中国病原生物学杂志 ２０１５年４月 第１０卷第４期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ａｐｒｉｌ ２０１５，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．４ ・ ３７７ ・ ＤＯＩ：１０．１３３５０／ｊ．ｃｊｐｂ．１５０４２１ ・综述・ Ｄ一氨基酸在生物膜分散中的作用研究进展 佘鹏飞，陈丽华，许欢，伍勇一 （中南大学湘雅三医院检验科，湖南长沙４１００１３） 【摘要】细菌能粘附于物体表面而形成生物膜，生物膜的存在极大的增加了细菌的耐药性，常规抗生素难以清除生物 膜。近年来，科学家发现枯草芽孢杆菌生物膜成熟后期能自发分泌具有分散作用的 氨基酸，这些Ｉ）Ｉ氨基酸也能分散 葡萄球菌和铜绿假单胞菌的生物膜。Ｉ）Ｉ氨基酸对人体无毒，有望成为控制生物膜感染的新措施。 【关键词】生物膜；耐药；【）Ｉ氨基酸；Ｌ－氨基酸；枯草芽孢杆菌；综述 【中图分类号】Ｒ３７ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７３—５２３４（２０１５）０４—０３７７—０４ ［Ｊｏｕｒｎａｌ ｏＪ’Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１５ Ａｐｒ；１０（４）：３７７—３８０．］ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｄ－ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｏｎ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏｆｉｌｍ ＳＨＥ Ｐｅｎｇ—ｆｅｉ，ＣＨＥＮ Ｌｉ—ｈｕａ，ＸＵ Ｈｕａｎ，ＷＵ Ｙｏｎｇ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ｘｉａｎｇｙａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ。 Ｃｅｎｔｒａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ ４１００１３，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｍｏｓｔ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｒｅ ａｂｌｅ ｔｏ ｆｏｒｍｉｎｇ ｂｉｏｆｉｌｍｓ ｗｈｅｎ ｇｒｏｗｉｎｇ ｏｎ ｂｉｏｔｉｃ ｏｒ ａｂｉｏｔｉｃ ｓｕｒｆａｃｅｓ．Ｔｈｅ ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ ａ ｂｉｏ ｆｉｌｍ ｇｒｅａｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ａ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ＇ｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ．Ｂｉｏｆｉｌｍｓ ａｒｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ ｈｅｌｄ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｂｙ ａ ｐｏｌ— ｙｍｅｒｉｃ ｍａｔｒｉｘ．Ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｐａｓｔ ｆｅｗ ｙｅａｒｓ，ｓｃｉｅｎｔｉｓｔｓ ｈａｖｅ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｐｒｏｄｕｃｅｓ ｃｅｒｔａｉｎ Ｄ—ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ．ａｎｄ ｔｈｅｓｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ａｃｔ ａｓ ａ ｎａｔｕｒａｌ ｓｉｇｎａｌ ｆｏｒ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｕｒｅ ｂｉｏｆｉｌｍ ｂｙ ｃａｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｍａｔｒｉｘ．Ｔｈｅｓｅ Ｄ—ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｃａｎ ａｌｓｏ ｔｒｉｇｇｅｒ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙ１ｏｃ。ｃｃｕｓ ａｎｄ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｂｉｏ— ｆｉｌｍ．