，，中国医院药学杂志２０１０年第３０卷第１７期ＣｈｉｎＨｏｓＰｈａｒｍＪ２０１０ＳｅＶｏｌ３０，Ｎｏ．１７ ｐｐ
饮食习惯等也影响着环孢素的代谢消除，而群体药动学分析难以兼顾这两方面的因素。人工神经网络它是由大量的神经元相互联结，模具有独特的优势，
进行信息并行处拟人的大脑神经处理信息的方式，
理和非线型转换的复杂网络系统，具有学习能力。它无须假设药物行为模型，能够避免模型误差，依据数据训练出可用于预测和判断的智能，简便易行，特别在复杂的药动学和药效学研究中更具有优越性。国内文献，尝试使用国外的人工神经网络ＥａｓＮＮ－ｙ对环孢素血药浓度进行ｌｕｓ８．０全功能试用软件， ｐ
４］
，预测［但未进行给药剂量预测研究。本资料首次可以为临床尝试的国人环孢素给药剂量预测研究，
给药方案的制定提供一定的参考依据；当然，该研究还有很多不成熟之处，例如环孢素仅处于起始阶段，
［］
代谢基因Ｃ合并ＹＰ３Ａ４和ＣＹＰ３Ａ５的遗传变异５、
用药等情况，均应在模型中加以考虑，随着收集的建模样本量和用药信息量增多，有望对该预测模型逐步完善。
参考文献：
［］周金玉，张骞峰，等．肝肾移植受者环孢素Ｕ１Ｃ监测评 孙增先，
］（）：估［中国药学杂志，Ｊ．２００６，４１２１１６７３１６７５．－［］２ｓｕｏｄａＳＭ，ＡｗｅｅｋａＦＴ．Ｔｈｅｕｓｅｏｆｔｈｅｒａｅｕｔｉｃｄｒｕｍｏｎｉｔｏ Ｔ －ｐｇ
［］ｒｉｎｔｏｏｔｉｍｉｓｅｉｍｍｕｎｏｓｕｒｅｓｓｉｖｅｔｈｅｒａＪ．ＣｌｉｎＰｈａｒｍａ －ｇｐｐｐｐｙ ，ｃｏｋｉｎｅｔ１９９６，３０：１０７１１０．－［］赵秀杰，唐绍芬，等．环孢素Ａ人体药动学影响因素分析３ 李芹，
［］（）：Ｊ．中国医院药学杂志，２００２，２２７４３１４３２．－［］艾又生，陈华庭．人工神经网络法预测肾移植术后患者４ 徐楚鸿，
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］性对肾移植患者环孢素药代动力学的影响［中国药理学通Ｊ．（）：报，２００９，２５３３７８３８２．－［收稿日期］２００９１２２０－－液－质联用法测定犬血浆中依普利酮及其水解代谢物
金小平１，韩俊１，李凌云２，雷小光３ （襄樊市第一人民医院药学部，湖北襄樊４湖北职业技术学院医学院，湖１．４１０００；２．
）广西医科大学第一附属医院药学部，广西南宁５北孝感４３２０００；３．３００２７
［／Ｍ）摘要］建立同时测定犬血浆中依普利酮及其水解代谢物的液－质联用（检测方法。方法：以同位素标记依ＬＣ－ＭＳＳ 目的：，·血浆样品采用乙腈沉淀，色谱柱为Ａ流动相为乙腈－普利酮为内标，ｉｌｅｎｔＴＣ２．１ｍｍ×５０ｍｍ，５μｍ）７．５ｍｍｏｌＬ－１ －Ｃｇ１８柱（
－１
）（）；·；／醋酸铵缓冲液（流速０．依普利酮与其水解代谢物及内标分别选择ｍＨ７．０３０∶７０２ｍＬｍｉｎｚ４１５．２→１６３．０，４３１．２→ ｐ
·依普利酮及其水解代谢物在５～２３３７．２，４１９．２→１６３．０。结果：０００μＬ－１范围内线性良好，２组分平均提取回收率分别为 ｇ日内和日间Ｒ本方法灵敏度高，操作简便、快速，适用于依普利酮及其水解代谢物８０．１７％与７５．６８％，ＳＤ均小于１５％。结论：浓度测定。
［关键词］依普利酮水解代谢物；液相色谱串联质谱方法 依普利酮；
［（）中图分类号］Ｒ文献标识码］Ａ ［文章编号］９２７．２ ［１００１５２１３２０１０１７１４５４０４－－－Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｎｄｈｄｒｏｌｚｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅｉｎｂｅａｌｅｄｏｂｌａｓｍａ ｐｙｙｐｇｇｐｙ
／ＨＰＬＣ－ＭＳＭＳ
１１２３
，，，ｉｎｕｎｕａｎＪＩＮＸｉａｏＨＡＮＪｕｎＬＩＬｉｎＬＥＩＸｉａｏ１．ＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃＸｉａｎｆａｎＮｏ．１ＰｅｏｌｅＨｏｓ －ｐ － －ｇ －ｐｙｇｐｇ，ｙｇ（ｇ
