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＋＋＋
子痫前期患者外周血CD４CD２５Fox３repTg细胞和
雌三醇变化及相关性分析∗
＋＋＋
摘要] [ 目的 探究子痫前期患者外周血CD４CD２５Fox３Trepg细胞和雌三醇的变化.方法 选取
根据病情不同分为轻度子痫前期组(和重度２０１６年１月至２０１７年７月该院就诊的５０例子痫前期患者,２４例)
()浙江省杭州市第一人民医院中医科 ３１０００６
李 颖,丁 渊,陈丽丽△,许 浩
采用顺磁性颗粒化学发光免疫测定法测定各组外周血中游离雌三醇的水平.结果 轻度子Fox３Trepg细胞,
＋＋＋＋＋＋＋
/痫前期组和重度子痫前期组的CD４CD２５Fox３TreD４CD２５Fox３TreCD４T均pg细胞绝对数和Cpg
＋
＋
/).轻度子痫前期组与重度子痫前期组外周血单个核细胞(TreCD４T均低于轻度子痫前期组(P＜０．０５PBＧg).子痫前期患而重度子痫前期组低于轻度子痫前期组(MCsFox３mRNA水平较对照组明显降低,P＜０．０５)p＋＋＋
者的CD４CD２５Fox３TreBMCsFox３mRNA水平呈正相关.轻度子痫前期组和重度子痫前pg比例及Pp＋＋＋＋＋＋
;低于对照组(重度子痫前期组的CP＜０．０５)D４CD２５Fox３TreD４CD２５Fox３pg细胞绝对数和Cp
＋＋
,子痫前期组(同时选取同期健康孕妇２２６例)５例为对照组.采用流式细胞术检测各组外周血CD４CD２５
＋＋＋
().子痫前期患者的CP＜０．０５D４CD２５Fox３Trepg比例与血清雌三醇水平呈正相关.结论 子痫前期患
＋＋＋
者C可能与患者的免疫耐受有关.D４CD２５Fox３Trepg细胞和血清雌三醇均下降,
＋＋＋
[关键词]雌三醇 先兆子痫;CD４CD２５Fox３Trepg细胞;
;期组血清雌三醇水平均低于对照组(同时,轻度子痫前期组血清雌三醇水平高于重度子痫前期组P＜０．０５)
[中图法分类号] R７１４[文献标识码] B[()文章编号] １６７１Ｇ８３４８２０１９１９Ｇ３３７１Ｇ０３
世界范围内孕妇出现子痫前期的比例为５％~高龄偏胖的孕妇、有家族遗传史的孕妇及自身２０％,
合并内科疾病的孕妇为好发群体,发病与遗传、环境
１]
.该病对母体及胎儿的危害较大,等多种因素相关[
严重者危及生命,临床上一般通过规范产检来提前诊
断,也可在孕早期补充钙剂有效预防.免疫耐受是子
＋＋＋痫前期发病机制之一,CD４CD２５Fox３Trepg细胞在机体的免疫耐受中起重要作用,同时有学者在体外[２]试验中发现,雌激素可促进Fox３的表达.本研究p
１．２ 方法
１．２．１ 试验方法 所有患者入组后第２天晨起抽取
()周.３组一般资料比较,差异无统计学３５．９８±４．４３
),意义(具有可比性.P＞０．０５(空腹肘静脉血５m提L,Tre１)g流式检测步骤如下:
取,使用淋巴细胞分离液制备外周血单个核细胞(PBＧ
例为对照组,平均年龄(岁,平均孕周３０．６７±４．３９)
＋＋＋
针对子痫前期患者外周血CD４CD２５Fox３Trepg细胞和雌三醇变化进行研究,现报道如下.
１ 资料与方法１．１ 一般资料 选取２０１６年１月至２０１７年７月本(院就诊的５符合子０例子痫前期患者.纳入标准:１)
３]
;()痫前期的诊断标准[初产妇,且无相关产科并发２((症;心、肝、肾等器官无重大疾病;无血液系统３)４)(疾病及免疫治疗史;所有患者对本次研究知情并５)签署同意书.根据病情不同将患者分为轻度子痫前期组平均年龄(岁,平均孕周(３０．１６±４．５７)３６．１５±
)周;重度子痫前期组平均年龄(４．０９３１．２５±５．２１))岁,平均孕周(周;选取同期健康孕妇２３５．６９±４．９７５
∗
冲液(滴加至２PBS)００μL外周血PBMCs悬液中,
/再将１１５００rmin离心５min后去除上清液,５μL的
异硫氰酸荧光素(标记的CFITC)D４抗体和藻红蛋白(标记的CPE)D２５抗体滴加至５００μLPBS重悬稀释
６
,到１×１加０个/mL的细胞中.室温下避光３０min
/.然后入２m重复１５L冷PBS,００rmin离心５min
);()洗涤,使用PMCs２BS洗涤后制备PBMCs悬液;
()染色,首先进行细胞表面染色,将３m３L磷酸盐缓
进行细胞内染色,于室温避光条件下孵育２h,将２
离心洗涤mL透膜缓冲液滴加至破膜剂重悬细胞中,,(最后加入５上机检测,设置min００μLPBS重悬;４)
相应对照管,采用B美国DFACSCalibur流式细胞仪(后加入１室温下５μL的PEＧC５标记的Fox３抗体,yp
,/避光３加入２m０minLPBS,１５００rmin离心５
,期组(和重度子痫前期组(轻度子痫前２４例)２６例)
检测.BD公司)
:作者,EＧmailnadini＠１６３．com.