Ｄ—ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ａｒｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ａｎｄ ｒｅｌｅａｓｅｄ ｂｙ ｍａｎｙ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｆｏｕｎｄ ｔｏ ｌａｃｋ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｔｏｘｉｃｉ— ｔｙ，ＳＯ ｔｈｅ ｈｏｐｅ ｉｓ ｔｏ ｕｓｅ ｔｈｅｓｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｔｏ ｃｏｍｂａｔ ｂｉｏｆｉｌｍ－－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｂｉｏｆｉｌｍ；ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；Ｄ－ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ；Ｌ—ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ；Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ；ｒｅｖｉｅｗ 细菌在自然界或人体内有两种存在形式，即浮游状态和 互融合形成ｊ维结构；５）生物膜成熟后期：深层细菌因营养物 生物被膜（ｂｉｏｆｉｌｍ）状态。生物被膜相关理论由Ｂｉｌｌ Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ 质缺乏、氧气不足等原因而死 ，并聚集；６）生物膜分散期：在 于１９７８年首次提 。随后，科学家发现生物膜广泛涉及包括 微菌落发育的后期，生物膜三维结构会出现一些空洞，最终微 医学、丁业、农业和工程学在内的多个领域，Ｂｉｌｌ Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ也因 菌落顶部会破裂并散播游离“种子”，散播的“种子”一旦遇到适 其在生物膜研究中的突 贡献而被誉为“生物膜之父”Ｉｌｌ。 宜的环境将会重新粘附而形成新的生物膜［５］。生物膜形成及 生物膜相关感染非常普遍，如：隐形眼镜相关角膜炎、中心 分散过程都受到环境因素（如：噬菌体、毒素和其他原生动物 静脉导管相关感染、周同静脉导管相关感染、导尿管相关感染、 等）的调节，这些信号主要通过作用于群体密度感应（ｑｕｏｒｕｍ 慢性鼻窦炎、肺囊性纤维化（ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ，ＣＦ）以及伤口慢性 ｓｅｎｓｉｎｇ，Ｑｓ）系统和（或）通过第二信使环鸟苷二磷酸（ｃ—ｄｉ～ 感染等Ｉ２］。常规的抗生素治疗常常难以根除生物膜菌，且因生 ＧＭＰ）而发挥效应 ］。 物膜胞外基质的屏障作用，到达生物膜深层的抗生素常处于亚 ２生物膜相关耐药机制 抑菌浓度，更容易诱发细菌耐药性的产生口 。这常导致感染迁 生物膜的耐药机制相当复杂，除了具备与浮游菌共有的一 延不愈，给临床治疗带来很大的困难。 些耐药机制外，还有其自身特异性的耐药机制。 １ 细菌生物膜的形成 ２．１ 胞外基质相关耐药 富含多糖、蛋白质及ｅＤＮＡ的胞外 生物膜是细菌在不利环境下依附于某些载体表面，分泌胞 基质在生物膜表面形成了一层厚厚的生物屏障，阻碍抗菌药物 外多聚物（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ＥＰＳ）和基质将自 的渗透。如：铜绿假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）的胞外多 身微菌落包裹，形成能抵抗外界不利环境包括抗生素在内的高 糖主要由Ｐｓｉ和Ｐｅｌ组成，研究发现ｐｅｌＡ基因突变的铜绿假单 度组织化和系统化的膜性聚合物［４］。ＥＰＳ主要由蛋白质、脂 胞菌对抗生素明显比野生型更敏感 ］。而粘液型铜绿假单胞 类、多糖和胞外ＤＮＡ（ｅＤＮＡ）组成。生物膜的整个生理过程可 菌的胞外多糖除了Ｐｅｌ，Ｐｓｉ外还有由藻酸盐形成的粘液，进一 以大致划分为６个阶段：１）初始粘附期：单个的浮游菌游动并 步增加了生物膜的耐药性 ］。ｅＤＮＡ也是生物膜胞外基质重要 粘附于物体表面，此时浮游菌的粘附是可逆的，既可继续聚集 而形成生物膜，也可以从粘附状态返回浮游状态；２）微菌落形 成期：随着细菌不断粘附聚集而逐渐形成微菌落，此时细菌的 ＊【基金项目】湖南省自然科学基金（Ｎｏ．１４ＪＪ７０１５）；中南大学研 粘附是不可逆的；３）生物膜形成初期：微菌落中的细菌相互作 究生自主探索创新基金（Ｎｏ．２０１５ｚｚｔｓ３２３）。 ＊＊【通讯作者】伍勇，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｕｙｏｎｇ ｘｙ＠１２６．ＣＯＩ１］ 用并传递信号对自身进行调节，使微菌落不断强大从而形成成 【作者简介】佘鹏飞（１９９１），男，湖南人，研究生在读。主要研 熟的生物膜；４）生物膜成熟期：微生物菌落持续发展增大并相 究方向：微生物耐药机制。Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｈｅｐｅｎｇｆｅｉ—ｘｙ＠１２６．ｃｏｒｎ ・ ３７８ ・ 组成成分之一，ｅＤＮＡ能诱导操纵子ＰＡ３５５２ ３５５９的表达，这 些表达产物能介导生物膜对阳离子抗生素的耐药 。蛋白质 是构成生物膜的重要物质，在生物膜中除了有生物学功能的蛋 ｎ之外，还有很多蛋白仅仅构成生物膜结构，这些蛋白质连同 胞外多糖和ｅＤＮＡ共同形成和维持生物膜的形态结构。 ２．２生物膜能抵抗采自抗生素的氧应激包括 内酰胺类、 氟喹诺酮类和氨基糖苷类在内的抗生素都能通过诱导有细胞 毒性的活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）（如：（）２・ ）的产 生而杀灭大肠埃希菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）和金黄色葡萄球菌 （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ） 。