糖含量的测定

一、试验材料：苹果、梨、黄瓜等各种水果

二、试验目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主 要原

料和贮存物质。不同栽培条件，不同成熟度可以影响水果、蔬菜中糖类 的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜 品质的凹凸。

三、试验原理：

1 .糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物。糠醛或羟甲基糠醛进一步与蕙酮试 剂缩合

产生蓝绿色物质，其在可见光区620 nm波特长有最大汲取，且其光汲 取值在肯定范围内与糖的含量成正比关系。

2 .酮糖在肯定条件下和间苯二酚生成鲜红色物质，该物质在480 nm处有最大 汲取，

该方法可用来测定蔗糖。测定时先用碱与样品共热，破坏其中的还原 性糖，然后用间苯二酚测定蔗糖中的果糖部分。

3 .果糖与间苯二酚、盐酸共热生成的红色络合物在480 nm处汲取峰最高。

四、试剂配置：

80%乙醇 2 M NaOH

30 % HC1：用36 %的浓HCl配置。

葡萄糖、蔗糖和果糖标准液(lmg∕ml)：用蒸储水配置。

慈酮试剂：15Omg慈酮溶于100 ml稀硫酸(76 ml浓硫酸加入到30 ml水 中)。 0.1 %间苯二酚：0.1g间苯二酚溶于IOoml 95 %的乙醇，避光保存。

五、试验步骤 1、提取

取0.5 g植物组织，于2 ml 80%的乙醇中研磨后，转入两个2 ml离心管中，75°C 温浴

Iomin, 5000g离心5 min,收集上清于IOmI离心管中。沉淀用80 %乙醇 于75℃水浴重

复抽提两次，合并上清液后，用80%的乙醇定容至IOm1。提取 液用于可溶性总糖、果糖与蔗糖含量的测定。

注：将苹果的提取液稀释一倍。

2、可溶性总糖

取10 μl上述乙醇提取液，加入90 ul 80 %的乙醇，力U入3 ml禽:酮试剂［150 mg 蕙酮溶于100 ml稀硫酸（76 ml浓硫酸加入到30 ml水中）］,90℃保温15 min , 冷却后于62Onm处测吸光值。含量以μg・屋鲜重表示。用20-100 μg的葡萄糖 同法测定，作标准曲线（体系中加入20-100 Ul葡萄糖，再用80 %的乙醇补足 剩余体积）。

3、蔗糖

取100 μl乙醇提取液，加ι入200 μl 2 M NaOH, 100℃煮5 01亩，冷却后加入2 ml

30 %的HCl, 600 μl 0.1 %的间苯二酚（0.Ig间苯二酚溶于IOOml 95 %的乙醇）， 80℃

保温IOmin,冷却后于480nm处测吸光值。蔗糖含量以μg-g“鲜重表示。 用20-100 μg的蔗糖同法作标准曲线（体系中加入20-100 Ul蔗糖，再用80%的 乙醇补足剩余体积）。

4、果糖含量测定

取10 μl乙醇提取液,加入190 μl 80 %的乙醇、400 μl 0.1 %的间苯二酚和2400μl 30 %的HC1 , 80℃保温IOmin,冷却后于48Onm处测吸光值。果糖含量以μg父 鲜重表示。用20-100 μg的果糖同法作标准曲线（体系中加入20-100 Hl果糖， 80%的乙醇）o