，；，ｉｔａｌＨｕｂｅｉＸｉａｎｆａｎ４４１０００，Ｃｈｉｎａ２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｏｆＨｕｂｅｉＰｏｌｔｅｃｈｎｉｃＩｎｓｔｉｔｕｔｅＨｕｂｅｉＸｉａｏａｎ４３２０００，Ｃｈｉ －ｐｇｙｇ；，，）ｎａ３．ＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｉｔａｌｏｆＧｕａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔＧｕａｎｘｉＮａｎｎｉｎ５３００２７，Ｃｈｉｎａ ｐｙｐｇｙｇｇ ／ＭＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅＬＣ－ＭＳＳｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ ｌａｓｍａ．ｌａｓｍａｒｅｃｉｉｔａｔｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｎｄｈｄｒｏｌｚｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅｉｎｂｅａｌｅｄｏＭＥＴＨＯＤＳｈｅｓａｍｌｅｓｗｅｒｅｂｉｃｅｃｏｌｄａｃｅ Ｔ － －ｐｐｐｐｐｙｙｐｇｇｐｙ ｔｏｎｉｔｒｉｌｅｗｉｔｈｉｓｏｔｏｅｌａｂｅｌｉｎｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｓｉｎｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄ．ＳｅａｒａｔｉｏｎｗａｓａｃｈｉｅｖｅｄｏｎａｎＡｉｌｅｎｔＴＣｅｖｅｒｓｅｄｈａｓｅｃｏｌ －Ｃ－ｐ －ｐｇｐｐｇ１８ｒ
·）ｕｍｎ（２．１ｍｍ×５０ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈａｍｏｂｉｌｅｈａｓｅｃｏｍｏｓｅｄｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ７．５ｍｍｏｌＬ－１ａｍｍｏｎｉｕｍａｃｅｔａｔｅｂｕｆｆｅｒ（Ｈ７．０ － ｐｐｐ－１
（／）·ｍ／３０∶７０，ｖｖａｔａｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ０．２ｍＬｉｎ．Ｔｈｅｍａｓｓｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｏｆｍｚ４１５．２→１６３．０，４３１．２→３３７．２，ａｎｄ４１９．２→１６３．０
，ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｅｌｅｒｅｎｏｎｅｈｄｒｏｌｚｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｎｄｉｎｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄ．ＲＥＳＵＬＴＳｈｅａｓｓａｗａｓｌｉｎｅａｒｏｖｅｒｔｈｅｃｏｎｃｅｎ Ｔ －ｐｙｙｐｙ
·ｌａｓｍａ．Ｍｅａｎｔｒａｔｉｏｎｒａｎｅ５－２０００μＬ－１ｆｏｒｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｎｄｈｄｒｏｌｚｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅｉｎｂｅａｌｅｄｏｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｆｏｒｅｌｅｒｅｎｏｎｅ ｇｐｇｐｙｙｐｇｇｐ
ａｎｄｈｄｒｏｌｚｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｔｆｉｖｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅ８０．１７％ａｎｄ７５．６８％．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓａｃｃｕｒａｔｅｗｉｔｈａｌｌｉｎｔｒａｎｄ －ａｙｙｐ·ｉｎｔｅｒｄａｍｅａｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｉｔｈｉｎ１５％ｏｆｎｏｍｉｎａｌｖａｌｕｅｓａｔ５，１０，５００，１５００ａｎｄ２０００μＬ－１．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ｔｈｉｓｍｅｔｈ－ －ｙｇ
［，：＿作者简介］金小平，男，副主任药师，硕士，电话：０７１０３４２００９５Ｅ－ｍａｉｌ６３ｋｉｎ６３．ｃｏｍ－＠１ｇ
，，中国医院药学杂志２０１０年第３０卷第１７期ＣｈｉｎＨｏｓＰｈａｒｍＪ２０１０ＳｅＶｏｌ３０，Ｎｏ．１７ ｐｐ
·１４５５·
ｏｄｗａｓｒｏｂｕｓｔａｎｄｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｎｄｈｄｒｏｌｚｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅ． ｐｙｙｐ：；；／ＭＫＥＹ ＷＯＲＤＳｅｌｅｒｅｎｏｎｅｈｄｒｏｌｚｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅＬＣ－ＭＳＳ ｐｙｙｐ
近年来研究发现肾素－血管紧张素－醛固酮系统
（）过度激活及高醛固酮可导致心血管系统损ＲＡＡＳ
１］
。依普利酮（）害［是由辉瑞／法玛西亚ｅｌｅｒｅｎｏｎｅｐ
·）（）；腈－流Ｈ７．５ｍｍｏｌＬ－１醋酸铵缓冲液（７．０３０∶７０ ｐ
－１
·；速：进样量：柱温：０．２ｍＬｍｉｎ２０μＬ；２５℃。２．３ 质谱条件
）电喷雾离子化（２．３．１ 依普利酮 离子源：ＥＳＩ
源；喷雾电压：雾化温度：帘气压＋４５００Ｖ；５５０℃； ；；力：碰撞气：雾化气压力：辅助２０ＰｓｉＨｉｈ；２０Ｐｓｉｇ；气压力：监测方式为＋ＭＲＭ监测模式，用于４０Ｐｓｉ／依普利酮与内标定量分析的离子反应分别为ｍｚ／参数Ｄ４１５．２→１６３．０与ｍｚ４１９．２→１６３．０，Ｐ、ＥＰ、 ＣＥ、ＣＸＰ分别为７７，１０Ｖ，３６ｅＶ，２Ｖ。电喷雾离子２．３．２ 依普利酮水解代谢物 离子源：
）化（源；喷雾电压：雾化温度：ＥＳＩ－４５００Ｖ；５５０ ；帘气压力：碰撞气：雾化气压力：℃；２０ＰｓｉＨｉｈ；２０ｇ；；辅助气压力：监测方式为－ＭＲＭ监测模４０ＰｓｉＰｓｉ
用于依普利酮水解代谢物定量分析的离子反应式，
／参数Ｄ为ｍｚ４３１．２→３３７．２，Ｐ、ＥＰ、ＣＥ、ＣＸＰ分别为－６０，－１０Ｖ，－４５ｅＶ，－１Ｖ。
加入内标溶２．４ 血浆样品处理 取血浆０．５ｍＬ，液１混匀，加入冰冷的乙腈３ｍ涡旋３ｍ０μＬ，Ｌ，ｉｎ，
－１
·。取上清液置于另一试离心１１２０００ｒｍｉｎ０ｍｉｎ
氮气吹干，加入流动相１管中，００μＬ溶解，１２０００ｒ －１
·，离心１取上清液２ｍｉｎ０ｍｉｎ０μＬ进行ＨＰＬＣ－／ＭＳＭＳ测定分析。
公司开发的新一代具有高度选择性的醛固酮受体阻滞剂，通过阻断醛固酮受体发挥降压、改善心功能、
］２３－。依普利逆转心肌肥厚、抗动脉粥样硬化等作用［
酮临床应用及研究进展国内已有报道，但生物样品检测方法国内未见报道。依普利酮的内酯结构易于水解，虽然水解代谢产物无活性，但该水解过程具有可逆性，即在碱性条件下发生水解形成开环代谢物，然而在酸性条件性可发生闭环反应转化为依普利
］４６－。本实验旨在建立同时测定犬血浆中依普利酮［
酮及其水解代谢物浓度的液相色谱串联质谱（／）法，为依普利酮的临床前药动学ＨＰＬＣ－ＭＳＭＳ特性研究提供依据。１ 材料
ＡｌｉｅｄＢｉｏｓｓｔｅｍ４０００ＱＴＲＡＰ三重四级 ｐｐｙ
，杆串联质谱仪（美国Ａ配备ｌｉｅｄＢｉｏｓｓｔｅｍ公司） ｐｐｙ）（；电喷雾离子源（日本岛津ＥＳＩＴｕｒｂｏＩｏｎｓｒａ ｐｙ）；日本岛津）依普利酮ＬＣ－１０ＡＴ高效液相色谱仪（