而生物膜菌中超氧化物歧化酶 （ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）和具有还原作用的谷胱甘肽的表 达都要比相应浮游菌高，这些物质能有效抵抗ＲＯＳ的毒性作 用＿】”］，从而增加生物膜耐药性。 ２．３基因表型的变异细菌的很多基因在细菌与固体表面相 互作用时受到了双向调节，因而使得生物膜菌基因表达与浮游 菌不同。在慢性肺ＣＦ患者中分离出的铜绿假单胞菌能形成小 菌落突变株（ｓｍａｌｌ ｃｏｌｏｎｙ ｖａｒｉａｎｔｓ，ＳＣＶｓ），ＳＣＶｓ也存在于体外 构建的生物膜模型，ｓＣＶｓ中的细菌生长缓慢，对抗生素极其耐 药。近年来，科学家发现，ＳＣＶｓ中的细菌高度耐药是由于多因 素多重基因突变使细蔺外膜的组成成分改变并使多重耐药的 外排泵表达增多［ 。此外，科学家在生物膜中还发现一种处于 休眠状态或缓慢牛长状态而没有基冈型改变的细菌且对抗生 素极不敏感，并命名为持留菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）。持留菌存生物膜的 彤成中非常重要，是导致生物膜无法根除的主要原因。一旦这 些持留菌转移至有利环境可继续分裂增殖，形成新的生物 膜 。 ２．４生物膜特异性耐药基因的表达 生物膜耐药性的产生一 部分是因为浮游菌的各种耐药表型几乎在生物膜中都有所加 强，另一部分来源于特殊的耐药基闵的表达。浮游状态下铜绿 假单胞菌中的ｎｄｖＢ基因能编码催化合成细胞壁重要成分ｃｙ— ｃｌｉｃ一０（１，３）一葡聚糖所需的葡糖基转移酶。而生物膜状态下的 ｎｄｖＢ则可以通过诱导乙醇氧化相关基因的表达而增加铜绿假 单胞菌的耐药性 ］。此外，生物膜状态下铜绿假单胞菌的操纵 子ＰＡ１８７５—１８７７可以分别编码外膜蛋白ＯｐｍＩ～ＡＴＰ合盒 （ＡＴＰ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ，ＡＢＣ）转运体和一种外膜融合蛋白 ＨｌｙＤ同系物，这些成分组合在一起相当于外排泵，能介导铜绿 假单胞菌对妥布霉素和环丙沙星的耐药 。 ３ Ｉ）．氨基酸分散生物膜 自然界中存在的氨基酸以Ｉ 型为主。【）＿氨基酸是通过相 应的Ｌ一型氨基酸存消旋酶或差向异构酶催化作用下使手性 一 碳原子消旋或差向异构化而形成，也可通过ａ一酮酸的胺化作用 产生Ｊ ］。细菌在静止期能产生Ｉ）Ｉ氨基酸，细菌体内的消旋酶 来自ｙｌｍＥ和ｒａｃＸ突变体 ］。某些【）Ｉ氨基酸对细菌是有利 的，如： 氨基酸可以作为肽聚糖的重要组成成分；可以调节细 菌芽孢的形成等。若这些 氨基酸的合成受到影响将会导致 细菌死亡。然而．近几年科学家发现某些【）Ｉ氨基酸在抑制生物 膜形成或分散成熟的生物膜中具有很大的潜力￣１ ７ １ ８］，有望成为 治疗生物膜感染的新措施。 ３．１ Ｄ－氨基酸与枯草芽孢杆菌 Ｉ）Ｉ氨基酸的分散作用首次发 现于枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）形成的生物膜中ｌｌｃ］。枯草 芽孢杆菌是一类能产芽孢的益生菌，其研究已经有１７８年的历 中国病原生物学杂志 ２０１５年４月 第ｉｏ卷第４期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ＿Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ａｐｒｉｌ ２０１５，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．４ 史，能分泌多种低分子量的抗菌肽、细菌素等抗菌活性物质抑 制病菌的生长，其研究主要集中存Ｔ业发酵、食品保健、农业生 产和食品保健方面 ］。枯草芽孢杆菌能够在固体表面或气 液交界面形成复杂的生物膜，是研究生物被膜良好的模式菌 株。２０１０年Ｂｏｌｅｓ等口 首次发现其能自发性产生 氨基酸，不 但能有效分散自身生物膜也能分散铜绿假单胞菌和金黄色葡 萄球菌形成的生物膜。随后，有关【）Ｉ氨基酸的研究相继展开。 Ｂｏｌｅｓ等 发现，生长在液体培养基中成熟的枯草芽孢杆 菌生物膜能诱导自身分散，其上清液提取物仍然有分散作用， 随后对其进行分析、纯化发现这些效应物质是【）Ｉ氨基酸，且主 要是Ｄ一亮氨酸（Ｄ－Ｉ ｅｕ）、１３－蛋氨酸（Ｄ－Ｍｅｔ）、ＮＩ色氨酸（Ｄ－ｔｒｙ）和 ｒ）Ｉ酪氨酸（１￣ｔｒｙ），这些 氨基酸能在毫摩尔甚至微摩尔数量 级水平下就能有效分散生物膜，然而相应的Ｌ型氨基酸不但都 没有分散效果，还能特异性的拮抗【）Ｉ氨基酸的作用 。此外， 其他类型的 氨基酸如 丙氨酸（Ｄ－Ａｌａ）、【）Ｉ苯丙氨酸（１３－ Ｐｈｅ）等却没有相应的分散效果。Ｄ一氨基酸分散生物膜的作用 主要是通过对细菌胞外蛋闩合成的毒性作用而完成，【）＿氨基酸 能够抑制细菌的生长和产生物膜基质相关基因的表达（如ｅｐｓＡ 和ｔａｐＡ）Ｅｚｓ］。枯草芽孢杆菌生物膜的胞外基质主要由胞外多 糖和淀粉样纤维组成，淀粉样纤维由操纵子ｙｑｘＭ—ｓｉｐＷ ｔａｓＡ 表达的ＴａｓＡ蛋白组成，ＴａｓＡ是一种使生物膜连接在一起的纤 维蛋白，对维持生物膜结构和功能有重要作用 ， 。这些【）＿ 氨基酸正是通过抑制ＴａｓＡ蛋白的表达并作用于ＹｑｘＭ蛋白 （纤维形成和定位所必须的蛋白之一）使ＹｑｘＭ蛋白在细胞壁 表面错误定位，最终使淀粉样纤维不能正常连接细胞壁而分散 生物膜口 。存随后的研究中发现Ｄ一氨基酸之所以能够分散枯 草芽孢杆菌的另一个重要原因是枯草芽孢杆菌的ｄｔｄ基 发生 了突变。ｄｔｄ基因编码Ｄ－Ｔｙｔ—ｔＲＮＡ脱酰（基）酶，【）１Ｔｙｔ—ｔＲＮＡ 脱酰（基）酶的主要功能是移除ｔＲＮＡ中错配了的Ｄ一氨基酸。 