1.琼脂糖凝胶电泳
含不同量琼脂糖的凝胶的分离范围
凝胶中的琼脂糖含量〔％（w/v）〕
0.3
0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0
常用电泳缓冲液
缓冲液
使用液
1×:0.04mol/L Tris－乙酸
Tris-乙酸（TAE）
0.001mol/L EDTA
100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
10×:108g Tris碱
1×:0.09mol/L Tris-磷酸
Tris-磷酸（TPE）
0.002mol/L EDTA
40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
5×:54g Tris碱
Tris-硼酸（TBE）
0.001mol/L EDTA
20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
碱性缓冲液
1mmol/L EDTA
2ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
a．TBE浓溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5
×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以往都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮存液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的1×TBE，是琼脂糖凝胶电泳时使用液浓度的2倍。聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流通量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
b. 碱性电泳缓冲液应现用现配。
b
a
线状DNA分子的有效分离范围（kb）
5－60 1－20 0.8－10 0.5－7 0.4－6 0.2－3 0.1－2
浓储存液（每升） 50×:242g Tris碱 57.1ml冰乙酸
15.5ml 85％磷酸（1.679g/ml）
0.5×:0.045 mol/L Tris-硼酸
27.5g硼酸
1×:50mmol/L NaOH 1×:5ml 10mol/L NaOH
凝胶加样缓冲液
缓冲液类型
Ⅰ
6×缓冲液 0.25％溴酚蓝 0.25％二甲苯青FF 40%(w/v)蔗糖水溶液
0.25％溴酚蓝 0.25％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（Ficoll）（400型；
Pharmacia）水溶液
0.25％溴酚蓝 0.25％二甲苯青FF 30％甘油水溶液
0.25％溴酚蓝 40%(w/v)蔗糖水溶液
碱性加样缓冲液 300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA 18%聚蔗糖（Ficoll）（400型；
Pharmacia）水溶液 0.15%溴甲酚绿 0.25％二甲苯青FF
贮存温度 4℃
Ⅱ 室温
Ⅲ 4℃
Ⅳ 4℃
Ⅴ 4℃
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品浓度，以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利；含有在电场中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖凝胶中泳动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBE作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5－1.4％的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。 选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚蓝更为鲜明。
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳
DNA 在聚丙烯酰胺凝胶中的有效分离范围
丙烯酰胺〔％（w/v）〕a 有效分离范围（bp）
3.5
5.0 8.0 12.0 15.0 20.0
1000－2000 80－500 60－400 40－200 25－150 6－100
二甲苯青FFb
460 260 160 70 60 45
溴酚蓝b 100 65 45 20 15 12
a. N,N’-亚甲基双丙烯酰胺占丙烯酰胺浓度的1/3.
b. 给出的数字是迁移率与染料相同的双链DNA片断的粗略大小（核苷酸对） 30％丙烯酰胺：
丙烯酰胺 29g
N,N’-亚甲基双丙烯酰胺 1g 加水至100ml
将溶液加热至37℃使化学药品溶解
小心：丙烯酰胺是强烈的神经毒素，可经皮肤吸收。丙烯酰胺的作用具有累积性。称取粉末状丙烯酰胺及亚甲双丙烯酰胺时必须带手套和面具。取用含上述化学药品的溶液也要戴手套。尽管可以认为聚丙烯酰胺无毒，但鉴于其中可能含有少量未聚合的丙烯酰胺，故仍应小心处理。 10％过硫酸铵 过硫酸铵 1g 加水至10ml
可在4℃保存数周。
制备聚丙烯酰胺凝胶所用试剂的体积（总体积100ml）
试剂 30％丙烯酰胺
水 5×TBE 10%过硫酸铵
制备不同浓度（％）凝胶所用试剂的毫升数
3.5％ 11.6 67.7 20.0 0.7
5.0％ 16.6 62.7 20.0 0.7
8.0％ 26.6 52.7 20.0 0.7
12.0％ 40.0 39.3 20.0 0.7
20.0％ 66.6 12.7 20.0 0.7
每100ml丙烯酰胺凝胶溶液加35ulTEMED（N,N,N’,N’-四甲基乙二胺），旋动容器混匀。
0. 5M EDTA(PH8.0)
1.称取186.1g Na2EDTA·2H2O,置于1L烧杯中。 2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。 3.用NaOH调节PH值至8.0（约20gNaOH）。 注意：PH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4.加去离子水将溶液定容至1L。 5.适量分成小份后，高温高压灭菌。 6.室温保存。
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