（；批号Ｅ含量＞９依Ｓｉｍａｌｄｒｉｃｈ公司，６６５７，８％）－Ａｇ普利酮水解代谢物（ＴｏｒｏｎｔｏＲｅｓｅａｒｃｈＣｈｅｍｉｃａｌｓ ，；批号Ｅ含量＞９同位素标记依普Ｉｎｃ．５８８７８０，８％）
，批号利酮（ＴｏｒｏｎｔｏＲｅｓｅａｒｃｈＣｈｅｍｉｃａｌｓＩｎｃ． ；含量＞９乙腈为色谱纯；其他试剂均Ｅ５８８７７７，８％）
为分析纯。２ 方法与结果２．１ 溶液的配制
２．１．１ 依普利酮及其水解代谢物标准溶液 精密
，称取依普利酮与水解代谢物对照品各１置０．０ｍｇ·加甲醇溶解并定容，得１．１０ｍＬ量瓶中，０ｇＬ－１的
依普利酮及其水解代谢物标准储备液，以流动相配成含依普利酮及其水解代谢物质量浓度均为５０．０，１００．０，２００．０，５００．０，１０００．０，２０００．０，５０００．０，
·１００００．０，２００００．０μＬ－１的系列标准溶液。 ｇ２．１．２ 同位素标记依普利酮标准溶液 精密称取
，同位素标记依普利酮１置１加０．０ｍ０ｍＬ量瓶中，ｇ·甲醇溶解并定容，得１．采用０ｇＬ－１的内标储备液，流动相稀释配成含同位素标记依普利酮为５０００．０ ·Ｌ的内标标准溶液。ｇμ
２．２ 色谱条件 色谱柱：ＡｉｌｅｎｔＴＣＣ２．１ｍｍ －ｇ１８柱（
；保护柱：流动相：乙×５０ｍｍ，５μｍ）ＵｌｔｉｍａｔｅＣ １８柱；
－１
２．５ 方法专属性 在本实验所采用的色谱与质谱
条件下，依普利酮及其水解代谢物保留时间分别为，内标保留时间也为４．峰形良４．６，２．１ｍｉｎ６ｍｉｎ，好，无测定干扰，典型色谱图见图１。
／Ｍ图１ 犬血浆中依普利酮及其水解代谢物ＬＣ－ＭＳＳ色谱图
空白血浆；空白血浆﹢依普利酮﹢依普利酮水解代谢物Ａ．Ｂ．﹢内标；Ⅰ－依普利酮；Ⅱ－依普利酮水解代谢物；Ⅲ－内标Ｆｉ１ Ｒｅｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｃｈｒｏｍａｔｏｒａｍｓｏｆｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｎｄｈ －ｇｐｇｐｙ ｄｒｏｌｚｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅｉｎｂｅａｌｅｄｏｌａｓｍａ ｙｐｇｇｐ
；，Ａ．ｂｌａｎｋｌａｓｍａＢ．ｂｌａｎｋｌａｓｍａｓｉｋｅｄｗｉｔｈｅｌｅｒｅｎｏｎｅｈ ｐ －ｐｐｐｙ
；；ｄｒｏｌｚｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｎｄｉｎｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅ Ⅰ－ｐⅡ－ｙ ｐ
；ｈｄｒｏｌｚｅｄｅｌｅｒｅｎｏｎｅｉｎｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄⅢ－ ｙｙ ｐ
·１４５６·
，，中国医院药学杂志２０１０年第３０卷第１７期ＣｈｉｎＨｏｓＰｈａｒｍＪ２０１０ＳｅＶｏｌ３０，Ｎｏ．１７ ｐｐ
２．６ 标准曲线的制备 取空白犬血浆０．５ｍＬ，加入依普利酮及其水解代谢物标准系列溶液各１０配制成相当于２组分血浆浓度均为５，Ｌ，１０，２０，μ
·按５０，１００，２００，５００，１０００，２０００μＬ－１的样品， ｇ
“／血浆样品处理”项下操作，进行ＨＰＬＣ－ＭＳＭＳ分析，以依普利酮浓度Ｃ依普利酮与内标１为横坐标，
２
／）峰面积比Ｙ１为纵坐标，用加权（最小二Ｗ＝１Ｃ及其水解代谢物浓度均为５，１０，５００，１５００，２０００ ·按“血浆样品处理”项下操作，Ｌ－１的血浆样品，ｇμ
／进行ＨＰＬＣ－ＭＳＭＳ分析。同法取空白血浆处理氮气吹干后残渣分别加入质量浓度为５，１０，５００，·１５００，２０００μＬ－１流动相溶液。另用流动相配制 ｇ
相应等浓度的对照品溶液，测定药物峰面积。将血浆样品的峰面积除以相应等浓度对照品溶液峰面积计算提取回收率及介质效应。根据相应标准曲线，计算质控血浆样品的测试浓度，测试浓度与实际浓度的比值即为方法回收率。回收率试验结果见表／依普利酮及其水解代谢物采用Ｌ２，Ｃ－ＭＳＭＳ测定
。时介质效应小（０％）＜１２．９ 稳定性试验 精密配制依普利酮及其水解