研究者发现在能被【）＿氨基酸分散的枯草芽孢杆菌ＮＣＩＢ３６１０ 中，编码Ｄ－Ｔｙｔ—ｔＲＮＡ脱酰（基）酶的ｄｔｄ基因起始密码子ＡＵＧ 点突变成编码赖氨酸的ＡＡＧ。Ｄ－Ｔｙｔ—ｔＲＮＡ脱酰（基）酶受损 的枯草芽孢杆菌对错配入肽聚糖中的Ｉ）Ｉ氨基酸没有修复功能， 导致不能识别并纠正错误掺入肽链的 氨基酸而导致生物膜 分散 。， 。 ３．２ Ｄ－氨基酸与葡萄球菌 葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）是临床 中最常见的革兰阳性球菌，其中金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球 菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）为最常见的生物被膜菌，易粘 附在医学没备表面或宿主组织形成生物膜，导致生物膜相关感 染 ，如：表皮葡萄球菌常粘附于人工心瓣膜和各种导管等；金 黄色葡萄球菌则常直接侵犯宿主组织，在可粘附组织上引发生 物膜感染，如：伤口感染、骨髓炎、肺ＣＦ、脓毒性关节炎和心内 膜炎等ｌｌ 。生物膜一旦形成，则耐药性大大增加，若不及时处 理则可进一步侵犯血流形成败血症，最终危机病人生命ｌ＿２ 。因 此，抑制葡萄球菌生物膜形成或及时分散已存在的生物膜至关 重要。 与枯草芽孢杆菌类似，金黄色葡萄球菌在静止期也能自发 产生一系列Ｉ）Ｉ氨基酸。这些Ｉ）＿氨基酸对葡萄球菌形成的生物 膜同样有抑制或分散作用。在这些【）＿氨基酸中，以Ｄ－Ｐｈｅ、ＩＮ 脯氨酸（Ｄ－Ｐｒｏ）和Ｄ－ｔｙｒ的效果最明显，而其它【）Ｉ氨基酸的作用 很弱甚至没有作用。这些 氨基酸的浓度在５００ ｍｏｌ／Ｌ时就 中国病原生物学杂志 ２０１５年４月 第１０卷第４期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ａｐｒｉｌ ２０１５，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．４ 能明显抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成，且相互之间有协同 作用，当这些【）Ｉ氨基酸等比例混合时，只需要１０ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ即可 达到相同的抑制效果。此外，这些【）＿氨基酸还能抑制不同材质 （如：聚苯乙烯、环氧树脂和玻璃表面等）上生物膜的形成［１ 。 然而，如果要达到分散成熟生物膜效果，则需要更高浓度（１０ ｍｍｏｌ／１ ）的 氨基酸。这些Ｉ）Ｉ氨基酸不仅能够在体外抑制和 分散葡萄球菌形成的生物膜，对大鼠体内骨植入物表面形成的 生物膜也有相同的作用［ 。然而，与这些Ｉ）Ｉ氨基酸相对应的 Ｉ 一型氨基酸均无抑制和分散生物膜的作用。此外，Ｄ一氨基酸的 分散作用并非因为杀灭生物膜中的细菌，因为抑制或分散剂量 的【）Ｉ氨基酸并不影响生物膜菌或浮游菌的增殖Ｅｚｇ］。其发挥效 应的原理类似于枯草芽孢杆菌：一方面作用于金黄色葡萄球菌 生物膜的基质成分抑制金黄色葡萄球菌细胞壁中ＴａｓＡ的合 成，并且阻碍淀粉样蛋白在细胞壁表面的正常定位而发挥作 用；另一方面，Ｄ一氨基酸虽然不能阻止细菌的起始粘附，但可抑 制后期细胞的聚集而阻止生物膜形成 。 ３．３ Ｄ－氨基酸与铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌为临床分离率 最高的革兰阴性杆菌，为常见的机会致病菌。常导致呼吸道和 伤口等部位的感染，铜绿假单胞菌容易形成生物膜，大大增加 了其耐药性，成为临床治疗的棘手问题。铜绿假单胞菌相关生 物膜主要见于肺ＣＦ、伤口慢性感染、导管相关尿路感染、慢性 鼻窦炎、慢性中耳炎以及隐形眼镜相关角膜炎等＿３ 。科学家发 现从枯草芽孢杆菌分离出的【）Ｉ氨基酸同样也能抑制铜绿假单 胞菌生物膜形成，也能分散铜绿假单胞菌成熟的生物 膜ｌ】 。然而Ｉ）＿氨基酸对革兰阴性菌生物膜的抑制或分散 作用的分子机制目前还未完全阐明Ｄ 。Ｂｒａｎｄｅｎｂｕｒｇ等 ，通 过测量生物膜相关生物学指标，如：生物膜总量、平均厚度及最 大生物膜厚度的变化来研究两种【）＿氨基酸混合物即：Ｄ－Ｌｅｕ＋ Ｄ－Ｍｅｔ或Ｄ－ｔｒｙ＋Ｄ－ｔｙｒ对用流动小室法构建的铜绿假单胞菌生 物膜分散作用时发现：与未用 氨基酸处理的对照组相比，【）＿ 氨基酸混合物能有效分散大部分铜绿假单胞菌形成的生物膜， 生物膜总量有所减少、生物膜平均厚度减少了７８ 、生物膜最 大厚度减少了５９ 。 然而，与之前研究不同的是，研究者通过绿色荧光蛋白和 碘化丙啶对死／活细胞进行荧光染色后发现这些效应不单纯是 Ｉ）＿氨基酸分散作用所导致的，Ｄ一氨基酸还能杀灭生物膜中７１ 的活细胞，而未用【）Ｉ氨基酸处理的对照组几乎无死细胞口 。 氨基酸对铜绿假单胞菌的杀菌作用，一方面可能是因为这些 ｒ）Ｉ氨基酸在较高浓度时能作用于某些肽酶和蛋白酶，抑制细胞 壁的合成并能改变肽聚糖的代谢。另一方面，Ｉ）＿氨基酸还能掺 人细胞壁重要成分肽聚糖中，直接导致结构上的损害［ａ４－３ ５］。此 外，与Ｋｏｌｏｄｋｉｎ—Ｏａｌ等ｍ 的发现不同，Ｂｒａｎｄｅｎｂｕｒｇ等 。 还发 现Ｌ－ｔｒｙ也能抑制生物膜的形成并且有一定的分散效果，与【）＿ ｔｒｙ的作用效果相当，且两者联用时有协同作用。研究者发现， 与对照组相比，用１０．０ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｄ－ｔｒｙ处理铜绿假单胞菌生物 膜２４ ｈ后能抑制７１ 的生物膜，４８ｈ达７８ 。类似，１０．Ｏ ｍｍｏ｜／Ｌ Ｌ—ｔｒｙ处理２４ ｈ能抑制８６ 生物膜形成，４８ ｈ能抑制 ８１ 生物膜形成。