). 作者简介:,基金项目:浙江省中医药管理局课题(李颖(主治中医师,本科,主要从事中医妇科研究. △ 通信２０１５ZA１２６１９８１－)
３３７２重庆医学２０１９年１０月第４８卷第１９期
＋＋＋
表１ ３组外周血CD４CD２５Fox３Trex±s)pg细胞情况比较(项目
＋＋＋７
(CD４CD２５Fox３Tre×１０)pg
)重度子痫前期组()轻度子痫前期组(n＝２４n＝２６
０．９４±０．１３２．５４±０．９５
０．６５±０．１１１．８３±０．８６
)对照组(n＝２５１．８７±０．１５５．１３±０．９８
FP＋＋＋＋/CD４CD２５Fox３TreCD４T(％)pg
２９．０８３＜０．０５１３．０５７＜０．０５
图１ 流式细胞仪分选图
＋＋＋
表２ 外周血CD４CD２５Fox３TreBMCsFox３mRNA水平比较(x±s)pg比例及Pp
项目
＋＋＋
(CD４CD２５Fox３Tre％)pg
)轻度子痫前期组(n＝２４
０．３３±０．０９１．２３±０．２４
)重度子痫前期组(n＝２６
０．１２±０．０３０．７９±０．１８
)对照组(n＝２５０．４９±０．１１３．５６±１．２６
F５．６２８
P＜０．０５
Fox３mRNAp１３．６６２＜０．０５
采用实时荧光定量PCR(realＧtimePCR,RTＧ
检测P具体步PCR)BMCsFox３mRNA表达情况,p
,骤如下:取上述实验制备的PBMCsPBS洗涤１次后去除P加入T收集细胞并提取总BS,rizol液１mL,/利用分光光度计测量A２最终计算RNA,A２６０８０,RNA样品的浓度及纯度.合成少量cDNA作为模
板,进行P按照说明书CR扩增.反应体系为２０μL,].水平.GAPDH和Fox３的引物序列参考文献[４p
２．２ ３组PBMCsFox３mRNA情况 轻度子痫前p
期组与重度子痫前期组PBMCsFox３mRNA水平p较对照组明显降低,而重度子痫前期组低于轻度子痫
＋＋
.子痫前期患者的C前期组(P＜０．０５)D４CD２５
＋＋＋＋
/CD４CD２５Fox３TreCD４T比例均低于轻度子pg),、.痫前期组(见表１图１P＜０．０５
＋＋＋
痫前期组的CD４CD２５Fox３Trepg细胞绝对数和
进行RTＧPCR反应.以磷酸甘油醛脱氢酶(GAPＧ
为内参,通过比较CDH)T值计算mRNA相对表达另取各组孕妇晨起８:经００空腹肘静脉血５mL,抗凝离心后获得血浆,按照游离雌三醇定量检测试剂盒(河南美凯生物科技有限公司,规格:采用４８份/盒)顺磁性颗粒化学发光免疫测定法操作测定患者外周血中游离雌三醇的水平.
＋
Fox３TreBMCsFox３mRNA水平呈正相pg比例及Pp
,),、.关(见表２图２r＝０．７７９P＜０．０５
＋＋＋
１．２．２ 观察指标 CD４CD２５Fox３Trepg细胞绝
＋＋＋＋
/对数、CD４CD２５Fox３TreCD４T比例、PBMCspg
Fox３mRNA表达水平及患者外周血中游离雌三醇的p水平.
１．３ 统计学处理 采用SPSS１９．０软件进行数据分析,计量资料以x±比较采用单因素方差分析s表示,和L以P＜SD法,０．０５为差异有统计学意义.２ 结 果
＋＋＋
２．１ ３组外周血CD４CD２５Fox３T细胞情况比p
＋较 轻度子痫前期组和重度子痫前期组的CD４
＋＋＋＋＋
CD２５Fox３TreD４CD２５Fox３pg细胞绝对数和Cp
＋
＋＋＋
图２ CD４CD２５Fox３TreBMCspg比例与P
Fox３mRNA水平的线性相关图p
２．３ ３组血清雌三醇情况比较 轻度子痫前期组[(/(和重度子痫前期组[６．１７±２．１５)mL]３．２８±g)/(血清雌三醇均低于对照组[１．１２mL]１１．３２±g
)/;同时,轻度子痫２．４５mL,F＝１５．２７９,P＜０．０５]g
＋＋＋
子痫前期患者的CD４CD２５Fox３Trepg比例与血
/).同时,重度子TreCD４T均低于对照组(P＜０．０５g
.前期组血清雌三醇高于重度子痫前期组(P＜０．０５)
重庆医学２０１９年１０月第４８卷第１９期３３７３
１５]
.如本研究结果中,低程度受病情严重影响[轻度子＋＋＋＋
/TreCD４CD２５Fox３TreCD４Tg细胞绝对数、pg
＋＋＋
＋＋＋
痫前期组与重度子痫前期组的CD４CD２５Fox３p
,清雌三醇水平呈正相关(见r＝０．５８４,P＜０．０５)
图３.