·代谢物质量浓度均为１０，５００，１５００μＬ－１的血 ｇ／浆样品，按“项下操作，进行Ｈ２．４”ＰＬＣ－ＭＳＭＳ分
，析，分别用来考察样品解冻后室温放置２ｈ样品，处理后室温放置２冻融３次循环及－２４ｈ０℃条稳定性试验结果见表３，件下冷冻６０ｄ的稳定性，结果表明依普利酮及其水解代谢物在以上条件下稳定性良好。
表２ 回收率试验结果（ｎ＝６，％）
Ｔａｂ２ Ｒｅｓｕｌｔｏｆｒｅｃｏｖｅｒｔｅｓｔｓ（ｎ＝６，％） ｙ
加样浓度
／·Ｌ－１ｇμ５
１０ ５００ １５００ ２０００
依普利酮８１．４７
７９．８２ ７８．６７ ８０．０４ ８０．８３
９７．４６
９８．１８ １０１．２４ ９８．０９ ９８．４９
依普利酮水解代谢物
方法回收率９７．６３
９９．０４９８．１７１００．９１９７．０３
７４．３７
７６．６４ ７７．４０ ７４．９７ ７５．００
提取回收率方法回收率提取回收率
乘法进行回归运算得回归方程为Ｙ１＝１．７６３８Ｃ １，·定量限为５μ以依－０．０２７３（ｒ＝０．９９９２）Ｌ－１； ｇ
普利酮水解代谢物浓度Ｃ依普利酮水２为横坐标，解代谢物与内标峰面积比Ｙ２为纵坐标，用加权（Ｗ２
／）最小二乘法进行回归运算得回归方程为＝１Ｃ，定量限为Ｙ２＝１．４７２９Ｃ０．０２０１（ｒ＝０．９９９３） ２－
·５μＬ－１。ｇ
２．７ 精密度试验 精密配制依普利酮及其水解代
·谢物浓度均为５，１０，５００，１５００，２０００μＬ－１的血 ｇ浆样品，按“血浆样品处理”项下操作，在日内和日间连续测定，各浓度进行６样本分析，测定日内和日间精密度。见表１。
表１ 精密度试验结果（ｎ＝６，％）
Ｔａｂ１ Ｒｅｓｕｌｔｏｆｒｅｃｉｓｉｏｎｔｅｓｔｓ（ｎ＝６，％） ｐ
加样浓度／
·Ｌ－１ｇμ５ １０ ５００ １５００ ２０００
依普利酮
日内ＲＳＤ１０．８３
９．３２ １０．６７ ７．８２ ３．１９
日间ＲＳＤ１４．０９
１２．１６ ８．４３ １０．６１ ７．０３
依普利酮水解代谢物日内ＲＳＤ１３．９１
６．６３ ７．９２ ４．９９ ５．９５
日间ＲＳＤ１３．５８
９．５２１１．３０８．３３９．４４
２．８ 介质效应与回收率试验 精密配制依普利酮
表３ 稳定性试验结果（ｎ＝６，％）Ｔａｂ３ Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓｔａｂｉｌｉｔｔｅｓｔｓ（ｎ＝６，％） ｙ
加样浓度／
·Ｌ－１ｇμ１０ ５００ １５００ 依普利酮ＲＳＤ
处理前
室温放置２ｈ１０．４３ ８．３３ ４．２０ 处理后
室温放置２４ｈ９．７８ １１．２５ ７．８８ 冻融
３次循环１３．２９ ９．４７ １１．２６ 冷冻６０ｄ
的稳定性１２．７７ ９．６５ １０．４９ 依普利酮水解代谢物ＲＳＤ
处理前室温
放置２ｈ９．８３ ７．８０ ５．１１ 处理后室温
放置２４ｈ１０．８２ ５．９６ ３．１４ 冻融３次
循环８．５６ １１．７６ ６．８０ 冷冻６０ｄ的
稳定性１３．４７１０．４８８．２５
３ 讨论
由于依普利酮及其水解代谢物紫外吸收弱，普通检测方法（如ＵＶ检测器）灵敏度达不到测试要
／求，故采用灵敏度较高的ＨＰＬＣ－ＭＳＭＳ法。本实验所采用的方法以正负模式同时测定２组分血药浓
－１
度，操作简便，线性范围达到５～２０００μ ｇ·Ｌ。
淀后血浆中杂质不干扰药物测定，无介质效应，回收·率高，且峰形好，定量限可达到５μＬ－１。与国外ｇ
］６７－，文献报道相比［本实验采用的直接沉淀法操作简单，耗时较短，且通过氮气吹干富集不会稀释样品，灵敏度不受影响。
本实验建立的同时测定犬血浆中依普利酮及其／水解代谢物的ＨＰ其特异性、ＬＣ－ＭＳＭＳ测定方法，标准曲线、定量限、精密度、准确度及样品稳定性等均符合生物样本测定的要求，该方法灵敏、可靠，专属性强，适用于依普利酮的临床前药动学研究。
参考文献：
［］］冯友根．新一代醛固酮拮抗剂依普利酮［中国医院１Ｊ． 邹晓华，
笔者通过比较有机溶剂提取法、蛋白沉淀法及固相萃取法选择合适的样品处理方法。有机溶剂提取法分别考察各种有机溶剂如醋酸乙酯、乙醚、甲基叔丁基醚的提取效果，结果发现依普利酮水解代谢物提取回收率低，从而影响灵敏度；固相萃取法耗时长，成本高，不适合大量样本测试。血浆样品经蛋白沉