Ｌ ｔｒｙ能增加ＰＡ的游动性，抑制细菌起始的 粘附，这可能是导致生物膜抑制的原因之一［３ 。 ３．４其他此外，Ｄ氨基酸与其他抗菌药物联用也有协同作 用。例如：【）Ｉ半胱氨酸（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－或Ｉ 一天冬氨酸（Ｄ－／Ｌ—Ａｓｐ）、 ・ ３７９ ・ ｒ）Ｉ或Ｌ一谷氨酸（Ｉ）＿ Ｉ，Ｇｌｕ）能显著提高乳链菌肽抗变形链球菌 活性 。 ］；Ｄ－氨基酸能增强ＭＲＳＡ对克林霉素、利福平和万古霉 素的敏感性，能部分恢复多重耐药铜绿假单胞菌对黏菌素、环 丙沙星、亚胺培南、头孢他啶和他唑巴坦的敏感性＿３７ ；１３－氨基酸 还能与３’，３’一二氨基二丙基胺ｎｏｒｓｐｅｒｍｉｄｉｎｅ联用协同分散枯 草芽孢杆菌的生物膜 等等。 ３ 展望 Ｉ）＿氨基酸因其很少会引起抗生素选择变异而引起的耐 药 ］，且能有效分散生物膜使之成为浮游菌而恢复其部分耐药 性，以及Ｉ）Ｉ氨基酸对人体无毒等特点，有望成为控制生物膜感 染的有效措施。目前，有关Ｉ）＿氨基酸治疗生物膜相关感染的研 究均相对较肤浅，且绝大部分局限于体外实验，能否阐明其作 用机制及投入到Ｉ临床应用还有待进一步研究。 【参考文献】 ［１］伍勇，陈丽华．重视细菌生物被膜导致的细菌耐药及解决方案 ［Ｊ］．中华检验医学杂志，２０１４，３７（１０）：７２５—７． ［２］Ｄａｖｉｄ Ｌ，ｊ ｅａｎ—Ｍａｒｃ Ｇ，Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅ Ｂ．Ｂｉｏｆｉｌｍ—ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ： ｂｒｉｄｇｉｎｇ ｔｈｅ ｇａｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ａｓ— ｐｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｃａｌｃｉｔｒａｎｃｅ ｔｏｗａｒｄ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒｅｖ，２０１４，７８（３）：５０１ ６． ［３］Ｈｅｌｅｅｎ ＶＡ，Ｐａｔｒｉｃｋ ＶＤ，Ｔｏｍ Ｃ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｎｔｉ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｎｄ ｆｕｎｇａｌ ｂｉｏｆｉｌｍｓ ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１４，２２（６）：３２６—３３． ［４］周学东，施文元．微生物生物膜与感染［Ｍ］．北京：人民卫生出版 社，２Ｏｌ２：１． ［５］Ｌｉａｎｇ Ｙ，Ｙａｎｇ Ｌ，Ｈｏｎｇ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｂａｔｉｎｇ ｂｉｏｆｉｌｍｓ［Ｊ］．ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｄ Ｍｉｃ，２０１２，６５（２）：１４６～５７． ［６］Ｓｅｔｈ ＹＴ，Ｓｕ ＣＣ，Ｓｃａｎ ＹＴ，ｅｔ ａ１．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏｆｉｌｍｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ（）ｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２０１４ （２６）：１—６． ［７］Ｋｈａｎ Ｗ，Ｂｅｒｎｉｅｒ ＳＰ，Ｋｕｃｈｍａ ＳＬ，ｅｔ ａ１．Ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔ— ａｎｃｅ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｂｉｏｆｉｌｍｓ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕ— ｌａｒ ｐｏＩｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１０，１３（４）：２０７ １２． ｒ８］ Ｍｕｌｃａｈｙ Ｈ，Ｃｈａｒｒｏｎ—Ｍａｚｅｎｏｄ Ｌ，Ｌｅｗｅｎｚａ Ｓ．Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ＤＮＡ ｃｈｅｌａｔｅｓ ｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｂｉｏｆｉｌｍｓ［Ｊ］．ＰＩ ｏＳ Ｐａｔｈｏｇ，２００８，４（１１）：１ １２． ［９］Ｄｗｙｅｒ ＤＪ，Ｋｏｈａｎｓｋｉ ＭＡ，Ｃｏｌｌｉｎｓ ＪＪ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉ ｏｌ，２００９，１２（５）：４８２～９． ［１ｏ］Ａｉａｓｓａ Ｖ，Ｂａｒｎｅｓ ＡＩ，Ａｌｂｅｓａ Ｉ．Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｅｉｎ ｂｙ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅｓ ｉｎ ｂｉｏｆｉｌｍ ａｎｄ ｐｌａｎｋｔｏｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈ Ｒｅｓ Ｃｏ，２０１０，３９３（１）：８４ ８． ［１１］Ｗｅｉ Ｑ，Ｔａｒｉｇｈｉ Ｓ，Ｄｏｔｓｃｈ Ａ，ｅｔ ａ１．ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｅ—ｗｉｄｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｍａｌｌ ｃｏｌｏｎｙ ｖａｒｉａｎｔ（ＳＣＶ）ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ［Ｊ］．ＰｌｏＳ Ｏｎｅ，２０１１，６（１２）：１—１４． ［１２］Ｌｅｗｉｓ Ｋ．Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ｂｉｆｉｌｍｓ ａｎｄ ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００８（３２２）：ｉ０７—１３１． ［１ ３］Ｂｅａｕｄｏｉｎ Ｔ，Ｚｈａｎｇ Ｌ，Ｈｉｎｚ ＡＪ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｂｉｏｆｉｌｍ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉ— ｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ，ｎｄｖＢ，ｉｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈａ ｎｏｌ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｂｉｏｆｉｌｍｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂａｃ— ｔｅｒｉｏｌ，２０１２，１９４（１２）：３１２８—３６． ［１４３ Ｚｈａｎｇ Ｌ．Ｍａｈ ＴＦ．Ｔｈｅ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｅｆｆｌｕｘ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ 中国病原生物学杂志 ２０１５年４月 第ｉ０卷第４期 ・ ３８Ｏ ・ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ａｐｒｉｌ ２０１５，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．４ ｂｉｏｆｉｌｍ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２００８，１９０ （Ｉ ３）：４４４７—５２． ｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ ｒａｔ ｓｅｇｍｅｎｔａｌ ｄｅｆｅｃｔｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ， ２０１３，３４（３０）：７５３３—４３． ［１ ５］ Ｒａｄｋｏｖ ＡＤ，Ｍｏｅ ＬＡ．Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｉ＞ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ［Ｊ］． Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２０１４，９８（１２）：５３６３—７４． ｏｄｋｉｎ Ｏａｌ Ｉ，Ｒｏｍｅｒｏ Ｄ，Ｃａｏ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｄ－ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｔｒｉｇｇｅｒ ［１ ６］ Ｋｏｌ［２７］ Ｈｏｃｈｂａｕｍ ＡＩ，Ｋｏｌｏｄｋｉｎ—Ｇａｌ Ｉ，Ｆｏｕｌｓｔｏｎ Ｉ ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄ－ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｏｎ Ｓｔａｐｈｙ１。ｃ。ｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｂｉｏｆｉｈｎ ｄｅｖｅｌｏｐ— ｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２０１１，１９３（２０）：５６ｌ６ ２２． ｂｉｏｆｉｌｍ ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１０，３２８（５９７８）：６２７—９． ［１７］ Ｃａｖａ Ｆ，Ｅａｒｎ Ｈ，ｄｅ Ｐｅｄｒｏ ＭＡ，ｅｔ ａ１．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｄ—ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，２０１１，６８（５）：８１７—３１． ［２８］ Ｒｍｌｉｎｇ Ｕ，Ｂａｌｓａｌｏｂｒｅ Ｃ．Ｂｉｏｆｉｌｍ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｉｒ ｒｅｓｉｌｉｅｎｃｅ ｔｏ ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ， ２０１２，２７２（６）：５４ｌ一６１． ｇｕｅｚ ＫＪ，ＭｃＡｎｕｈｙ ＪＦ，ｅｔ ａ１．