图３ C雌三醇水平的线性相关图
D４＋CD２５＋Foxp３＋
Treg比例与血清
讨 论
子痫前期是妊娠期妇女特有且较为常见的一种疾病,又称先兆子痫,即在高血压的情况下出现抽搐症状
[５]
相关死亡人数的,我国发病率约在大原因[６
]１０％~１６９％％,
,是造成孕产妇死亡的第孕产妇病死率占到妊娠
度血压升高.、轻在疾病早期度蛋白尿伴,患者可能无水肿,重度症患状者或会出出现现轻头
晕眼花、恶心呕吐、明显血压升高、蛋白尿增多等现
象,甚至抽搐昏迷,危及生命[
７Ｇ８]
据患者的临床症状、超声心动图.、胎心监护目前临床上一般根、脑磁共振(过合理使用硝苯地平等降压药进行降压治疗MRI)等检查及遗传病史来进行诊断治疗CT,用硫酸,或通镁解痉,卧床休息甚至终止妊娠等方式来尽可能降低患者死亡率,保护母婴健康.在孕早期及时补充钙剂
也是有效预防措施之一[
９
]子痫前期被认为是母.体免疫系统对滋养层父系
来源的抗原异常反应的结果,胚胎成功生长的关键是免疫耐受,而母体对胚胎无法产生足够的免疫耐受是子痫前期的发病机制之一[１０Ｇ１１]reg细胞有着抑制机体免疫活性的强大功能.由于CD４＋CD２５
＋
,
所以它在免疫耐受中扮演着重要角色,也是内环境稳定的守
护者,能够有效抑制机体对异体物质的排斥[１２Ｇ１３
]前临床上已无轻度子痫前期的诊断,为了便于本次研.目究,仍将患者根据病情轻重分为轻度和重度,从结果
来看,重度子痫前期组CD４＋CD２５＋
Treg细胞比例明
显低于轻度子痫前期组和对照组(P＜０,轻度子照组(P＜C０D．０４５)C,D也就是说２５Treg．０５痫前期组＋＋细胞比例也显)
著低于对CD４＋CD２５＋
Treg细胞与
子痫前期的发病机制具有相关性.
Fox３是一种存在于细胞质的转录因子,对D４＋CDp
２＋[１４]的特异性e５Treg细胞起到控制作用D２５＋
Tr作g细胞受用.正常Fo情xp
况３下m妊RN娠A和其,
转同时录蛋CD＋
白４质早期oxpCD４＋CD２５
＋但孕妇处于３＋
Treg细胞显著增加,
中期稍弱,分娩后显著减少,子痫前期会导致该细胞水平降低,降细胞(、P＜０C．D０５４度子痫前期),C同时D２５组(,重度子痫前期组患者指标均低于轻Foxp３Treg比例均低于对照组CD２５＋Foxp３＋TPreg＜０．０５比例及).子痫前期患者的CD４＋
平呈正相关.此外,雌激素水平在妊娠过程中发挥重PBMCsFoxp３mRNA水要作用,可通过调节免疫耐受影响孕妇的妊娠结
局[１６]
腺轴的.调在体外实验中节增加,研究发现雌激素还可通过对性
＋＋T测雌reg细胞数量增多Fo,x但具体机制尚未阐明p
３水平,同时使CD４,有学者推CD２５激素对免疫功能的调节作用可能通过调节
Fox３等诸多转录因子的表达而完成[１７
]抑制妊娠期p
能,作用也是举足轻重T细胞的明显偏移,增强其活.性雌,三促醇进可功.而本研究也证明轻度子痫前期组和重度子(痫前期组血清雌三P＜０．０５
高于重度子痫前期组),同时,轻度子痫前期组血清雌三醇也明显醇显著低于对照组
(４CD２P,证实了子痫前期状,５在相关性分析中发现子痫前期患者的
Foxp３＜T０r．e０g５态下CD＋＋＋
)
细胞数和雌三醇水平
出现显著下降CD４＋CD２５＋Foxp３＋Treg比例与血清雌三醇水平呈正相关,但二者间的作用机制有待进一步探究.综上所述,子痫前期患者TCD４＋CD２＋＋
可能与子痫前期的发病机制及免疫耐受有关reg细胞明显减少,
同时血清雌三醇也有所下降５Foxp
,３这.＋
C据重要地位D２５＋Foxp３＋
CD４
,后续研究应进一步探究子痫前期的发病
Treg细胞在子痫前期的发病机制中占机制,为临床防治提供理论依据.参考文献
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４＋CD２５＋
调
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