，，中国医院药学杂志２０１０年第３０卷第１７期ＣｈｉｎＨｏｓＰｈａｒｍＪ２０１０ＳｅＶｏｌ３０，Ｎｏ．１７ ｐｐ （）：药学杂志，２００６，２６１０１２８６１２８８．－［］陈良华，宋尚明，等．醛固酮拮抗剂在顽固性高血压治疗２ 李琳，
］（）：心血管病学进展，中的地位酮［Ｊ．２０１０，３１１５５５８．－［］］沈金芳．新型醛甾酮拮抗药依普利酮研究进展［医３Ｊ． 刘晓琰，
（）：药导报，２００８，２７５５７０５７２．－［］４ｏｏｋＣＳ，ＺｈａｎＬ，ＡｍｅｓＧＢ，ｅｔａｌ．Ｓｉｎｌｅａｎｄｒｅｅａｔｅｄｄｏｓｅ Ｃ －ｇｇｐ
，ｏｆｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｓｅｌｅｃｔｉｖｅａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅｒｅｃｅｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ －ｐｐｐ，［］，（）：ｔｏｒｂｌｏｃｋｅｒｉｎｒａｔｓＪ．Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ２００３，３３３３０５３２１． －［］５ａｖｉｓＷＲ，ＳｉｃａＤＡ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｆｔｅｒｓｉｎ Ｒ －ｐ
ａｎｄｍｕｌｔｉｌｅｄｏｓｉｎｉｎｓｕｂｅｃｔｓｗｉｔｈａｎｄｗｉｔｈｏｕｔｒｅｎａｌｉｍ－ｌｅ ｐｇｊｇ
·１４５７·
［］，ａｉｒｍｅｎｔＪ．ＪＣｌｉｎｈａｒｍａｃｏｌ２００５，４５：８１０８２１． －ｐｐ
［］，／Ｍ６ｈａｎＪＦａｓｔＤ，ＢｒｅａｕＡ．ＡｖａｌｉｄａｔｅｄＳＰＥＣ－ＭＳＳａｓｓａ Ｚ －Ｌ ｇｙ
ｆｏｒｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｎｄｉｔｓｈｄｒｏｌｚｅｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｉｎｈｕｍａｎｕｒｉｎｅ ｐｙｙ
［］，Ｊ．ＪＰｈａｒｍＢｉｏＡｎａｌｓｉｓ２００３，３１：１０３１１５． －ｙ［］，７ｈａｎＪＦａｓｔＤ，ＢｒｅａｕＡ．Ｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔａｎｄｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆａｌｉ Ｚ －ｇｐｑ
ｕｉｄｈｒｏｍａｔｏｒａｈｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃｓｓａｏｒ ｃ－ ｓ ａｇｐｙｐｙ ｆ
［］ｅｌｅｒｅｎｏｎｅａｎｄｉｔｓｈｄｒｏｌｚｅｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｉｎｈｕｍａｎＪ．ｌａｓｍａ ｐｙｙｐＪＣｈｒｏｍＢ，２００３，７８７：３３３３４４． －［收稿日期］２０１００５２０－－胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血后细胞凋亡和ＮＦＢ表达的影响κ
）孙伟１，李震２，刘洪玲１，于竹芹２，郭素１ （青岛大学医学院附属医院，山东青岛２１药剂科；２脑血管病研究所，６６００３［摘要］研究黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血后细胞凋亡和Ｎ应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再ＦＢ表达的影响。方法： 目的：κ
－１
·灌注模型，经尾静脉注射胡黄连苷Ⅱ（干预治疗，免疫组化检测脑缺血再灌注后核转录因子κ表达，原位１０ｍｋＢ（ＮＦＢ）κｇｇ）
