取，步骤如下

1. 组织匀浆：将50-100mg组织放入1ml TRIZOL液中进行匀浆。（样本的容积不得超过TRIZOL液容积的10%）

2. 如果样本中的蛋白、脂肪、多糖含量较多，需进行以下额外分离步骤：匀浆后在2-8℃下，12000 xg离心10min 以除掉不可溶物质,保留含RNA的上清。

3. 分层: 将匀浆在15~30℃下孵育5min,使核蛋白复合物完全分离。加0.2ml氯仿,将试管盖 盖紧,剧烈震荡15秒,然后在15-30℃下孵育2-3min,<12000xg离心15min,混合物将分成: 最下面红色氯仿相、中间相和最上面的无色水相。RNA存在于水相。

4. 将含RNA的水相转移到一个新试管中,加0.5ml异丙醇，15-30℃孵育30min，12000xg离心10min。

5. 洗RNA：吸弃上清，用1ml 75%酒精洗RNA沉淀，混匀7500xg离心10 min。 6. 干燥：超净台。

7. 用RNase-free水溶解，加RNase抑制剂。-20℃保存。