Ｔｒｙｐｔｏ ［２９］ Ｂｒａｎｄｅｎｂｕｒｇ ＫＳ，Ｒｏｄｒｉ［１８］ 刘红波，袁璐，伍勇．两种最新细菌生物膜分散活性物质的研究 ｐｈａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｂｉｏｆｉｌｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ［Ｊ］． Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２０１３，５７（４）：１ ９２１—５． 进展ｌ＿Ｉ７］．临床检验杂志，２０１３，１２，３１（１２）：３９２—３． ［１９］ Ｂｏｌｅｓ ＢＲ，Ｈｏｒｓｗｉｌｌ ＡＲ．ｓｔｑｐｈ Ｌ（）ｃ０ｃｃａ Ｌ ｂｉｏｆｉｌｍ ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙ［Ｊ］． Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１１，１９（９）：４４９—５５． ［３ｏ］ Ｙｕ Ｃ，Ｗｕ ＪＪ，Ａｌｉｓｏｎ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｎａｎ０ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｍｅｍ— ｂｒａｎｅ ｂｉｏｆｏｕｌｉｎｇ ｂｙ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｕｓｉｎｇ Ｄ－ｔｙｒ［Ｊ］．Ｊ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｓｃｉ，２０ｌ２，４２３～４２４（１５）：４８７～９４． Ｅ２０］ 曹凤明，杨小红，马鸣超，等．枯草芽孢杆菌近缘种群鉴定方法 研究进展［Ｊ］．微生物学通报，２０１４，４１（５）：９６８—７４． ［２１］ 余碉，刘鑫，王晓燕，等．大肠埃希菌多耐药与生物被膜相关性 分析［Ｊ］．中同病原生物学杂志，２０１４，９（１１）：９７５—８． Ｅ２２］ 梁歌宏，孙二琳，宋诗铎，等．嗜麦芽窄食单胞菌生物被膜的鉴 ［３１］ Ｖｌａｍａｋｉｓ Ｈ，Ｃｈａｉ Ｙ，Ｂｅａｕｒｅｇａｒｄ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｉｃｋｉｎｇ ｔｏｇｅｔｈｅｒ： ｂｕｉｌｄｉｎｇ ａ ｂｉｏｆｉｌｍ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｗａｙ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１，２０１３，１１（３）：１５７～６８． ｏ Ｐ，ｄｅ Ｐｅｄｒｏ ＭＡ，Ｃａｖａ Ｆ．Ｐｅｐｔｉｄｏｇｌｙｃａｎ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｉｎ ［３２］ Ｈｏｒｅａｊｂａｃｔｅｒｉａ：ｓｔｒｅｓｓ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｅｐｔｉｄｏｇｌｙｃａｎ ｅｄｉｔｉｎｇ ｂｙ ｎｏｎｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｄ－ 定及其耐药性研究ＩＪ］．中国病原生物学杂志，２Ｏ１３，８（６）：４９７ ５００． ｔ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔ，２０１２，１８（３）：３０６—１３． Ａ，Ｋｉｍｂａｒａ Ｋ．Ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｅｌｌ ｖｉａ ［３３］ Ｓａｎｅｈｅｚ Ｚ，Ｔａｎｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｅｉｍａｎ ＳＡ，Ｍａｙ ＪＭ，Ｌｅｂａｒ ＭＤ，ｅｔ ａ１．Ｄ－ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｉｎｄｉｒｅｃｔｌｙ Ｅ２１３ ｛ｉｎｈｉｂｉｔ ｂｉｏｆｉｌｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｂｙ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２０１３，１９５（２３）：５３９１—５． ［２２］ Ｒｏｍｅｒｏ Ｄ，Ａｇｕｉｌａｒ Ｃ，Ｉ ｏｓｉｃｋ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ａｍｙｌｏｉｄ ｆｉｂｅｒｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ＰＡ（）Ｉ ｆｌｏｗ ｂｉｏｆｉｌｍｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｄ－ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｍｉｘｔｕｒｅ［Ｊ］．Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ，２Ｏ１３，７９（４）：ｌ３９６—９． ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｔｏ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｂｉｏｆｉｌｍｓ［Ｊ］．