检测神经细胞凋亡。结果：假手术组大鼠皮质、纹状体和海马区脑组织Ｎ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）ＦＢ，ＴＵＮＥＬ阳性细胞数量κ较少，散在分布。模型组大鼠各区脑组织Ｎ吸光度值（和ＴＵＮＦＢ表达显著增强，Ａ）ＥＬ阳性细胞数量较假手术组均显著增多κ（）。胡黄连苷组各区脑组织Ｎ）。结论：及ＴＵＮ胡黄连Ｐ＜０．０５ＦＢ（Ａ值）ＥＬ阳性细胞数量均显著低于模型对照组（Ｐ＜０．０５κ苷Ⅱ可能通过下调Ｎ抑制脑缺血再灌注损伤炎症反应导致的神经细胞凋亡。ＦＢ的表达，κ［关键词］脑缺血；核转录因子κ细胞凋亡；大鼠Ｂ； 胡黄连苷Ⅱ；
［（）中图分类号］Ｒ文献标识码］Ａ ［文章编号］３２２；Ｒ２８４ ［１００１５２１３２０１０１７１４５７０３－－－ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｎｔｈｅａｏｔｏｓｉｓａｎｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮＦＢａｆｔｅｒｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｒａｔｓｉｃｒｏｓｉｄｅ Ⅱｏ κ ｐｐｐｐ
１２１２１
；ｉｎＳＵＮ ＷｅｉＬＩＺｈｅｎＬＩＵ ＨｏｎｌｉｎＹＵＺｈｕＧＵＯＳｕ１．ＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃ２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｅｒｅ ， ，－ －ｑ ， （ －ｐｙｇｇ ，
，，）ｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒＤｉｓｅａｓｅ．ＴｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｉｔａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｅＱｉｎｄａｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔＳｈａｎｄｏｎＱｉｎｄａｏ２６６００３，Ｃｈｉｎａ ｐｇｇｙｇｇ ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｏｓｔｕｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｉｃｒｏｓｉｄｅｎｔｈｅａｏｔｏｓｉｓａｎｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ Ⅱｏ ｙｐｐｐｐｐ ＮＦＢ）ａｆｔｅｒｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｒａｔｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ ＴｈｅｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｏｃｃｌｕｓｉｏｎｒｅｅｒｆｕｓｉｏｎｍｏｄｅｌｓｉｎｒａｔｓｋａａＢ（κ ｙｐｐｐ
－１
·ｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌｔｈｒｅａｄｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｔｒｅａｔｅｄｂｉｎｅｃｔｉｎＰｉｃｒｏｓｉｄｅ１０ｍｋｆｒｏｍｔｈｅｔａｉｌｖｅｉｎ．Ｔｈｅｅｘ Ⅱ（ －ｙｙｊｇｇｇ）
ｒｅｓｓｉｏｎｏｓｉｔｉｖｅｏｆＮＦＢｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｓｓａａｎｄｔｈｅａｏｔｏｔｉｃｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｏｕｎｔｅｄｂｔｅｒｍｉｎａｌｄｅ κ －ｐｐｙｙｐｐｙ
ｏｘｎｕｃｌｅｏｔｉｄｌｔｒａｎｓｆｅｒｅｎｃｅｍｅｄｉａｔｅｄｂｉｏｔｉｎｌａｔｅｄｄｅｏｘｕｒｉｄｉｎｅｔｒｉｈｏｓｈａｔｅｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｔｅｃｈｎｉｕｅ（ＴＵＮＥＬ）．ＲＥＳＵＬＴＳ ｙｙｙｙｐｐｇｑ ，ｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｎｔｈａｔｅｘｒｓｓｉｏｎｓｏｆＮＦＢｗｅｒｅｗｅａｋｌａｎｄｔｈｅａｏｔｏｔｉｃｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｃａｔｔｅｒｉｎａｔｃｏｒｔｅｘｓｔｒｉａｔｕｍａｎｄｈｉ Ｔ κ －ｐｙｐｐｇｐ ，，ｉｎｔｈｅｓｈａｍｏｅｒａｔｉｖｅｔｈｅｍｏｄｅｌｃｏｎｔｒｏｌｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮＦＢｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅａｂｓｏｒｔｉｏｎ（Ａ）ｖａｌｏｃａｍｕｓｒｏｕ．Ｉｎｒｏｕ κ －ｐｐｐｐｐｇｐｇｐｕｅｓａｎｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆＴＵＮＥＬｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｈｉｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｓｈａｍｏｅｒａｔｉｖｅｒｏｕＰ＜０．０５）． ｐｇｙｇｐｇｐ（ ，）Ｗｈｉｌｅｉｎｉｃｒｏｓｉｄｅｒｏｕｓｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓ（ＡｖａｌｕｅｓｏｆＮＦＢａｎｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆＴＵＮＥＬｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｌｏｗ－ κ ｐｇｐｐｐｇｙ ）ｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕＰ＜０．０５．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｅｓｔｅｄｔｈａｔｉｃｒｏｓｉｄｅｉｈｔｄｏｗｎｒｅｕ Ⅱｍ －－ｇｇｇｐｇｇｐ（ｌａｔｅｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮＦＢｔｏｉｎｈｉｂｉｔｎｅｕｒｏｎａｌａｏｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｆｔｅｒｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｕｒｉｎ κ ｐｐｐｙｐｊｙ ｒａｔｓ．
：；Ｎ；ｉｃｒｏｓｉｄｅＫＥＹ ＷＯＲＤＳｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａＦＢ；ａｏｔｏｓｉｓｒａｔｓⅡ； κｐｐｐ
存在于神经元、胶质细胞和ＮＦＢ） 核转录因子（κ
脑血管内皮细胞等几乎所有细胞，并能与其他细胞基因启动子或增强子序列发生特异性结合而促进其转录和表达，与炎症反应、免疫反应以及细胞的增殖、分
］１
。中药胡黄连味苦性寒，化和凋亡等密切相关［具有
］２
。细胞培养实验发现，胡黄连苷Ⅱ能清热燥湿作用［
［］
增强神经生长因子诱导的Ｐ减Ｃ１２细胞轴突生长３、
轻Ｈ提Ｃ１２神经细胞的损伤、２Ｏ２和谷氨酸诱导的Ｐ
］４
。动物实验表明，胡黄连提取物对高细胞的存活率［
／损伤有保护作大脑中动脉缺血再灌注（ＭＣＡＯＲ）
［，：作者简介］孙伟，女，主任药师，电话：０５３２８２９１１５９９Ｅ－ｍａｉｌＳｕｎｗｅｉｅｄｍａｉｌ．ｃｏｍ．ｃｎ－＠ｍ
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