Ｐ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２０１０，１０７（５）：２２３０—４， ｎｇ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ［３４］ Ｔｏｎｇ Ｚ，Ｚｈａｎｇ Ｌ，Ｌｉｏｆ ｆｒｅｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ａｌｏｎｅ ｏｒ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｎｉｓｉｎ ｏｎ ｂｉｏｆｉｌｍｓ ［２３］ Ｒｏｍｅｒｏ Ｄ，Ｖｌａｍａｋｉｓ Ｈ，Ｌｏｓｉｃｋ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ａｃｃｅｓｓｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ａｎｃｈｏｒｉｎｇ ａｎｄ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ａ ｍｙｌｏｉｄ ｆｉｂｅｒｓ ｉｎ Ｂ．ｓｕｂｔｉ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｏｎ ｐｌａｎｋｔｏｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ￣ｎｕｔａｎｓ［Ｊ］．ＰｌｏＳ Ｏｎｅ，２Ｏ１４，９（６）：１—８． ｌｉｓ ｂｉｏｆｉｌｍｓ［３］．Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１１，８Ｏ（５）：１１５５—６８． Ｅ２４３ Ｏｔ ｔｏ Ｍ．Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａ１ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ；ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｂｉｏｆｉｌｍ ｍａｔｕ— ｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ ａｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ Ｊｒ，Ａｋｅｒｓ ＫＳ，Ｒｏｍａｎｏ ＤＲ，ｅｔ ａ１．ｄ—ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｅｎ— ［３５］ Ｓａｎｃｈｅｚ ＣＪｈａｎｃｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ ｏｆ ｓｔｎｐｈ ｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ａｎｄ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ Ｌ Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ， ２Ｏ１４，５８（８）：４３５３—６１． ｏｄｋｉｎ—Ｇａｌ Ｉ，Ｃａｏ Ｓ，Ｃｈａｉ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｅｌｆ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｔｒｉｇｇｅｒ ｆｏｒ ［３６］ Ｋｏｌ［Ｊ］．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｍｅｄ，２０１３（６４）：１７５ ８８． ｔｔｌｔ Ｄ，Ｖａｕｄａｕｘ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｆｏｒｅｉｇｎ ｂｏｄｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｄｕｅ Ｅ２５］ Ｕｃｋａｙ Ｉ，Ｐｉｔｏ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｍｅｄ，２００９，４１（２）：１０９ ｂｉｏｆｉｌｍ ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙ ｔｈａｔ ｔａｒｇｅｔｓ ｅｘ。ｐｏ１ｙｓａｃｃｈａｒ１ｄｅ［Ｊ］． Ｃｅｌｌ， ２Ｏ１２，１４９（３）：６８４—９２． １９． ［２６］ Ｓａｎｃｈｅｚ ＣＪ Ｊ ｒ，Ｐｒｉｅｔｏ ＥＭ，Ｋｒｕｅｇｅｒ ＣＡ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｏｃａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｄ－ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｆｒｏｍ ｂｉ０ｆｉｌｍ—ｄｉｓｐｅｒｓｉｖｅ ｓｃａｆｆｏｌｄｓ ｏｎ ｉｎ一 【收稿日期１ ２０１５ ０２—１６ 【修回日期】２０１５－０４—０３ （上接３６２页） ［１Ｏ］ 朱健铭，肖丹宇，姜如金，等．多药耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷 类修饰酶与１ ６ｓ ｒＲＮＡ甲基化酶基因研究［Ｊ］．中华医院感染学 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